Malattie genetiche. Glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

FOSFATASI- enzimi che catalizzano la scissione dei legami esterei nei monoesteri dell'acido fosforico con formazione di ortofosfato libero; appartengono alla classe delle idrolasi, una sottoclasse delle idrolasi monoestere del fosforo (EC 3.1.3).

F. sono presenti in tutti gli animali e organismi vegetali e occupano un posto importante nel metabolismo cellulare; biol. Il ruolo di F. è associato alla loro partecipazione al metabolismo dei carboidrati (vedi Metabolismo dei carboidrati), nucleotidi (vedi Acidi nucleici) e fosfolipidi (vedi Fosfatidi), nonché alla formazione del tessuto osseo (vedi Osso). I cambiamenti nell'attività di alcuni F. nel sangue servono come prezioso segno diagnostico per una serie di malattie. Una violazione geneticamente determinata della sintesi o dell'utilità enzimatica di alcuni enzimi è la causa di una grave malattia ereditaria (vedi Ipofosfatasia).

Per la natura della loro azione catalitica, tutti gli enzimi del fosforo sono fosfomonoesterasi, che scindono idroliticamente il legame estere. Il nome sistematico di questi enzimi include sempre il termine “idrolasi” (il nome “fosfatasi” è un nome provvisorio derivato dal nome del substrato). F. possono essere considerate fosfotransferasi (q.v.), poiché sono in grado di catalizzare il trasferimento di un residuo di fosfato a molecole di accettori diversi dall'acqua, ma poiché l'acqua è fisiologicamente l'accettore principale e più attivo, le fosfatasi sono classificate come idrolasi (q.v. ).

Specificità del substrato

La maggior parte dei F. sono tra gli enzimi (vedi) che hanno una specificità di substrato relativamente ampia. Tuttavia, alcuni F. si distinguono per una gamma limitata di substrati convertiti. Si tratta, prima di tutto, di enzimi che agiscono sui derivati ​​del fosforo degli zuccheri, nonché sulle nucleotidasi (vedi), che scompongono i mononucleotidi. In molti tessuti, gli enzimi sono presentati in molteplici forme che differiscono per le loro proprietà catalitiche e fisiche (vedi Isoenzimi). Fosfatasi da diversi bioli. fonti, si osservano anche differenze nella specificità del substrato e nell'attività catalitica. Alcuni enzimi mostrano somiglianze con enzimi appartenenti ad altri gruppi. Pertanto, ci sono fosforilazioni che possono catalizzare reazioni di transfosforilazione (vedi) o scindere il legame pirofosfato acido-anidride (vedi Pirofosfatasi). Ad esempio, la glucosio-6-fosfatasi (D-glucosio-b-fosfato fosfoidrolasi; EC 3.1.3.9) è molto simile nella specificità del substrato e nelle proprietà catalitiche alle fosfotransferasi (EC 2.7.1.62 e 2.7.1.79), così come alla pirofosfatasi inorganica (CE 3.6.1.1).

Meccanismo di azione

Per molti fosforo è stata stabilita la struttura tridimensionale delle loro molecole e sono state proposte chimiche dettagliate. meccanismi di azione catalitica. Si presuppone che diversi gruppi localizzati sulla superficie della molecola enzimatica nel centro attivo prendano parte al processo dell'atto catalitico. Uno di questi enzimi è la glucosio-6-fosfatasi. Questo enzima, associato alla frazione microsomiale delle cellule, insieme all'idrolisi del glucosio-6-fosfato, catalizza il trasferimento di un gruppo fosfato dal pirofosfato inorganico (vedi Fosforo) al glucosio (vedi), nonché la reazione di scambio tra glucosio e glucosio-6-fosfato. Studi sulla cinetica delle reazioni idrolitiche, transferasiche e di scambio (vedi Cinetica dei processi biologici) hanno dimostrato che il loro meccanismo ha la natura di un trasferimento a due stadi, in cui un fosfoenzima, o enzima fosforilico, si forma come composto intermedio. In questo caso, il gruppo fosfato trasferito nella molecola dell'enzima si lega al residuo di istidina (vedi). Per mostrare attività, la glucosio-b-fosfatasi richiede uno ione metallico bivalente. In conformità con il meccanismo di reazione proposto (con qualche semplificazione), lo ione metallico si lega al gruppo fosfato caricato negativamente del substrato e il residuo reattivo di istidina, che ha proprietà nucleofile, si lega all'atomo di fosforo, che porta alla formazione di un fosfoenzima. Quest'ultimo poi subisce l'idrolisi o interagisce con i gruppi nucleofili delle molecole accettrici (ad esempio, con gruppi idrossilici zuccheri) con la formazione prodotti finali reazione e rilascio dell'enzima privo di fosfati.

Non tutte le reazioni della fosfatasi si verificano con la formazione di un fosfoenzima intermedio, in cui il residuo di istidina viene fosforilato. Quando la reazione è catalizzata dalla fosfatasi alcalina (EC 3.1.3.1), isolata da tessuti di mammiferi o batteri, il residuo di serina nella molecola dell'enzima subisce fosforilazione (vedi). L'enzima è una metalloproteina contenente zinco (vedi Metalloproteine), in cui 2-3 grammi di atomi di zinco per 1 mole di proteina. Gli ioni di zinco o altri metalli sono necessari per l'attività catalitica della fosfatasi alcalina ed eventualmente per stabilizzare la struttura nativa della molecola dell'enzima. I cationi bivalenti Co 2+, Mg 2+ e Mn 2+ attivano enzimi isolati da vari tessuti, mentre gli ioni Be 2+ e gli agenti complessanti (ad esempio EDTA) sono inibitori di questi enzimi. Il meccanismo d'azione della fosfatasi alcalina è simile al meccanismo postulato per la glucosio-6-fosfatasi, ma l'atomo di fosforo non interagisce con l'istidina, ma con il residuo di serina della molecola dell'enzima.

Per altre fosfatasi, ad esempio la fruttosio bisfosfatasi (EC 3.1.3.11), non esistono ancora dati sulla formazione del fosfoenzima. È possibile che la reazione enzimatica che catalizza avvenga mediante un meccanismo concertato in una fase anziché tramite trasferimento in due fasi.

Metodi di determinazione

La maggior parte dei metodi per determinare l'attività di F. si basa sulla misurazione della quantità di fosfato inorganico (formato a seguito della reazione catalizzata da questi enzimi) utilizzando vari metodi colorimetrici (vedi Colorimetria), che sono associati alla riduzione dell'acido fosfomolibdeno. Il modo classico per determinare l'attività di F. è il metodo Bodansky che utilizza il beta-glicerofosfato come substrato (vedi metodo Bodansky). Nella pratica è spesso più conveniente misurare la quantità di fenolo rilasciato dall'arilfosfomonoestere. Pertanto, per determinare l'attività della fosfatasi alcalina nel siero del sangue, il metodo King-Armstrong (vedi metodo King-Armstrong), il metodo Jenner-Kay basato sullo stesso principio o le loro modifiche sono ampiamente utilizzati. Il metodo più sensibile per determinare l'attività della fosfatasi alcalina nel siero del sangue è il metodo Bessey (vedi metodi Bessey). Per determinare l'attività della fosfatasi acida, il metodo Gutman-Gutman è ampiamente utilizzato. Questi metodi standard per determinare l'attività del fosforo nel siero sanguigno prevedono l'uso di esteri monofosforici di fenolo, n-nitrofenolo, fenolftaleina o timollftaleina come substrati. I fenoli liberi (vedi) formati a seguito della reazione vengono determinati spettrofotometricamente (vedi Spettrofotometria). I metodi per misurare l'attività della fosfatasi utilizzando substrati fluorescenti come il beta-naftil fosfato e la 3-O-metilfluoresceina fosfato sono altamente sensibili (vedi Fluorocromi). Tracce di pirofosfato marcato con 32P possono essere determinate mediante precipitazione con molibdato di ammonio e trietilammina in presenza di un veicolo non marcato. La sensibilità di questo metodo con radioisotopi è di ca. 3 ng.

Fosfatasi acida e alcalina

Tra il fosforo, i due gruppi di enzimi più ampiamente distribuiti e studiati sono le fosfatasi alcaline e acide. Possedendo un'ampia specificità di substrato, questi enzimi differiscono notevolmente nelle loro proprietà a seconda della fonte da cui sono isolati. I loro substrati possono essere vari monoesteri dell'acido ortofosforico, sia alifatici, ad esempio glicerolo-1- e glicerolo-2-fosfati, sia aromatici, ad esempio. 4-nitrofenilfosfato; allo stesso tempo questi enzimi sono inattivi nei confronti dei di-esteri e dei tri-esteri acidi fosforici(cm.). Una grande differenza tra il fosforo acido e quello alcalino si osserva nella loro azione sugli eteri contenenti zolfo. La fosfatasi alcalina idrolizza, ad esempio, i monoesteri S-sostituiti dell'acido tiofosforico. cpsteamina-S-fosfato; Per l'azione della fosfatasi acida è apparentemente necessario l'ossigeno del legame estere scisso: la fosfatasi acida idrolizza, ad esempio, i monoesteri O-sostituiti dell'acido tiofosforico. O-4-nitrofenilfosfato.

