Gli antipiretici per i bambini sono prescritti da un pediatra. Ma ci sono situazioni di emergenza per la febbre quando il bambino ha bisogno di ricevere immediatamente la medicina. Quindi i genitori si assumono la responsabilità e usano farmaci antipiretici. Cosa è permesso dare ai neonati? Come abbassare la temperatura nei bambini più grandi? Quali farmaci sono i più sicuri?
Valutazione del sistema B di immunità (immunità umorale).
Diversi metodi sono utilizzati per valutare il sistema B di immunità.
Determinazione dei linfociti B nel sangue. Vengono utilizzate tre proprietà di questo tipo di linfociti.
Disponibilità recettori del complemento permette di contare le cosiddette rosette complementari, cioè linfociti che formano rosette con eritrociti che portano un complesso anticorpo-complemento (formazione di rosette EAC) sulla loro superficie. Non solo i linfociti, ma anche i granulociti sono in grado di formare rosette. I. Wong, A. Wilson nel 1975 descrisse la tecnica di stadiazione della formazione di rosette EA e EAC da parte dei neutrofili, che dimostrò la presenza di recettori Fc in queste cellule. Nel 1976, IV Petrova et al. ha descritto la capacità dei neutrofili di formare rosette spontanee con eritrociti di ariete e ha dimostrato che questa sottopopolazione di neutrofili aumenta notevolmente con la terapia immunosoppressiva. Per analogia con i linfociti, i neutrofili sono divisi in cellule rosette spontanee, cellule rosette complementari e cellule nulle. A persone sane i neutrofili che formano rosette spontanee vanno dal 25 al 35% e complementari - dal 14 al 20%.
riso. 1. Formazione a rosetta delle cellule B.
Disponibilità nei linfociti B, i recettori per il frammento Fc delle immunoglobuline portano al fatto che assorbono la γ-globulina aggregata su se stessi. I linfociti B possono essere rilevati utilizzando un metodo fluorescente o radiografico utilizzando aggregati marcati di γ-globuline. I linfociti B umani formano rosette con eritrociti di topo. Infine, utilizzando il metodo immunofluorescente Koons, utilizzando sieri antiglobulinici, è possibile rilevare e contare tutti i linfociti recanti determinanti immunoglobulinici, ovvero i linfociti B. In questo caso, può essere effettuato un conteggio differenziato delle cellule che trasportano determinanti IgM, IgG o 1gA. È inoltre necessario determinare non solo la percentuale di cellule B, ma anche la loro quantità assoluta in 1 µl di sangue.
Definizione livelli ematici di immunoglobuline. Vengono determinati la concentrazione totale di immunoglobuline e il numero di immunoglobuline di diverse classi. La prima viene effettuata mediante salatura con solfato di zinco seguita da valutazione turbidimetrica, elettroforesi o immunoelettroforesi. Livello normale immunoglobuline totali nell'uomo è da 10 a 20 g / l. La determinazione della quantità di IgM, IgG e IgA viene spesso eseguita con il metodo dell'immunodiffusione radiale secondo Mancini. Le IgE sono determinate mediante dosaggio radioimmunologico. Limite superiore la norma è 0,0005 g/l.
Definizione la presenza e il livello di isoemoagglutinine nel siero del sangue, nonché anticorpi naturali (normali) contro batteri e virus diffusi. Come antigeni possono essere utilizzati Escherichia coli, tossine stafilococciche, virus dell'herpes, ecc.. Va tenuto presente che ά- e β-isoemagglutinine appartengono alle IgM.
Studio genesi anticorpale (risposta primaria e secondaria) dopo immunizzazione attiva con diversi vaccini uccisi. Applicare pertosse e ucciso vaccino polio, tossoidi difterici e tetanici, antigeni polisaccaridici isolati da pneumococchi, meningococchi e batteri del gruppo intestinale. La necessità di utilizzare diversi antigeni è associata alla specificità geneticamente determinata della risposta immunitaria. L'ottenimento di una bassa risposta immunitaria a qualsiasi antigene può essere il risultato del fatto che questo individuo appartiene a un genotipo a bassa risposta per questo antigene. La reazione ad altri antigeni può essere normale. Ecco perché la diagnosi di inferiorità funzionale del sistema B può essere fatta solo quando la risposta immunitaria a diversi antigeni viene soppressa.