La fosfatasi alcalina (fosfomonoesterasi; EC 3.1.3.1) mostra la massima attività a pH 8,4-9,4 e catalizza l'idrolisi di quasi tutti i fosfomonoesteri con la formazione di fosfato inorganico e del corrispondente alcol, fenolo, zucchero, ecc. La fosfatasi alcalina si trova nella maggior parte dei tessuti e fluidi negli esseri umani e negli animali, nonché nelle piante e nei microrganismi. Negli esseri umani, nell'epitelio si osserva un'attività particolarmente elevata di questo enzima intestino tenue, reni, ossa, fegato, leucociti, ecc. Una fonte ampiamente utilizzata di fosfatasi alcalina è la cartilagine ossificante, il che indica il possibile ruolo di questo enzima nei processi di calcificazione del tessuto osseo. La presenza di fosfatasi alcalina attiva è caratteristica dei tessuti associati al trasporto dei nutrienti; è spesso presente nei tessuti in via di sviluppo e negli organi secretori. La fosfatasi alcalina è praticamente assente nei muscoli, nel tessuto connettivo maturo e nei globuli rossi; anche le pareti dei vasi sanguigni e la cartilagine ialina sono povere di questo enzima.

La fosfatasi alcalina ha uno spettro isoenzimatico estremamente ampio. Utilizzando metodi immunochimici ed elettroforetici, è stato dimostrato che esistono differenze fisico-chimiche e catalitiche pronunciate tra i suoi isoenzimi (vedi). Durante l'elettroforesi in un gel di poliacrilammide, la fosfatasi alcalina ottenuta dalla mucosa intestinale rimane vicino al punto in cui la soluzione enzimatica è stata aggiunta al gel (linea di partenza), e la fosfatasi alcalina isolata dal fegato si sposta verso l'anodo insieme alla frazione di ά1- o α2-globuline (riso.). La separazione elettroforetica della fosfatasi alcalina sierica con un aumento della sua attività consente di stabilire l'origine ossea o epatica dell'enzima, il cui rilascio ha causato l'aumento dell'attività della fosfatasi alcalina nel sangue. Nel siero sanguigno normale, il fegato sembra essere la principale fonte di fosfatasi alcalina. L'aspetto dell'isoenzima, caratteristico della mucosa dell'intestino tenue, è sotto controllo genetico: è dimostrato che la sua presenza nel sangue è tipica delle persone con gruppo sanguigno zero.

La distribuzione dell'attività enzimatica anche in una formazione morfologica è disomogenea. Pertanto, l'attività della fosfatasi alcalina è diversa in diversi dipartimenti nell'intestino, nella corteccia del rene è molto più alto che nel cervello. L'attività della fosfatasi alcalina è influenzata da fattori ormonali: l'attività dell'enzima nel sangue diminuisce dopo l'ipofisectomia, la castrazione e anche a seguito dell'uso di farmaci corticosteroidi. Dopo la somministrazione di tiroxina, l'attività enzimatica aumenta. Negli umani vari fattori, causando stress, contribuiscono ad un aumento dell'attività della fosfatasi alcalina nei leucociti.

L'attività della fosfatasi alcalina nel sangue dipende in una certa misura dall'età e dal sesso. Negli uomini, l'attività dell'enzima nel sangue è superiore del 20-30% rispetto alle donne, tuttavia, durante la gravidanza, le donne sperimentano un aumento significativo (2-3 volte) dell'attività di questa fosfatasi, che può essere spiegato dal crescita dell’embrione, in particolare il processo di osteogenesi fetale.

Le funzioni della fosfatasi alcalina in ciascun tessuto non sono state ancora stabilite con precisione. Nel tessuto osseo sembra essere coinvolto nei processi di calcificazione. In una cellula, la fosfatasi alcalina è solitamente associata alla membrana lipoproteica e in alcuni microrganismi, come dimostrato da studi istochimici. ricerca, si trova tra la membrana e la parete cellulare. La localizzazione dell'enzima sulle superfici assorbenti indica il suo possibile ruolo nel trasporto transmembrana.

Mol. il peso (massa) della fosfatasi alcalina isolata da diverse fonti varia tra 70.000-200.000; l'enzima della placenta umana, ottenuto in forma cristallina, ha una mol. peso 125.000.Si ritiene che la sua molecola sia costituita da due subunità di uguali mol. peso, ma non identici tra loro. I risultati degli studi genetici indicano l'esistenza di tre tipi di subunità della fosfatasi alcalina, varie combinazioni delle quali danno sei varianti fenotipiche che differiscono nella mobilità elettroforetica e rappresentano le principali forme multiple (isoforme) dell'enzima. Si presume che la differenza nella composizione delle subunità sia dovuta alla presenza nelle molecole di alcune fosfatasi alcaline di una parte di carboidrati legata covalentemente alla proteina.

La fosfatasi alcalina è stabile a valori di pH neutri e alcalini, ma è sensibile all'acidificazione. Nell'intervallo di pH compreso tra 7,0 e 8,0 e ad una concentrazione di ioni Zn 2+ superiore a 10 -5 M, l'enzima forma un tetramero attivo che lega 16 ioni Zn 2+. La fosfatasi alcalina microbica, isolata da diverse fonti, è in grado di formare ibridi attivi utilizzando monomeri di diversi enzimi, il che indica la vicinanza della struttura secondaria delle fosfatasi microbiche, nonostante le differenze nella composizione e nell'immunolo. proprietà delle subunità.

La specificità del substrato delle fosfatasi alcaline provenienti da fonti diverse non è la stessa. Pertanto, un enzima del tessuto osseo si idrolizza tutta la linea composti del fosforo, compresi esosi fosfati, glicerofosfati, etil fosfato, adenilato e fenil fosfato. Enzima da Escherichia coli in grado di idrolizzare vari polifosfati, compresi metafosfati con catene di diversa lunghezza, nonché fosfoserina, fosfotreonina, piridossal fosfato e fosfocolina. Un certo numero di fosfatasi alcaline provenienti da tessuti di mammiferi a pH 8,5 mostrano attività di irofosfatasi e un enzima della mucosa intestinale del pollo idrolizza la cisteamina S-fosfato e altri S-fosfati per formare fosfato inorganico e il corrispondente tiolo. Alcune fosfatasi alcaline hanno anche attività transferasica e, nelle reazioni di transfosforilazione, possono catalizzare il trasferimento del fosfato dal fosfoestere al gruppo alcolico dell'accettore.

Pertanto, la fosfatasi alcalina è in grado di idrolizzare composti contenenti legami P - F, P - O - C, P - O - P, P - S e P - N e la reazione catalizzata comporta il trasferimento di fosfato da un tipo donatore

(dove X può essere rappresentato da fluoro, ossigeno, zolfo, azoto e R può essere un atomo di idrogeno, un sostituente alchilico o del tutto assente) ad un accettore del tipo R" - OH (dove R" è rappresentato da un atomo di idrogeno o un sostituente alchilico) con la scissione del legame P - X Poiché l'enzima catalizza anche la reazione inversa, la specificità dell'accettore si estende a tutti i composti di tipo R - CN. La fosfatasi alcalina catalizza il trasferimento solo del fosfato terminale; una caratteristica dell'enzima è che le velocità relative di idrolisi dei vari substrati sono molto simili.

Determinazione dell'attività della fosfatasi alcalina nel sangue valore diagnostico per malattie del fegato e sistema scheletrico. Pertanto, l'iperfosfatasiemia si nota con hron. malattie del fegato, sarcoidosi (vedi), tubercolosi (vedi), amiloidosi (vedi) e linfogranulomatosi (vedi). Con il rachitismo (vedi), nel 65% dei casi è stato notato un aumento dell'attività (a volte 2-4 volte) della fosfatasi alcalina. La malattia di Paget (vedi malattia di Paget), così come il sarcoma osteogenico (vedi), il diabete fosfato (vedi) sono accompagnati da un aumento significativo dell'attività della fosfatasi alcalina nel siero del sangue.

Geneticamente determinato bassa attività fosfatasi alcalina nel sangue (ipofosfatasia) provoca gravi malattia ereditaria accompagnato da anomalie scheletriche dovute all'interruzione dei processi di ossificazione; Il difetto enzimatico viene ereditato con modalità autosomica recessiva.

Molto diffusa in natura è anche la fosfatasi acida (fosfomonoesterasi; EC 3.1.3.2). Si trova nel lievito, nelle muffe, nei batteri, nei tessuti vegetali e animali e nel biolo. liquidi Nell'uomo l'attività della fosfatasi acida nella ghiandola prostatica è particolarmente elevata. I globuli rossi contengono anche molta fosfatasi acida. Estratto di tessuto ghiandola prostatica mostra un'attività fosfatasi in un ambiente leggermente acido, che è quasi 1000 volte superiore all'attività fosfatasi degli estratti del fegato o dei reni. Istochimica. gli studi mostrano che l'enzima è contenuto nel cap. arr. V epitelio ghiandolare ghiandola prostatica; grandi quantità enzima presente negli spermatozoi. Esiste una stretta connessione tra la sintesi della fosfatasi acida nella ghiandola prostatica e il contenuto degli ormoni sessuali (vedi). Con una bassa concentrazione di androgeni (vedi) nelle urine, si nota una bassa attività della fosfatasi acida negli spermatozoi. Lo stesso si osserva con il criptorchidismo (vedi) e l'ipogonadismo (vedi).

Il pH ottimale per la fosfatasi acida è compreso tra pH 4,7 e 6,0 (tuttavia, l'attività della fosfatasi acida derivata dalla milza raggiunge il picco a valori di pH compresi tra 3,0 e 4,8). Spettro del substrato e velocità di idrolisi di vari substrati fosfatasi acida E fosfatasi alcalina ben diversa. Pertanto, la fosfatasi acida non è in grado di idrolizzare i monoesteri S-sostituiti dell'acido tiofosforico, mentre i monoesteri O-sostituiti vengono attivamente idrolizzati da essa nelle stesse condizioni (nel caso della fosfatasi alcalina, si osserva il contrario).

Mediante separazione elettroforetica della fosfatasi acida isolata da vari tessuti, è stato stabilito che questo enzima ha quattro componenti: A, B, C e D. La combinazione dei componenti ABD è dominante nei reni; BD - nel fegato, nell'intestino, nel cuore e nei muscoli scheletrici; il componente B predomina nella pelle e D nel pancreas; la componente C è presente nella placenta e non si trova in nessun organo del corpo adulto. In generale, la combinazione BD è caratteristica della fosfatasi acida nella maggior parte dei tessuti umani ad eccezione della pelle, dei reni e del pancreas. Tutti e 4 i componenti elettroforetici sono isoforme geneticamente determinate della fosfatasi acida. Caratteristica la fosfatasi acida è sensibile all'inattivazione all'interfaccia; l'aggiunta di tensioattivi (vedi Detergenti) alla soluzione enzimatica protegge la fosfatasi acida dall'inattivazione.

Mol. il peso della fosfatasi acida è diverso per enzimi ottenuti da fonti diverse, ad esempio, due isoenzimi molecolari immunologicamente diversi della fosfatasi acida della ghiandola prostatica umana hanno una mole. peso 47.000 e 84.000.

La determinazione dell'attività della fosfatasi acida nel siero del sangue è importante Test diagnostico quando viene rilevato il cancro alla prostata (vedi Prostata, patologia). Nei pazienti con cancro alla prostata senza metastasi, un aumento dell'attività della fosfatasi acida nel sangue viene rilevato nel 25% dei casi e nel cancro alla prostata con metastasi tumorali ad altri organi - nell'80-90% dei casi. La dinamica dell'attività di questo enzima nel sangue nel cancro alla prostata può servire come criterio per l'efficacia della terapia.

Anche la determinazione della fosfatasi acida è di notevole importanza in medicina legale. Alta attività l'enzima nello sperma lo rende possibile grande affidabilità identificare i punti sospetti con un dottore in chimica. esame delle prove fisiche.

Metodi istochimici per la rilevazione delle fosfatasi

La fosfatasi alcalina viene rilevata in istochimica utilizzando il metodo Gomori, metodi che utilizzano tetrazolio, azoindoxil e il metodo di accoppiamento azoico. Quando si utilizza il metodo del tetrazolio e il metodo dell'azo accoppiamento, si consiglia di utilizzare sezioni al criostato trattate con acetone, nonché sezioni non fissate al criostato. I metodi con sali metallici richiedono l'uso di sezioni criostatate fissate in formaldeide o sezioni congelate dopo la fissazione di blocchi di tessuto in formaldeide o glutaraldeide. Il metodo Gomori è il più consigliato, seguito dai metodi che utilizzano tetrazolio e azoindoxil. Il metodo con tetrazolio per la determinazione della fosfatasi alcalina utilizza 5-bromo-4-cloro-3-indossil fosfato, sale di toluidina, blu nitrotetrazolio, tampone Tris-HCl 0,1 - 0,2 M o tampone acetato di veronal pH 9,2-9, 4. Reazioni di accoppiamento con azosio e metodo del tetrazolio per l'istochimica. la rilevazione della fosfatasi alcalina è più sensibile rispetto al metodo Gomori, tuttavia, la diffusione dell'enzima che si verifica quando si utilizzano naftoli e sali di tetrazolio può impedire la determinazione della sua esatta localizzazione.

Metodo Gomori utilizzando sali metallici

Mezzo di incubazione:

Soluzione di alfa-glicerofosfato al 3% 10 ml

2 -10% Soluzione medinale 10 ml

2% soluzione di cloruro calcio CaCl 2 (anidro) 15 ml

2% soluzione di solfato magnesio MgSO 4 10 ml

acqua distillata 5 ml

Volume totale 50ml

Il mezzo di incubazione viene accuratamente miscelato e, se torbido, filtrato. Incubare per 1-60 minuti. a 37° o a temperatura ambiente, quindi scaricare il mezzo di incubazione, lavare le sezioni in acqua corrente, trasferire in una soluzione all'1 - 2% di cloruro di cobalto CoCl 2 o altra sale solubile cobalto (acetato o nitrato di cobalto) per 5 minuti. Successivamente lavare in acqua corrente per 2-5 minuti. Quando si incubano le sezioni non fissate, è necessario effettuare la postfissazione a temperatura ambiente in una soluzione di paraformaldeide al 4% per 2 - 5 minuti. e sciacquare sotto acqua corrente per 2 minuti. Le sezioni vengono trattate con soluzioni di solfato di ammonio a concentrazione crescente (0,1 - 1%) per 2 minuti. e lavati in acqua corrente per 10 minuti, dopodiché vengono posti in gel di glicerina o sciroppo di Apati oppure (dopo disidratazione) in etellane o mezzo simile. I siti di localizzazione della fosfatasi alcalina diventano neri. Le reazioni di controllo vengono effettuate senza aggiungere substrato al mezzo di incubazione.

Metodo di Barston dell'azo accoppiamento simultaneo

Mezzo di incubazione:

naftolo AS, AS-MX, AS-D, AS-B1 o naftolo fosfato AS-TR 10 - 25 mg disciolto in sale di diazonio stabile (N, N "-dimetilformammide o dimetilsolfossido) 0,5 ml

Tampone veronal acetato o Tris-HCl 0,1 - 0,2 M, pH 8,2-9,2 50 ml

blu forte B, BB, RR, rosso forte TR, blu forte VRT (blu variamin, (gol RT), blu forte VB (blu varimin B) o viola forte B 50 mg

Il mezzo di incubazione viene accuratamente miscelato e filtrato. Al posto del sale stabile di diazonio si possono utilizzare 0,5 ml di nuova fucsina esazotata appena preparata. In questo caso il valore di pH desiderato viene stabilito aggiungendo goccia a goccia soda caustica. Incubare per 5 - 60 minuti. a 37° oa temperatura ambiente. Il mezzo di incubazione viene drenato, le sezioni vengono sciacquate in acqua distillata, poste in una soluzione di formaldeide al 4% per diverse ore a temperatura ambiente, quindi lavate in acqua corrente, se necessario, i nuclei vengono colorati con rosso forte o ematossilina e racchiusi in glicerina gel o sciroppo di Apati. A seconda del tipo di sale di diazonio contenuto nel mezzo di incubazione, le strutture con attività enzimatica della fosfatasi alcalina si colorano di blu-viola o rosso.

Per istochimico Per la rilevazione della fosfatasi acida, si consiglia di utilizzare sezioni al criostato o congelate dopo la fissazione preliminare in formaldeide, nonché sezioni al criostato congelate, asciugate e ricoperte di celloidina e sezioni al criostato congelate e ricoperte di celloidina. migliori risultati ottenuto fissando i tessuti con glutaraldeide o formaldeide. Per identificare l'enzima vengono utilizzate reazioni di accoppiamento azoico, metodo Gomori e reazioni indigogene. Il metodo di azo accoppiamento simultaneo con naftolfosfati e n-rosanilina ekeazotata o nuova fucsina è considerato universale. Il secondo metodo più comunemente utilizzato è il metodo indigogenico che utilizza il 5-bromo-4-cloro-3-indossil fosfato come substrato. Il metodo Gomori consente di identificare con precisione i lisosomi (vedi).

Metodo Gomori con sali metallici (modificato)

Mezzo di incubazione:

Tampone acetato 0,1 M, pH 5,0 o 6,0 50 ml

0,24% soluzione di nitrato piombo 50 ml

Soluzione di sodio alfa-glicerofosfato al 3% o soluzione di sodio citidina monofosfato allo 0,1% 10 ml

Volume totale 110 ml

Il mezzo di incubazione viene miscelato bene e lasciato riposare per 15-30 minuti. a temperatura di incubazione, quindi filtrato. L'incubazione viene effettuata in cuvette a 37°C per 10-60 minuti. oppure a temperatura ambiente per un massimo di 2 ore, le sezioni fluttuanti possono essere incubate. Il mezzo di incubazione viene drenato, le sezioni vengono sciacquate in due cambi di acqua distillata per 1 minuto ciascuno. in ciascuno e inserito nello 0,5 - 1% soluzione gialla solfuro di ammonio per 1 - 2 minuti. Sciacquare nuovamente in acqua distillata e immergere nel gel di glicerina o nello sciroppo di Apati. Le strutture con attività di fosfatasi acida appaiono marroni.

Metodo di azo accoppiamento simultaneo con naftol eteri AS

Mezzo di incubazione:

naftolo fosfato AS-BI o naftolo AS-TR 20 - 25 mg disciolti in N,N"-dimetilformammide - 1 ml

N-rosanilina esazotata tamponata o nuova fucsina (1,5 - 4,5 ml di n-rosanilina esazotata o 1,25 ml di nuova fucsina vengono sciolti in 45,5 - 48,5 ml di soluzione di acetato di sodio CH 3 CONa 3H 2 O all'1,36-2,72% o 48,75 ml di 0,1 Tampone acetato sieronale M, pH circa 6,0, regolato a pH 5,0 - 5,5) - 50 ml

Volume totale 51 ml

Il mezzo di incubazione viene accuratamente miscelato e filtrato. Incubare per 30 - 60 minuti. a 37° o 1-2 ore. a temperatura ambiente oppure per alcune ore (giorni) in frigorifero a +4°. Il mezzo di incubazione viene drenato, le sezioni vengono sciacquate in acqua distillata e poste in una soluzione di formaldeide al 4% per diverse ore a temperatura ambiente. Sciacquare con acqua corrente, se necessario, colorare i nuclei con ematossilina e racchiuderli in gel di glicerina o sciroppo di Apati. Le strutture con attività di fosfatasi acida sono colorate in rosso.