Ricerca sul catabolismo immunoglobuline nel corpo. Una preparazione marcata di immunoglobulina umana viene iniettata nel sangue. La rimozione del marcatore dal sangue e il suo accumulo nelle urine e nelle feci consentono di determinare l'emivita dell'immunoglobulina. L'emivita normale delle IgG è di 24 giorni. Con enteropatia essudativa, nefrosi e alcune altre malattie, si verifica uno stato di ipercatabolismo delle immunoglobuline. Per stabilire il fatto del loro ipercatabolismo selettivo, l'emivita dell'albumina marcata viene determinata in parallelo.
Biopsia linfonodi , midollo osseo, sezioni della mucosa intestinale. Questa procedura viene eseguita ai fini del rilevamento istologico delle plasmacellule, della presenza e della struttura follicoli linfoidi. Reazioni cutanee mostrando ipersensibilità immediata. Questi test includono la reazione PAS. Nelle persone immunizzate contro la difterite che hanno anticorpi contro la tossina difterica, l'iniezione intradermica di questa tossina non porta allo sviluppo del tipico eritema.
Stimolazione della biosintesi delle immunoglobuline da parte dei linfociti B in vitro. Grado attività funzionale I linfociti B dal sangue umano sono possibili a causa del fatto che alcuni mitogeni, come il mitogeno del pokeweed, hanno la capacità di provocare la stimolazione policlonale dei linfociti B. La produzione "grossolana" di cellule B che sintetizzano immunoglobuline viene determinata nel liquido di coltura mediante metodo radioimmunologico dopo 7-12 giorni di coltura di linfociti con un mitogeno.
riso. 2. Risposta immunitaria umorale.
I linfociti B producono anticorpi, aiutando a riconoscere e rimuovere gli antigeni estranei (portati da batteri o virus). Sono assistiti da linfociti T e macrofagi circolanti nel sangue.
a) Particelle virali attraverso cellule superficiali penetrano nel tessuto e si moltiplicano.
b) I macrofagi divorano particelle virali,
c) I macrofagi trasmettono antigeni ai linfociti T circolanti nel sangue. Ciò porta alla mobilizzazione di un numero aggiuntivo di linfociti T e B.
d) I linfociti B si scompongono in cellule B plasmatiche, che producono anticorpi specifici per il virus invasore, e cellule B della memoria.
e) Gli anticorpi circolanti nel sangue interagiscono con le particelle virali.
f) I macrofagi riconoscono e divorano i virus, proteggendo il corpo dalle infezioni. 
fig.3. Interazione delle cellule durante la risposta immunitaria.
Il recettore T-helper riconosce il determinante antigenico (epitopo) insieme alla molecola MHC di classe 11 esposta sulla superficie della cellula presentante Ag. La differenziazione Ag del T-helper CD4 è coinvolta nell'interazione molecolare. Come risultato di questa interazione, la cellula presentante Ag secerne IL-1, che stimola la sintesi e la secrezione di IL-2 nel T-helper, così come la sintesi e l'incorporazione dello stesso T-helper di IL-2 recettori nella membrana plasmatica. IL-2 stimola la proliferazione dei T-helper e attiva i linfociti T citotossici. La selezione dei linfociti B viene effettuata dall'interazione di Ag con frammenti Fab di Ig M sulla superficie di queste cellule. L'epitopo di questo Ag in combinazione con la molecola MHC di classe II riconosce il recettore T-helper, dopodiché le citochine vengono secrete dal linfocita T, stimolando la proliferazione dei linfociti B e la loro differenziazione in plasmacellule che sintetizzano gli anticorpi contro questo Ag . Il recettore citotossico dei linfociti T si lega al determinante antigenico in complesso con la molecola MHC di classe I sulla superficie di una cellula tumorale o infetta da virus. Nell'interazione molecolare è coinvolta la differenziazione Ag del linfocita T citotossico CD 8. Dopo aver legato le molecole delle cellule interagenti, il linfocita T citotossico uccide la cellula bersaglio.