Metodo dell'azoindossile secondo Gossrau

Mezzo di incubazione: sale di toluidina di 5-bromo-4-cloro-3-indossil fosfato 1,5 - 3 mg disciolto in 0,075 - 0,15 ml di tampone acetato N,N"-dimetilformammide 0,1 M, pH 5,0 10 ml

Fucsina nuova esazotata 0,25 ml

o blu forte B 5 -10 mg

Volume totale ~10ml

Il mezzo di incubazione viene accuratamente miscelato e filtrato, le sezioni attaccate o fluttuanti vengono incubate per 15-60 minuti. a 37°. Il mezzo di incubazione viene drenato, le sezioni vengono risciacquate in acqua distillata e poste in una soluzione di formaldeide al 4% per diverse ore a temperatura ambiente, quindi risciacquate in acqua corrente e poste in acqua distillata, dopodiché vengono racchiuse in gel di glicerina o sciroppo di Apati . Le strutture con attività di fosfatasi acida appaiono bruno-bluastre.

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P. L. Ivanov (biochimica), A. G. Ufimtseva (storia).

Questa è la forma più grave di glicogenosi, la cui gravità immediata è direttamente correlata alla possibilità di manifestazioni acute di ipoglicemia, acidosi e talvolta emorragia.

Sintomi. Questa glicogenosi si manifesta a partire dalle prime settimane di vita. L'addome aumenta di volume. Dopo alcune ore di digiuno compaiono segni di ipoglicemia: fame imperiosa, pallore, sudore abbondante, meno spesso malessere generale e convulsioni. All'esame, il bambino rivela un certo grado di obesità sul viso e sul tronco, con guance arrotondate che contrastano con gli arti sottili. C'è un significativo ingrossamento del fegato, a volte fino alle creste ossa iliache, consistenza solida; la palpazione del bordo inferiore del fegato è spesso difficile. Un bambino più grande può sviluppare xantomi e gradualmente manifestare un grave ritardo della crescita.

Dati di laboratorio. Le conseguenze biochimiche della carenza di glucosio-6-fosfatasi si rivelano abbastanza facilmente studiando il ciclo glicemico, che rivela una scarsa tolleranza all'alimentazione ritardata. Infatti, il glucosio viene rilasciato solo sotto l'influenza dell'amilo-1,6-glucosidasi; le molecole di glucosio-1-fosfato, rilasciate sotto l'influenza del sistema fosforilasi, e i metaboliti della neoglucogenesi portano alla formazione di glucosio-6-fosfato. Pertanto, 3-4 ore dopo il pasto, si verifica una rapida diminuzione dei livelli di glucosio, mentre aumenta l'acidemia lattica. Questi disturbi riguardano il metabolismo dei carboidrati, dei lipidi e acido urico.

Clinicamente, l’ipoglicemia è abbastanza ben tollerata, probabilmente perché il cervello utilizza substrati diversi. Questa ipoglicemia è accompagnata da ipoinsulinismo periferico, come evidenziato dalla natura paradiabetica della curva iperglicemica durante il test da sforzo, nonché da una diminuzione della curva di assorbimento del glucosio per via endovenosa e da un aumento insufficiente dell'insulinemia dopo la somministrazione di glucosio. Questi cambiamenti della glicemia si combinano con un aumento del contenuto di acido lattico e piruvico nel sangue. Il primo può aumentare in modo molto significativo, raggiungendo gli 800-1000 mg/l; ciò provoca uno stato di acidosi cronica che può scompensarsi improvvisamente. Sotto questo aspetto appaiono pericolosi il ritardo nell'alimentazione e le infezioni intercorrenti.

I disturbi del metabolismo dei grassi si osservano costantemente sotto forma di aspetto lattiginoso del siero del sangue, un aumento significativo dei trigliceridi, dei fosfolipidi e del colesterolo totale nel sangue. Anche i NEFA circolanti sono elevati. Questi cambiamenti nel metabolismo dei grassi si manifestano citologicamente sotto forma di accumulo di grasso nel fegato, combinato vari gradi con accumulo di glicogeno.

Si osserva spesso un aumento dell'acido urico nel sangue che può superare i 120 mg/l. Ciò spiega la possibilità della comparsa di tofi urati dopo qualche anno e, successivamente, di attacchi di gotta o di nefropatia. Il meccanismo dell’iperuricemia è probabilmente controverso. È principalmente associato ad una diminuzione della clearance renale dell'acido urico rispetto all'escrezione acidi organici, soprattutto acido lattico. È stata inoltre stabilita una maggiore sintesi di acido urico da glucosio-6-fosfato.

Altre anomalie osservate comprendono l'aumento del volume dei reni, che di solito non sono palpabili a causa dell'epatomegalia, ma sono chiaramente visibili radiograficamente. Viene rilevata l'osteoporosi, all'origine della quale si assume il ruolo dell'ipercortisolismo cronico; possibile trombopatia con aumento del numero di piastrine nel sangue; Il tempo di sanguinamento può essere prolungato, il che è associato alla disfunzione delle placche. Le conseguenze possono essere drammatiche, sotto forma di sanguinamento spontaneo o provocato, talvolta fatale. Il rilevamento della trombopatia è necessario durante un intervento chirurgico o una biopsia epatica. I test di funzionalità epatica sono generalmente normali, ad eccezione di aumenti persistenti ma lievi delle transaminasi sieriche.

Lo studio del metabolismo dei carboidrati ha un duplice scopo: determinare la tolleranza individuale del bambino all’assunzione ritardata di cibo e valutare indirettamente l’attività della glucosio-6-fosfatasi.

Valutare la tolleranza all’assunzione ritardata del cibo è di fondamentale importanza poiché determina il ritmo del mangiare. La tolleranza viene valutata studiando il ciclo glicemico e i livelli di glucosio prima di ogni pasto.

I test funzionali consentono di determinare indirettamente la carenza di attività della glucosio-6-fosfatasi, che è più conveniente rispetto al metodo diretto per determinare l'attività enzimatica, che richiede l'ottenimento di un frammento epatico mediante una biopsia. Sono stati proposti diversi test: con glucagone (0,1 mg/kg, in totale non più di 1 mg, per via endovenosa o intramuscolare); con un carico di galattosio (1 g/kg per via endovenosa). La probabilità di deficit di glucosio-6-fosfatasi è elevata se questi test non determinano un aumento dei livelli di glucosio; quest'ultima continua addirittura a diminuire durante la prova a causa del continuo digiuno richiesto per la prova. Data la scarsa tolleranza alla fame, questi vari test andrebbero eseguiti solo dopo 3-4 ore di digiuno. È tipico di una glicogenesi di questo tipo che il galattosio introdotto scompaia dal sangue più velocemente che nei bambini sani. Con questi test si riscontra un netto aumento del livello di acido lattico, già elevato allo stato iniziale. Per questo motivo, e a causa del rischio di ipoglicemia, si dovrebbe essere pronti a interrompere il test se il minimo segno intolleranza e somministrare glucosio e bicarbonato di sodio per via endovenosa.

La prova del deficit di glucosio-6-fosfatasi è stata ottenuta anche mediante determinazione diretta dell'enzima in un frammento di fegato ottenuto da una biopsia tramite puntura eseguita con emostasi normale. La biopsia epatica consente l'esame istologico. Le cellule del fegato sono più grandi del normale, leggere, ravvicinate, con confini chiari, creando generalmente un'immagine di tessuto "vegetale". I nuclei sono chiaramente visibili, talvolta vacuolati, e le cellule epatiche spesso contengono numerosi vacuoli contenenti grasso. La colorazione con carminio di Best o con il reagente di Schiff ne evidenzia, previa buona fissazione, la presenza grande quantità glicogeno, che scompare dopo l'esposizione all'amilasi.

La quantità di glicogeno nel fegato aumenta di oltre 5-7 g per 100 g di fegato. La reazione allo iodio in questo glicogeno è normale. L'attività della glucosio-6-fosfatasi, misurata mediante il rilascio di fosforo inorganico dal glucosio-6-fosfato come substrato, è assente o molto debole.

Fluire. Il decorso della glicogenosi di tipo I è particolarmente grave. Nei primi anni di vita, il bambino è a rischio di attacchi di ipoglicemia, che possono influenzare lo sviluppo psicomotorio, nonché frequenti esacerbazioni di acidosi cronica. Attacchi di ipoglicemia e acidosi sono facilmente provocati da infezioni, interventi chirurgici e digiuno. La necessità di pasti ripetuti porta spesso a grave anoressia, che a sua volta aumenta il rischio di attacchi di ipoglicemia e acidosi. In diversi casi sono state osservate complicanze emorragiche, talvolta fatali.

Diventa gradualmente evidente un significativo ritardo della crescita, mentre la tolleranza al digiuno sembra migliorare. Durante l'adolescenza insorgono problemi dovuti a gravi ritardi nella crescita e nella pubertà, ipercolesterolemia persistente e talvolta complicazioni legate all'iperuricemia. Con l'osservazione a lungo termine, a questi bambini vengono spesso diagnosticati adenomi epatici e talvolta anche epatocarcinomi. Tre su cinque dei nostri bambini sopra i 3 anni avevano diversi adenomi epatici.

Manifestazioni cliniche. Il deficit di glucosio-β-fosfatasi, o malattia di von Gierke, è una malattia autosomica recessiva. disordine genetico, che si verificano con una frequenza di 1:100000-1:400000. Di solito si manifesta nei primi 12 mesi di vita con ipoglicemia o epatomegalia. A volte l’ipoglicemia viene rilevata immediatamente dopo la nascita e solo in rari casi potrebbe non essere rilevata per tutta la vita del paziente. A caratteristiche peculiari Questa condizione include guance spesse, viso rotondo, addome sporgente a causa di grave epatomegalia e braccia e gambe assottigliate. L'iperlipidemia può causare xantomatosi eruttiva e lipemia retinica. La splenomegalia è solitamente lieve o assente, anche se un forte ingrossamento del lobo sinistro del fegato può talvolta essere confuso con un ingrossamento della milza. Durante i primi mesi di vita, la crescita del bambino solitamente non è compromessa, ma poi viene ritardata e la maturazione ritardata. Sviluppo mentale, di regola, non soffre, ad eccezione delle conseguenze dell'ipoglicemia.

Affilato sintomi gravi l'ipoglicemia può essere causata da un forte calo dei livelli di zucchero nel sangue (inferiore a 150 mg/l). Il livello degli enzimi epatici, se aumentato, è insignificante. Per diagnosticare questa condizione è importante determinare il livello di lattato nel sangue, anche se in un bambino ben nutrito potrebbe rientrare nel range di normalità. Tuttavia, la chetosi si sviluppa relativamente raramente. L'iperlipidemia è spesso determinata sullo sfondo di un aumento dei livelli sia di colesterolo che di trigliceridi. L'ipertrigliceridemia può essere estremamente pronunciata (i livelli di trigliceridi talvolta raggiungono 50-60 g/l). L’iperuricemia è spesso associata a una ridotta escrezione renale e a un’aumentata produzione di acido urico. Dopo la pubertà, l’iperuricemia diventa spesso più grave. I livelli di glucosio nel plasma aumentano leggermente dopo la somministrazione di epinefrina o glucagone, così come i livelli di glucosio nel sangue dopo la somministrazione di galattosio. Gli esami a raggi X e ad ultrasuoni rivelano un aumento delle dimensioni dei reni. La disfunzione può essere leggermente ridotta tubuli renali(Sindrome di Fanconi). L'anemia moderata è solitamente causata da epistassi ricorrenti e acidosi cronica e può peggiorare con il prolungarsi del periodo di acidosi. Diatesi emorragica associata ad alterata funzionalità piastrinica.

Se si sospetta la malattia di tipo 1a sulla base delle manifestazioni cliniche, la diagnosi può essere confermata mediante una biopsia epatica. Questa diagnosi è supportata anche da acidosi lattica, test di tolleranza al galattosio alterato o reni ingrossati. Per distinguere la glicogenosi di tipo 1a da quella di tipo 1b, il materiale bioptico deve essere maneggiato correttamente. Mediante agobiopsia è possibile ottenere tessuto sufficiente per la determinazione degli enzimi; Se è necessario ottenere una grande massa di tessuto, viene eseguita una biopsia epatica a cielo aperto. Esame microscopico ci permette di rilevare un aumento della quantità di glicogeno nel citoplasma e nei nuclei delle cellule del fegato; in essi sono chiaramente visibili i vacuoli. La fibrosi è solitamente assente.

L'ipoglicemia e l'acidosi lattica possono rappresentare una minaccia per la vita del paziente. Altre manifestazioni gravi comprendono bassa statura, pubertà ritardata e iperuricemia. In età adulta, il paziente può manifestare nefropatia da acido urico e adenomatosi epatica. I linfonodi spesso raggiungono grandi dimensioni e vengono palpati o rilevati mediante scansione di radioisotopi. Esiste un alto rischio di degenerazione maligna, di solito all'età di 20-30 anni. I pazienti che vivono a lungo termine hanno un rischio maggiore di aterosclerosi.

Trattamento. L'alimentazione frequente è la pietra angolare del trattamento. I bambini vengono solitamente nutriti frequentemente durante il giorno e attraverso un tubo nasale durante la notte (vedi Capitolo 74). La dieta dovrebbe contenere circa il 60% di carboidrati e gli alimenti non dovrebbero contenere galattosio o fruttosio, che non possono essere utilizzati in modo efficiente per mantenere i livelli di zucchero nel sangue. Non tutte le famiglie possono seguire questo programma di trattamento, ma in alcuni casi i cambiamenti metabolici sono stati significativamente ridotti e la crescita è stata favorita. Una fonte conveniente, economica e gustosa di polimero del glucosio ad assorbimento lento è l’amido di mais grezzo, che può essere un componente importante della terapia dietetica. Trattamento ottimale richiede un approccio di squadra ai problemi dietetici e psicologici del paziente e dei suoi familiari. Può essere necessario l’allopurinolo per ridurre i livelli di urato plasmatico. Fornisce una previsione a breve termine abbastanza ottimistica, ma riduce il rischio? tumore maligno fegato o aterosclerosi - sconosciuto. Per alcune forme di glicogenosi, l'anastomosi portacavale veniva precedentemente eseguita, ma attualmente l'interesse per questo metodo di trattamento è scomparso. La diagnosi prenatale attualmente non è possibile.

Deficit microsomiale della traslocasi G-6-P, tipo Ib

Il deficit microsomiale della traslocasi G-6-P, precedentemente noto come pseudotipo I, è probabilmente 10 volte meno comune del tipo Ia. Il termine traslocasi microsomiale implica la capacità di trasferire G-6-P nel reticolo endoplasmatico. Le manifestazioni cliniche sono simili a quelle del tipo Ia, ma sono presenti anche segni peculiari: neutropenia, ridotta migrazione dei neutrofili e ricorrenti infezioni purulente. In generale, il tipo Ib è più grave del tipo Ia. I dati di laboratorio, le reazioni ai test di tolleranza e il trattamento per entrambi i tipi di glicogenosi sono gli stessi.

La malattia di tipo Ib differisce dal tipo Ia per la normale attività della glucosio-6-fosfatasi nelle biopsie tissutali in presenza di detergente. Tuttavia, se il tessuto fresco viene omogeneizzato e l'enzima viene determinato senza detergente, l'attività della glucosio-6-fosfatasi nel tipo Ib sarà bassa. Questi risultati hanno indicato un deficit genetico del sistema di trasporto microsomiale del glucosio-6-fosfato come principale difetto nella glicogenosi di tipo Ib. La causa della neutropenia e della ridotta migrazione dei neutrofili rimane poco chiara, sebbene si possa speculare sul ruolo del trasporto G-6-P in queste cellule.

Insufficienza del deramificatore, tipo III

Manifestazioni cliniche. Il deficit degli enzimi digestivi, noto anche come morbillo, è una malattia autosomica recessiva e una delle più frequenti forme comuni glicogenosi, particolarmente comune tra gli ebrei del Nord Africa. Nei neonati, di regola, la malattia non si manifesta; I sintomi dell'ipoglicemia e dell'epatomegalia compaiono solitamente nel primo anno di vita. I risultati dell'esame medico sono simili a quelli della malattia di tipo Ia, tranne per il fatto che la splenomegalia è più pronunciata, ma decorso clinico solitamente meno grave. La miopatia in un bambino è generalmente lieve, ma negli adulti può progredire e portare alla disabilità. In alcuni casi, la diagnosi viene fatta solo quando il paziente raggiunge età matura, poiché durante l'infanzia i sintomi erano molto scarsi e non attiravano l'attenzione.

In circa l'80% dei pazienti, il livello di glucosio nel sangue a digiuno diminuisce, la sua risposta al glucagone o all'adrenalina è compromessa, ma subito dopo aver mangiato può tornare alla normalità, poiché il glucosio rimanente dalle molecole di glicogeno viene mobilitato. Il test di tolleranza al galattosio è solitamente invariato. La chetosi è pronunciata, ma i livelli di lattato nel sangue non cambiano. Il livello delle transaminasi nel siero è elevato e può aumentare ancora di più al minimo disagio. In circa 2/3 dei pazienti aumenta la quantità di colesterolo e trigliceridi nel sangue. Raramente si riscontra iperuricemia.

Per la diagnosi vengono utilizzati due approcci: determinazione del glicogeno e determinazione dell'attività deramificante nelle biopsie tissutali. In quasi tutti i pazienti, il livello di glicogeno nei globuli rossi e nel fegato è aumentato, ma raramente aumenta nei muscoli. Un indicatore più affidabile è una violazione della struttura del glicogeno, stabilita mediante spettrofotometria. La diagnosi determinando l'attività enzimatica è più difficile. Le difficoltà sono legate non solo al metodo, ma anche a quella che comunemente viene chiamata eterogeneità genetica. Entrambe le attività deramificanti – glicantransferasi e glucosidasi – sembrano essere contenute nello stesso polipeptide, ma esistono fino a sei sottotipi della malattia. Sebbene la diagnosi possa talvolta essere effettuata utilizzando globuli rossi, leucociti o fibroblasti, è più affidabile verificare la rottura della struttura del glicogeno e il deficit enzimatico direttamente nelle biopsie epatiche o muscolari. L'istologia epatica è simile a quella della glicogenosi di tipo 1a, ad eccezione di un minore accumulo di lipidi e di una fibrosi del setto più grave.

Per quanto riguarda l'arresto della crescita e l'addome sporgente, dopo aver raggiunto la pubertà questi segni scompaiono gradualmente, così che un paziente adulto può apparire sano esteriormente e l'ipoglicemia è meno comune. Non sono stati riscontrati tumori al fegato. Non ci sono informazioni riguardanti le conseguenze a lungo termine dell’iperlipidemia. La percentuale di pazienti adulti che sviluppano una miopatia grave sembra essere piccola. I pazienti possono avere figli.

Trattamento. Le poppate frequenti nell'infanzia con glicogenosi di tipo III sono ugualmente lato importante trattamento. La gluconeogenesi non viene compromessa e, come già notato, deve essere mantenuta livello normale Per lo zucchero nel sangue, il paziente può ricevere galattosio, fruttosio o proteine. Pertanto, la dieta può includere una percentuale maggiore di calorie sotto forma di proteine, ma la percentuale di carboidrati non deve essere inferiore al 40-50%. Per prevenire l'ipoglicemia notturna, spesso è sufficiente che il paziente mangi la cena, anche se nei casi più gravi può essere necessaria l'alimentazione notturna attraverso una sonda o l'uso di amido di mais. Si consiglia di cercare di ridurre i livelli di lipidi nel sangue attraverso la dieta. È possibile la diagnosi prenatale.