Riso. 5. Sistema di interazione a tre cellule durante lo sviluppo della risposta immunitaria umorale.
Il linfocita B riceve informazioni specifiche sull'antigene dal macrofago che ha assorbito il materiale estraneo e informazioni non specifiche dall'induttore dell'immunopoiesi (II) secreto dal linfocita T dopo il riconoscimento dell'antigene. In condizioni in cui tutti e tre i tipi di cellule cooperano, si sviluppa una risposta immunitaria a tutti gli effetti. Se il linfocita B riceve solo informazioni sull'antigene dal macrofago e non c'è aiuto dal linfocita T, viene indotta una specifica non risposta: tolleranza. Quando agisce su una cellula B, solo II provoca la sintesi di immunoglobuline non specifiche.
Riso. 6. Interazione tra cellule timo(fonte di cellule T) e cellule del midollo osseo (fonte di cellule B) quando si induce una risposta immunitaria umorale.
La risposta umorale si sviluppa come un processo complesso che coinvolge diversi tipi di cellule. L'introduzione di topi irradiati solo cellule del midollo osseo - BCM (linfociti B) o solo cellule della ghiandola del timo - KVZH (cellule T) non garantisce lo sviluppo di una risposta immunitaria di forza sufficiente. Allo stesso tempo, l'introduzione di una miscela di queste cellule porta alla formazione di un'intensa produzione di anticorpi contro gli eritrociti di ariete. Inoltre, la risposta con una tale introduzione congiunta di cellule è molto più alta della somma delle risposte con somministrazione separata di cellule. varie origini. Altrimenti cooperazione vari tipi cellule porta ad un effetto sinergico. La risposta è stata valutata dal numero di cellule che formano la placca (PCC) nella milza.
Riso. 7. Sviluppo della risposta immunitaria umorale.
Schema "totale", tenendo conto delle sottopopolazioni di linfociti che sono coinvolte nell'induzione della genesi degli anticorpi, passando dalla sintesi di IgM alla sintesi di IgG e alla creazione di cellule di memoria. L'antigene (AG) catturato dai macrofagi (MF) viene visualizzato sulla superficie cellulare in forma immunogenica. I T-helper "precoci" con un fenotipo entrano nella reazione di riconoscimento dell'ipertensione, che contribuisce alla maturazione dei T-helper "tardivi" che aiutano la produzione di anticorpi. Lo sviluppo della risposta IgM primaria non richiede l'assistenza di Tx Lut1. Per l'accumulo di plasmacellule che producono anticorpi IgM (PC IgM), è ovvio che è sufficiente un semplice riconoscimento di AG sulla superficie MF. Tuttavia, l'assistenza di Tx Lut1 è necessaria per il passaggio intracellulare della sintesi di IgM alla sintesi di IgG, l'accumulo di plasmacellule che sintetizzano e secernono IgG (IgG PC) e l'ingresso di cellule di memoria (IgG PC) nella risposta immunitaria secondaria.
La risposta immunitaria cellulare è caratterizzata dalla proliferazione di commit cellule immunocompetenti reagisce con l'antigene in complesso con la molecola MHC di classe I sulla superficie di cellule estranee o immunogeni endogeni in complesso con la molecola MHC di classe I sulla superficie delle proprie cellule tumorali e infette da virus. Il linfocita T citotossico è coinvolto nella risposta immunitaria cellulare. Linfociti T citotossici (TC). Presentato sulla superficie della cellula bersaglio, Ag in combinazione con la molecola MHC di classe I si lega al recettore citotossico dei linfociti T. La molecola CD8 della membrana cellulare Tc è coinvolta in questo processo. Secreta dal T-helper IL-2 stimola la proliferazione dei linfociti T citotossici. Distruzione della cellula bersaglio. I linfociti T citotossici riconoscono la cellula bersaglio e vi si attaccano. Nel citoplasma di un linfocita T citotossico attivato, ci sono piccoli organelli scuri che assomigliano a granuli di deposito di cellule secretorie. I granuli sono concentrati in quella parte del T-killer, che si trova più vicino al punto di contatto con la cellula bersaglio. Parallelamente, c'è un riorientamento del citoscheletro e uno spostamento in quest'area del complesso del Golgi, in cui si formano i granuli. Contengono la proteina citolitica perforina.
Le molecole di perforina rilasciate dal T-killer vengono polimerizzate nella membrana della cellula bersaglio in presenza di Ca2+. I pori di perforina formati nella membrana plasmatica della cellula bersaglio consentono il passaggio di acqua e sali, ma non di molecole proteiche. Se la polimerizzazione della perforina avviene nello spazio extracellulare o nel sangue, dove c'è un eccesso di calcio, allora il polimero non sarà in grado di penetrare nella membrana e uccidere la cellula. L'azione specifica del T-killer si manifesta solo a seguito di uno stretto contatto tra esso e la cellula bersaglio, che si ottiene grazie all'interazione di Ag sulla superficie della vittima con i recettori del T-killer. Lo stesso T-killer è protetto dall'azione citotossica della perforina. Il meccanismo di autodifesa è sconosciuto. Meccanismo alternativo distruzione della cellula bersaglio, secondo cui i linfociti T citotossici e le cellule NK sono la fonte di un segnale che innesca un programma suicidario già preesistente nella cellula bersaglio. L'azione di questo segnale è potenziata dai glucocorticoidi.
-quantificazione:
1. Determinazione del numero di linfociti B mediante il metodo di EAC - formazione di rosette (EAC-ROK).
Principio del metodo: simile alla reazione a rosetta per la rilevazione dei linfociti T, ma al posto degli eritrociti di montone vengono utilizzati eritrociti bovini (E) carichi di anticorpi (A) e complemento (C). L'interazione è dovuta alla presenza di recettori del complemento nei linfociti B.
2. Determinazione del numero di linfociti B (CD20+ o CD19+) mediante ELISA e citometria a flusso.
- valutazione qualitativa (funzionale).:
1. Determinazione della concentrazione di immunoglobuline nella reazione di precipitazione secondo Mancini ed ELISA.
Il principio del metodo secondo Mancini: i campioni del siero del test vengono posti nei pozzetti di un gel di agar, che contiene anticorpi contro una certa classe di immunoglobuline. Le immunoglobuline che si diffondono nell'agar, quando interagiscono con gli anticorpi corrispondenti, formano anelli precipitati, il cui diametro è proporzionale alla concentrazione di immunoglobuline della classe corrispondente nel siero del test. La concentrazione di immunoglobuline viene determinata secondo un grafico (curva di calibrazione) precostituito utilizzando sieri di riferimento.
2. Determinazione dell'attività funzionale dei linfociti mediante RBTL per il mitogeno B.
3. Determinazione della produzione di IL-6 mediante ELISA e citometria a flusso.
TEST DI ALLERGIA CUTANEA
Sono utilizzati per rilevare la terapia ormonale sostitutiva (allergie infettive). DTH è una risposta mediata dai linfociti T. ruolo importante nella patogenesi di molte infezioni (tubercolosi, lebbra, brucellosi, sifilide, ecc.).
Gli allergeni (corpuscolari e solubili) vengono utilizzati per allestire test allergici:
Gli allergeni solubili sono singole frazioni della parete cellulare isolate dai microbi:
1) tubercolina purificata (PPD-L) - proteina purificata (proteina a basso peso molecolare) del bacillo tubercolare. Viene utilizzato per rilevare le allergie all'agente eziologico della tubercolosi (test di Mantoux);
2) allergene della brucellosi (brucella) - complesso polisaccaridico-proteico B. abortus. È usato per rilevare le allergie all'agente eziologico della brucellosi.
3) allergene dell'antrace (antrace) - complesso proteina-nucleo-saccaride. Utilizzato per rilevare allergie agli agenti patogeni antrace.
Allergeni corpuscolari (sospensione di microbi uccisi):
1) l'allergene della tularemia (tularin) viene utilizzato per rilevare le allergie all'agente eziologico della tularemia.
2) la lepromina viene utilizzata per rilevare le allergie all'agente eziologico della lebbra.