Carenza di fosforilasi epatica, tipo VI

In precedenza, la diagnosi di deficit di fosforilasi epatica, o malattia di Era, veniva posta in un gruppo eterogeneo di pazienti in cui il livello di fosforilasi epatica era ridotto per vari motivi, ma attualmente questa diagnosi viene posta solo se il deficit enzimatico è primario difetto. Questa difficoltà è dovuta al fatto che la fosforilasi esiste sia nella forma attiva che in quella attiva forma inattiva e molti fattori ne inibiscono secondariamente l'attivazione. Pertanto, per fare una diagnosi, è necessario garantire l'assenza di fosforilasi e la normale attività della fosforilasi-b-chinasi, responsabile dell'attivazione della fosforilasi. La malattia è probabilmente causata da una mutazione autosomica recessiva.

Le manifestazioni nella maggior parte dei casi sono simili a quelle della glicogenosi di tipo III, ma meno pronunciate. La diagnosi viene presunta quando viene rilevata epatomegalia o ipoglicemia e il paziente risponde alle stesse misure dietetiche della malattia di tipo III.

Deficit di fosforilasi-b-chinasi

L'insufficienza di questo enzima, ora conosciuta come una malattia separata, era precedentemente classificata come glicogenosi di tipo VI. Vari autori hanno definito questo disturbo come tipo VIa, tipo VIII o tipo IX, ma è preferibile chiamarlo deficit di fosforilasi L-chinasi. La forma meglio caratterizzata della malattia è la variante legata all'X, ma esiste la possibilità di eterogeneità genetica poiché l'enzima è costituito da quattro subunità non identiche. La malattia è relativamente benigna e si manifesta negli uomini con epatomegalia, talvolta con lo sviluppo di ipoglicemia a digiuno e qualche ritardo della crescita, che possono tutti scomparire spontaneamente entro la pubertà. Nelle donne eterozigoti, l'epatomegalia potrebbe non essere così pronunciata. La diagnosi viene effettuata rilevando l'enzima nei globuli bianchi, nelle colture di fibroblasti cutanei o nelle biopsie epatiche. Si ritiene che la fosforilasi-b-chinasi muscolare non cambi. Per correggere l'ipoglicemia o il ritardo della crescita, al paziente può essere prescritta la stessa dieta della glicogenosi di tipo III. È possibile che questa condizione sia diffusa, ma spesso non viene diagnosticata. Quando si esaminano i familiari del paziente, tra loro vengono spesso identificati adulti sani, che indicano di aver avuto un addome sporgente durante l'infanzia.

Anomalie energetico-muscolari

Per riconoscere la glicogenosi, nella quale i muscoli sono coinvolti nel processo, è necessario come test iniziale un test di lavoro ischemico. Il bracciale del tonometro viene riempito d'aria in modo che la sua pressione sia superiore alla pressione arteriosa e al paziente viene chiesto di eseguire il massimo lavoro con il braccio ischemico. Quindi l'aria viene rilasciata dal bracciale e dopo 2, 5, 10, 20 e 30 minuti vengono prelevati campioni di sangue da una vena dell'altro braccio per determinare il lattato e il piruvato, gli enzimi muscolari e la mioglobina.

Deficit di miofosforilasi tipo V

Il deficit di miofosforilasi, o malattia di McArdle, è raro. Di età superiore ai 20-30 anni, un paziente sviluppa solitamente sintomi durante l'attività fisica: dolore e crampi. Nella maggior parte dei casi, c'è una storia di mioglobinuria e talvolta è accompagnata da insufficienza renale. Una persona con questo difetto è altrimenti sana; Non ci sono segni di danni al fegato, al cuore o al metabolismo. Il test di lavoro ischemico produce solitamente un crampo doloroso, che aiuta a stabilire la diagnosi. Inoltre, dopo un esercizio fisico intenso, i livelli di lattato nel sangue non aumentano, ma aumentano i livelli di creatinfosfochinasi sierica.

La diagnosi viene effettuata in base a alto contenuto glicogeno e ridotta attività della fosforilasi nel campione bioptico tessuto muscolare. Il glicogeno si deposita solitamente nelle aree subsarcolemmali del muscolo. Il gene della miofosforilasi umana è stato clonato; si trova sul cromosoma 11, il che è coerente con l'ereditarietà autosomica recessiva del difetto. Gli uomini si ammalano più spesso, il che potrebbe essere spiegato dalla maggiore frequenza con cui si rivolgono alle cure. cure mediche, eterogeneità genetica, ecc. Sono noti casi di forma infantile fatale di ipotensione associata a deficit di miofosforilasi.

Il trattamento per il deficit di miofosforilasi comporta l’evitare un’attività fisica intensa. L’assunzione di glucosio o fruttosio prima del lavoro può aiutare a ridurre i sintomi.

Deficit di fosfofruttochinasi muscolare, tipo VII

Esistono due forme genetiche di fosfofruttochinasi. Nei muscoli, questa attività appartiene a uno specifico isoenzima muscolare e negli eritrociti - sia eritrociti che muscoli. È stato identificato un piccolo numero di famiglie i cui membri presentavano un deficit di isoenzima muscolare. I suoi sintomi sono simili a quelli del deficit di miofosforilasi e comprendono dolore e crampi, mioglobinuria e aumento dei livelli sierici degli enzimi muscolari dopo un intenso esercizio fisico. La produzione di lattato è compromessa e si riscontra una certa anemia emolitica non sferocitica. Un certo numero di pazienti presenta anemia senza sintomi muscolari. Ciò può essere spiegato da un enzima instabile qualitativamente modificato, che scompare rapidamente dai globuli rossi nucleati, ma viene rapidamente reintegrato cellule muscolari, che determina l'assenza di sintomi muscolari.

Altre malattie muscolo-energetiche

Durante la conduzione diagnosi differenziale Nei pazienti con mioglobinuria ed elevati livelli sierici degli enzimi muscolari dopo l'esercizio, deve essere considerato un gruppo ancora più raro di disturbi metabolici familiari. Questi includono carenze di fosfogliceromutasi, subunità LDH M e carnitina palmitil transferasi. (I dati precedentemente noti sul deficit di fosfoglucomutasi e fosfoesoso isomerasi sembrano inconcludenti da un punto di vista moderno.) Con il deficit di miofosforilasi, fosfofruttochinasi o fosfogliceromutasi, l'esercizio fisico non causa un aumento dei livelli di lattato e piruvato, mentre con il deficit della subunità M LDH elevato i livelli di piruvato vengono mantenuti e il lattato non viene prodotto. Il deficit di carnitina palmitil transferasi è una malattia del metabolismo lipidico discussa nel capitolo 329. Per confermare la diagnosi dei disturbi è necessaria la determinazione dei livelli enzimatici nel tessuto muscolare. In alcuni pazienti con gli stessi sintomi clinici non è possibile rilevare una carenza di nessuno degli enzimi citati, per cui è possibile che nel tempo vengano identificati altri disturbi del metabolismo muscolare.

• Quali medici dovresti contattare se soffri di glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

Cos'è la glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

Glicogenosi di tipo I- una malattia descritta da Gierke nel 1929, ma il difetto enzimatico fu identificato da Cory solo nel 1952. La glicogenosi di tipo I si verifica in 1 su 200.000 neonati. L’incidenza dei ragazzi e delle ragazze è la stessa. La trasmissione è autosomica recessiva. Nella glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke), le cellule del fegato e i tubuli renali contorti sono pieni di glicogeno, ma queste riserve sono inaccessibili: ciò è evidenziato dall'ipoglicemia, così come dal mancato aumento dei livelli di glucosio nel sangue in risposta all'adrenalina e glucagone. Tipicamente, questi pazienti sviluppano chetosi e iperlipemia, che generalmente sono caratteristiche dello stato del corpo caratterizzato da una carenza di carboidrati. Nel fegato, nei reni e nei tessuti intestinali l'attività della glucosio-6-fosfatasi è estremamente bassa o completamente assente.

Patogenesi (cosa succede?) durante la glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

La malattia è causata da difetti nel sistema enzimatico del fegato che converte il glucosio-6-fosfato in glucosio. Sia la glicogenolisi che la gluconeogenesi sono compromesse, portando a ipoglicemia a digiuno con acidosi lattica, iperuricemia e ipertrigliceridemia. Il glicogeno in eccesso si accumula nel fegato.

Il sistema enzimatico che converte il glucosio-6-fosfato in glucosio contiene almeno 5 subunità: glucosio-6-fosfatasi (catalizza l'idrolisi del glucosio-6-fosfato nel lume del reticolo endoplasmatico), proteina regolatrice legante il Ca2(+) e proteine ​​di trasporto (translocasi), T1, T2 e T3, che assicurano il passaggio di glucosio-6-fosfato, fosfato e glucosio attraverso la membrana del reticolo endoplasmatico.

Il difetto della glucosio-6-fosfatasi (glicogenosi di tipo Ia) e il difetto della traslocasi del glucosio-6-fosfato (glicogenosi di tipo Ib) si presentano con anomalie cliniche e biochimiche simili. Per confermare la diagnosi e stabilire con precisione il difetto enzimatico, sono necessari una biopsia epatica e un test dell'attività della glucosio-6-fosfatasi.

Sintomi della glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

Le manifestazioni cliniche della glicogenosi di tipo I nei neonati, nei lattanti e nei bambini più grandi non sono le stesse. Il motivo sono le differenze nella dieta e nell’alimentazione in questi gruppi di età.