Il principio del metodo: una piccola quantità di allergene viene iniettata per via intradermica o cutanea nella superficie palmare dell'avambraccio. In presenza di un'allergia infettiva dopo 24-48-72 ore. L'allergia infettiva si sviluppa sotto forma di iperemia, infiltrazione, edema cutaneo (Fig. 17).
Riso. 17. Meccanismo della terapia ormonale sostitutiva.
PROVE
Scegli una risposta corretta
1. Qual è lo scopo della reazione di Coombs?
1) rilevare le opsonine;
2) rilevare anticorpi incompleti;
3) stabilire il tipo di microrganismo;
4) determinare il sierotipo di un microrganismo;
5) per rilevare le antitossine.
2. Specificare il meccanismo del primo stadio della reazione sierologica
1) agglutinazione;
2) precipitazioni;
3) connessione di AG con AT;
5) legame del complemento.
3. Quale reazione può essere utilizzata per valutare lo stato del T-link sistema immunitario?
3) citometria a flusso;
4) opson - reazione fagocitaria.
4. Quale fenomeno di reazioni sierologiche si osserva se l'antigene è un'esotossina?
1) precipitazioni;
2) agglutinazione;
3) opsonizzazione;
5) neutralizzazione.
5. EAC-ROK si basa sull'identificazione...
1) recettore delle cellule B C3;
2) cellule A del recettore C3;
3) recettori per gli eritrociti;
4) Recettori Fc.
6. EA-ROC si basa sull'identificazione...
1) recettori delle cellule B C3;
2) Fc-recettori delle cellule A;
3) Fc-recettori delle cellule T;
4) recettori per gli eritrociti.
7. Assegna un nome ai componenti del sistema del complemento che hanno proprietà opsonantizzanti
8. Assegna un nome ai componenti del sistema del complemento che forniscono un'azione litica
4) C3A, C3B;
9. La dose di lavoro del complemento è ...
1) titolo del complemento;
2) titolo ridotto del 25-30%;
3) titolo aumentato del 25-30%;
4) 1/2 titolo.
10. Assegna un nome al marcatore T-killer
11. L'attivazione dei linfociti T provoca ...
1) mitogeno Lakonos;
2) lipopolisaccaride;
3) fitoemoagglutinina;
5) polivinilpirrolidone.
12. Il linfoblasto è...
13. Assegna un nome alla citochina T-helper che stimola la proliferazione e la differenziazione di altre sottopopolazioni di cellule T.
1) interleuchine;
14. Un antigene è coinvolto nella reazione di agglutinazione ...
1) solubile;
2) corpuscolare;
15. Un aumento della sensibilità dei batteri alla fagocitosi è una reazione ...
1) agglutinazione;
2) neutralizzazione della tossina;
3) opsonizzazione;
4) legame del complemento;
5) precipitazioni.
16. Quali antigeni sono coinvolti nella reazione di agglutinazione?
2) polisaccaridi;
3) esotossina;
4) cellule microbiche.
17. Assegna un nome agli antigeni - marcatori di T-killer
18. Quale reazione viene utilizzata per identificare i linfociti T?
2) EA - ROCCIA;
3) EAC - ROCCIA;
19. L'attivazione dei linfociti T provoca ...
1) mitogeno Lakonos;
2) lipopolisaccaride;
3) fitoemoagglutinina;
5) polivinilpirrolidone.
20. Il linfoblasto è...
1) linfocita nella fase finale del differenziamento;
2) linfociti con proprietà effettrici citotossiche;
3) precursore di linfociti maturi;
4) linfocita nella fase di riproduzione intensiva.
21. Un indicatore dell'attività del processo infettivo è ...
22. AG - una sospensione di 2 miliardi di batteri in soluzione fisiologica provoca il seguente fenomeno di reazione sierologica:
1) precipitazioni;
2) agglutinazione;
3) opsonizzazione;
5) flocculazione.
23. Determinanti immunoglobulinici interagenti con anticorpi antiglobulina utilizzati nei test sierologici "indiretti"?
1) idiotipico;
2) allotipico;
3) isotipo.