A volte l'ipoglicemia da digiuno si verifica nei primi giorni e settimane di vita, ma nella maggior parte dei casi la malattia è asintomatica, poiché il bambino si nutre frequentemente e riceve quantità sufficienti di glucosio. Spesso la malattia viene diagnosticata diversi mesi dopo la nascita, quando si riscontra che il bambino presenta un addome ingrossato ed epatomegalia. Potrebbero verificarsi mancanza di respiro e febbre di basso grado senza segni di infezione. La mancanza di respiro è causata da ipoglicemia e acidosi lattica dovute a un'insufficiente produzione di glucosio. Man mano che gli intervalli tra le poppate aumentano e il bambino inizia a dormire di notte, compaiono sintomi di ipoglicemia, soprattutto al mattino. La gravità e la durata dell’ipoglicemia aumentano gradualmente, portando a disturbi metabolici sistemici.

Se il trattamento non viene effettuato, l'aspetto del bambino cambia. Caratterizzato da deperimento muscolare e scheletrico, ritardo della crescita e dello sviluppo fisico e deposito di grasso sotto la pelle. Il bambino diventa come un paziente con la sindrome di Cushing. Lo sviluppo delle abilità cognitive e sociali non viene influenzato a meno che ripetuti episodi di ipoglicemia non causino danni cerebrali. Se il bambino non riceve abbastanza carboidrati e persiste l'ipoglicemia dovuta al digiuno, il ritardo nella crescita e nello sviluppo fisico diventa pronunciato. Alcuni bambini affetti da glicogenosi di tipo I muoiono di ipertensione polmonare.

La disfunzione piastrinica si manifesta con ripetuti sanguinamenti dal naso o sanguinamento dopo interventi dentistici e altro interventi chirurgici. Sono presenti disturbi nell'adesione e nell'aggregazione piastrinica; Anche il rilascio di ADP dalle piastrine in risposta all'adrenalina e al contatto con il collagene è compromesso. La trombocitopatia è causata da disturbi metabolici sistemici; dopo il trattamento scompare.

L'ecografia e l'urografia escretoria rivelano reni ingrossati. Nella maggior parte dei pazienti non sono presenti disfunzioni renali significative; si nota solo un aumento della velocità di filtrazione glomerulare (GFR). In casi molto gravi si può sviluppare tubulopatia con glicosuria, fosfaturia, ipokaliemia e aminoaciduria (come nella sindrome di Fanconi). L'albuminuria è talvolta osservata negli adolescenti e l'albuminuria è spesso osservata nei giovani adulti. pesante sconfitta reni con proteinuria, aumento della pressione sanguigna ( pressione sanguigna) e una diminuzione della clearance della creatinina causata dalla glomerulosclerosi focale segmentale e dalla fibrosi interstiziale. Questi disturbi portano all’insufficienza renale allo stadio terminale.

La milza non è ingrandita.

Senza trattamento, livelli di libero acidi grassi, trigliceridi e apoproteina C-III, che è coinvolta nel trasporto dei trigliceridi e delle lipoproteine ​​ricche di trigliceridi. I livelli di fosfolipidi e colesterolo aumentano moderatamente. Molto alto livello i trigliceridi sono causati dalla loro eccessiva produzione nel fegato e da una diminuzione del loro metabolismo periferico dovuta alla diminuzione dell'attività della lipoproteina lipasi. In caso di iperlipoproteinemia grave, possono comparire xantomi eruttivi sulle superfici estensori degli arti e dei glutei.

Mancanza di trattamento o trattamento errato portare a un ritardo nella crescita e nello sviluppo sessuale.

Adenomi epatici per ragioni sconosciute si verificano in molti pazienti, solitamente di età compresa tra 10 e 30 anni. Gli adenomi possono diventare maligni e sono possibili emorragie nell'adenoma. Nelle scintigrafie epatiche gli adenomi appaiono come aree di ridotto accumulo di isotopi. Gli ultrasuoni vengono utilizzati per rilevare gli adenomi. Se si sospetta una crescita maligna, RM (risonanza magnetica) e TC ( TAC), permettendoci di tracciare la trasformazione di una neoplasia piccola, chiaramente delimitata, in una più grande, con bordi sfumati. Si raccomanda di misurare periodicamente i livelli sierici di alfa-fetoproteina (un marcatore del carcinoma epatocellulare).

La gravità dell’ipoglicemia a digiuno diminuisce con l’età. Il peso corporeo aumenta più velocemente del peso del cervello, quindi la relazione tra il tasso di produzione e utilizzo del glucosio diventa più favorevole. Il tasso di produzione del glucosio viene aumentato dall’attività dell’amilo-1,6-glucosidasi nel fegato e nei muscoli. Di conseguenza, i livelli di glucosio a digiuno aumentano gradualmente.

Le manifestazioni cliniche della glicogenosi di tipo Ia e di tipo Ib sono le stesse, ma con la glicogenosi di tipo Ib si osserva neutropenia persistente o transitoria. Nei casi più gravi si sviluppa agranulocitosi. La neutropenia è accompagnata da disfunzione dei neutrofili e dei monociti, aumentando quindi il rischio infezioni da stafilococco e candidosi. Alcuni pazienti sviluppano una malattia infiammatoria intestinale, simile al morbo di Crohn.

Diagnosi della glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

Nella diagnosi di laboratorio della glicogenosi di tipo I, viene effettuato quanto segue:

• studi obbligatori: misurare i livelli di glucosio, lattato, acido urico e l'attività degli enzimi epatici a stomaco vuoto; nei neonati e nei bambini affetti da glicogenosi di tipo I, il livello di glucosio nel sangue dopo 3-4 ore di digiuno scende a 2,2 mmol/l e inferiore; se la durata del digiuno supera le 4 ore, la glicemia è quasi sempre inferiore a 1,1 mmol/l; l'ipoglicemia è accompagnata da un aumento significativo dei livelli di lattato e acidosi metabolica; il siero di latte è solitamente torbido o simile al latte a causa dei trigliceridi molto alti e del colesterolo moderatamente elevato; Si notano anche iperuricemia e aumento dell'attività di AST (aspartato aminotransferasi) e ALT (alanina aminotransferasi).
• test di provocazione: per distinguere la glicogenosi di tipo I dalle altre glicogenosi e determinare con precisione il difetto enzimatico, nei neonati vengono misurati i livelli di metaboliti (glucosio, acidi grassi liberi, corpi chetonici, lattato e acido urico) e ormoni (insulina, glucagone, adrenalina) e bambini più grandi, cortisolo e STH (ormone somatotropo)) a stomaco vuoto e dopo aver assunto glucosio; Lo schema della ricerca è il seguente: al bambino viene somministrato glucosio per via orale alla dose di 1,75 g/kg, poi viene prelevato il sangue ogni 1-2 ore; la concentrazione di glucosio in ciascun campione viene misurata rapidamente; l'ultimo campione viene prelevato entro e non oltre 6 ore dall'assunzione di glucosio o nel momento in cui la concentrazione di glucosio è scesa a 2,2 mmol/l;
• test provocatorio con glucagone: il glucagone viene somministrato per via intramuscolare o endovenosa in bolo alla dose di 30 mcg/kg (ma non più di 1 mg) 4-6 ore dopo aver mangiato o assunto glucosio; il sangue per la determinazione del glucosio e del lattato viene prelevato 1 minuto prima dell'iniezione di glucagone e 15, 30,45, 60,90 e 120 minuti dopo l'iniezione. Nella glicogenosi di tipo I, il glucagone non aumenta o aumenta leggermente i livelli di glucosio, mentre il livello di lattato inizialmente elevato continua ad aumentare;
• studio speciale: viene eseguita la biopsia epatica, viene esaminato il glicogeno; il contenuto di glicogeno è notevolmente aumentato, ma la sua struttura è normale;
• studi speciali per determinare con precisione il difetto enzimatico alla base della glicogenosi di tipo I: misurare l'attività della glucosio-6-fosfatasi nei microsomi epatici intatti e distrutti (mediante la formazione di glucosio e fosfato dal glucosio-6-fosfato); i microsomi vengono distrutti mediante ripetuti congelamenti e scongelamenti della biopsia; nella glicogenosi di tipo Ia, l'attività della glucosio-6-fosfatasi non viene rilevata né nei microsomi intatti né in quelli distrutti; nella glicogenosi di tipo Ib, l'attività della glucosio-6-fosfatasi nei microsomi distrutti è normale, ma nei microsomi interi è assente o notevolmente ridotta (poiché la traslocasi difettosa del glucosio-6-fosfato non trasporta il glucosio-6-fosfato attraverso le membrane microsomiali );
• metodi di biologia molecolare (rilevamento di un difetto genetico mediante PCR (polimerasi reazione a catena) e successiva ibridazione con oligonucleotidi specifici).

Studi e metodi speciali di biologia molecolare sono disponibili solo per laboratori specializzati; in SSA, ad esempio, nei laboratori: il Dr. Y. T. Chen, Divisione di Genetica e Metabolismo, Duke University Medical Center, Durham, North Carolina, U.S.A.; Dott. R. Grier, Laboratorio di genetica biocemica, Clinica pediatrica Nemours, Jacksonville, Florida, U.S.A.

Trattamento della glicogenosi di tipo I (malattia di Gierke)

I disordini metabolici nella glicogenosi di tipo I, causati da un'insufficiente produzione di glucosio, si verificano entro poche ore dal pasto e con il digiuno prolungato si intensificano in modo significativo. Pertanto, il trattamento della glicogenosi di tipo I si riduce all'alimentazione frequente del bambino. L'obiettivo del trattamento è evitare che la concentrazione di glucosio nel sangue scenda al di sotto di 4,2 mmol/l, livello soglia al quale viene stimolata la secrezione degli ormoni controinsulari.

Se il bambino riceve una quantità sufficiente di glucosio in modo tempestivo, la dimensione del fegato diminuisce, i valori di laboratorio si avvicinano alla normalità, il sanguinamento scompare, la crescita e lo sviluppo psicomotorio si normalizzano.

La glicogenosi di tipo 1 fu descritta per la prima volta nel 1929 da Gierke. La malattia si verifica in un caso su duecentomila neonati. La patologia colpisce allo stesso modo sia i ragazzi che le ragazze. Successivamente, diamo un'occhiata a come si manifesta la malattia di Gierke, di cosa si tratta e quale terapia viene utilizzata.

informazioni generali

Nonostante la sua individuazione relativamente precoce, fu solo nel 1952 che il difetto enzimatico di Cory fu identificato. L'ereditarietà della patologia è autosomica recessiva. La sindrome di Gierke è una malattia in cui le cellule del fegato e i tubuli contorti dei reni sono pieni di glicogeno. Tuttavia, queste riserve risultano indisponibili. Ciò è indicato dall'ipoglicemia e dall'assenza di un aumento della concentrazione di glucosio nel sangue in risposta al glucagone e all'adrenalina. La sindrome di Gierke è una malattia accompagnata da iperlipemia e chetosi. Questi segni sono caratteristici dello stato del corpo con una carenza di carboidrati. Allo stesso tempo, si osserva una bassa attività della glucosio-6-fosfatasi nel fegato, nei tessuti intestinali e nei reni (o è completamente assente).

Andamento della patologia

Come si sviluppa la sindrome di Gierke? La malattia è causata da difetti nel sistema enzimatico del fegato. Converte il glucosio-6-fosfato in glucosio. In caso di difetti, sia la gluconeogenesi che la glicogenolisi sono compromesse. Questo, a sua volta, provoca ipertrigliceridemia e iperuricemia, acidosi lattica. Il glicogeno si accumula nel fegato.

La malattia di Gierke: biochimica

Nel sistema enzimatico che trasforma il glucosio-6-fosfato in glucosio, oltre a se stesso, ci sono almeno altre quattro subunità. Questi includono, in particolare, il composto proteico regolatore che lega il Ca2(+), le traslocasi (proteine ​​di trasporto). Il sistema contiene T3, T2, T1, che assicurano la trasformazione di glucosio, fosfato e glucosio-6-fosfato attraverso la membrana del reticolo endoplasmatico. Ci sono alcune somiglianze tra i tipi della malattia di Gierke. Il quadro clinico della glicogenosi Ib e Ia è simile; pertanto, per confermare la diagnosi e stabilire con precisione il difetto enzimatico, viene esaminata anche l'attività della glucosio-6-fosfatasi. Differenza in manifestazioni cliniche tra la glicogenosi di tipo Ib e Ia è che con la prima si nota neutropenia transitoria o permanente. Nei casi particolarmente gravi, inizia a svilupparsi l'agranulocitosi. La neutropenia è accompagnata da disfunzione dei monociti e dei neutrofili. A questo proposito, aumenta la probabilità di candidosi e infezioni da stafilococco. Alcuni pazienti sperimentano un'infiammazione nell'intestino simile alla malattia di Crohn.

Segni di patologia

Innanzitutto va detto che la malattia di Gierke si manifesta in modo diverso nei neonati, nei lattanti e nei bambini più grandi. I sintomi compaiono come ipoglicemia a digiuno. Tuttavia, nella maggior parte dei casi la patologia è asintomatica. Ciò è dovuto al fatto che neonati ricevere la nutrizione e la quantità ottimale di glucosio abbastanza spesso. La malattia di Gierke (le foto dei pazienti possono essere trovate nei libri di consultazione medica) viene spesso diagnosticata dopo la nascita, diversi mesi dopo. In questo caso, il bambino presenta epatomegalia e addome ingrossato. Anche la febbre di basso grado e la mancanza di respiro senza segni di infezione possono accompagnare la malattia di Gierke. Le cause di quest'ultima sono l'acidosi lattica dovuta all'insufficiente produzione di glucosio e l'ipoglicemia. Nel tempo, gli intervalli tra le poppate aumentano e appare un lungo periodo di tempo. sonno notturno. Allo stesso tempo, la sua durata e gravità iniziano ad aumentare gradualmente, il che, a sua volta, porta a disturbi metabolici sistemici.

Conseguenze

In assenza di trattamento, si notano cambiamenti nell'aspetto del bambino. In particolare sono caratteristici la malnutrizione muscolare e scheletrica, il rallentamento dello sviluppo fisico e della crescita. Ci sono anche depositi di grasso sotto la pelle. Il bambino inizia ad assomigliare ad un paziente che non ha alcun deterioramento nello sviluppo delle abilità sociali e cognitive, a meno che il cervello non venga danneggiato durante ripetuti attacchi ipoglicemici. Se l’ipoglicemia a digiuno persiste e il bambino non riceve la quantità necessaria di carboidrati, si verificherà un ritardo sviluppo fisico e la crescita diventa chiaramente definita. In alcuni casi, i bambini affetti da ipoglichenosi di tipo I muoiono a causa dell’ipertensione polmonare. Se c'è una violazione, si osservano ripetuti sanguinamenti dal naso o sanguinamento dopo un intervento chirurgico dentale o di altro tipo.

Si notano disturbi nell'adesione e nell'aggregazione piastrinica. Anche il rilascio di ADP in risposta al contatto con il collagene e l'adrenalina è compromesso. Sistema disturbi metabolici provocare trombocitopatia, che scompare dopo la terapia. I reni ingrossati vengono rilevati mediante ecografia e urografia escretoria. La maggior parte dei pazienti non presenta un'insufficienza renale significativa. In questo caso solo un aumento di Most casi gravi sono accompagnati da tubulopatia con glicosuria, ipokaliemia, fosfaturia e aminoaciduria (tipo In alcuni casi, gli adolescenti hanno albuminuria. Nei giovani si osserva un grave danno renale con proteinuria, aumento della pressione e diminuzione della clearance della creatinina, che è causata dalla fibrosi interstiziale e dalla glomerulosclerosi del natura focale segmentaria.Tutti questi disturbi provocano insufficienza renale allo stadio terminale.La dimensione della milza rimane entro limiti normali.

Adenomi epatici

Si verificano in molti pazienti ragioni varie. Di norma, compaiono tra i 10 ei 30 anni. Possono diventare maligni e sono possibili emorragie nell'adenoma. Queste formazioni vengono presentate sugli scintigrammi come aree di ridotto accumulo di isotopi. Utilizzato per identificare gli adenomi ecografia. Se si sospetta una neoplasia maligna, vengono utilizzate scansioni MRI e TC più informative. Ci permettono di tracciare la trasformazione di una chiara formazione limitata taglia piccola in uno più grande con bordi abbastanza sfocati. In questo caso si raccomanda la misurazione periodica dei livelli sierici di alfa-fetoproteina (un marcatore del cancro delle cellule epatiche).

Diagnostica: studi obbligatori

Ai pazienti vengono misurati i livelli di acido urico, lattato, glucosio e degli enzimi epatici a digiuno. Nei lattanti e nei neonati, la concentrazione di glucosio nel sangue dopo 3-4 ore di digiuno diminuisce a 2,2 mmol/litro o più; con una durata superiore alle quattro ore la concentrazione è quasi sempre inferiore a 1,1 mmol/litro. L'ipoglicemia è accompagnata da un aumento significativo del contenuto di lattato e dell'acidosi metabolica. Il siero di latte è solitamente torbido o simile al latte a causa della sua stessa natura alta concentrazione trigliceridi e livelli di colesterolo moderatamente aumentati. Si osservano anche un aumento dell'attività dell'ALT (alanina aminotransferasi) e dell'AST (aspartaminotransferasi) e iperuricemia.

Prove provocatorie

Per differenziare il tipo I da altre glicogenosi e determinare con precisione il difetto enzimatico nei neonati e nei bambini più grandi, il livello di metaboliti (acidi grassi liberi, glucosio, acido urico, lattato, corpi chetonici), ormoni (GH (ormone somatotropo), cortisolo, adrenalina , glucagone) viene misurato , insulina) dopo il glucosio e a stomaco vuoto. La ricerca viene effettuata secondo un determinato schema. Il bambino riceve glucosio (1,75 g/kg) per via orale. Quindi il sangue viene prelevato ogni 1-2 ore. La concentrazione di glucosio viene misurata rapidamente. L'ultima analisi viene effettuata entro e non oltre sei ore dall'assunzione del glucosio o quando il suo contenuto è sceso a 2,2 mmol/litro. Viene anche eseguito un test provocatorio con il glucagone.

Studi speciali

Durante questa procedura viene eseguita una biopsia epatica. Viene esaminato anche il glicogeno: il suo contenuto è notevolmente aumentato, ma la sua struttura rientra nei limiti normali. Vengono effettuate misurazioni dell'attività della glucosio-6-fosfatasi nei microsomi epatici disgregati e intatti. Vengono distrutti dal ripetuto congelamento e scongelamento del biopatico. Sullo sfondo della glicogenosi di tipo Ia, l'attività non viene rilevata né nei microsomi distrutti né in quelli intatti, nel tipo Ib nel primo è normale e nel secondo è significativamente ridotto o assente.

Malattia di Gierke: trattamento

Nella glicogenosi di tipo I, disturbi metabolici associati produzione insufficiente il glucosio appare diverse ore dopo il pasto. Con il digiuno prolungato i disturbi aumentano notevolmente. A questo proposito, il trattamento della patologia si riduce ad aumentare la frequenza di alimentazione del bambino. L’obiettivo della terapia è impedire che i livelli di glucosio scendano al di sotto di 4,2 mmol/litro. Questo è il livello soglia al quale viene stimolata la secrezione degli ormoni controvascolari. Se il bambino riceve una quantità sufficiente di glucosio in modo tempestivo, si nota una diminuzione delle dimensioni del fegato. Allo stesso tempo, gli indicatori di laboratorio si avvicinano alla norma e la crescita si stabilizza, il sanguinamento scompare.