24. L'interferone immunitario è...
1) interferone beta;
2) gamma-interferone;
3) interferone alfa.
25. Parte della molecola anticorpale responsabile dell'attivazione del complemento
1) "L" - catene;
2) Fc – frammento;
3) Fav - frammento;
4) centri attivi;
26. Assegna un nome alla citochina T-helper che stimola la proliferazione e la differenziazione di altre sottopopolazioni di cellule T.
27. Quali anticorpi vengono utilizzati per il dosaggio immunoenzimatico?
1) anticorpi che reagiscono con gli enzimi;
2) anticorpi coniugati con enzimi
3) anticorpi che neutralizzano l'azione degli enzimi.
28. Quanto tempo ci vuole per la manifestazione della TOS a un allergene?
1) pochi minuti;
4) 12 ore;
5) non prima di 6 ore.
29. Quali linfociti svolgono il ruolo principale nella terapia ormonale sostitutiva?
1) linfociti B1;
2) linfociti B;
3) T-helper;
4) linfociti T sensibilizzati;
5) T-killer.
30. L'attivazione dei linfociti B non causa ...
1) fitoemoagglutinina;
2) cocanavalina A;
3) lipopolisaccaride;
4) antigeni;
5) citochine.
31. Il percorso classico dell'attivazione del complemento è innescato da...
1) complesso AG - AT;
2) lipopolisaccaridi di microbi;
3) attraverso il sistema appropriatedin.
32. Assegna un nome alla funzione che i componenti del complemento attivato non causano.
1) distruggere le cellule;
2) migliorare la fagocitosi;
3) partecipare a reazioni anafilattiche;
4) causare chemiotassi;
5) stimolare la produzione di anticorpi.
33. Quali recettori ci sono sui macrofagi?
3) eritrociti.
34. Specificare il nome del siero richiesto per il test di agglutinazione ai fini della sierodiagnosi
1) diagnostico;
2) siero di prova;
3) salino;
4) siero diagnostico;
5) complementare.
35. Denominare il metodo di impostazione della reazione di agglutinazione
1) in apposite provette del diametro di 0,5 cm;
2) su vetro;
36. Assegna un nome al recettore - marcatore dei linfociti T
1) FC - recettori per Ig;
2) agli eritrociti di topo;
3) recettori C3 per il complemento;
4) agli eritrociti di pecora.
37. Assegna un nome al recettore presente sui linfociti B
1) virus del morbillo;
2) virus dell'herpes;
3) Virus di Epstein-Barr;
4) eritrociti di pecora.
38. L'attivazione dei linfociti B è causata da le seguenti sostanze
1) fitoemoagglutinina;
2) cocanavalina A.
39. Le citochine sono...
1) proteine formate da cellule attivate del sistema immunitario;
2) interferoni;
3) interleuchine;
5) leuchine.
40. Indicare l'antigene coinvolto nella reazione RP
1) corpuscolare;
2) solubile.
41. Quali sono i modi principali per impostare RP
1) reazione su vetro;
2) reazione in un gel;
3) reazione estesa.
42. Nomina le condizioni che determinano il tasso di reazioni sierologiche
1) il rapporto ottimale tra antigene e anticorpo;
2) pH del mezzo;
3) il grado di specificità dell'antigene e dell'anticorpo;
4) temperatura;
5) concentrazione di elettroliti.
43. Assegna un nome al recettore, un marker dei linfociti T
1) Fc - recettore per IgA;
2) per eritrociti di topo;
3) C3, recettore del complemento;
4) per gli eritrociti di pecora.
44. I test di allergia cutanea vengono utilizzati per rilevare le seguenti reazioni
1) reazione anafilattica;
2) reazione citotossica;
3) reazione immunocomplessa;
4) risposta cellulo-mediata.
45. Assegna un nome al componente antigenico dell'RNHA
1) diagnostico eritrocitario;
2) soluzione salina;
3) siero del paziente;
4) siero porcellino d'India;
5) siero emolitico.
46. Nome degli allergeni utilizzati per rilevare la terapia ormonale sostitutiva
1) sospensione di batteri uccisi;
2) polline delle piante;
3) virus.
47. L'allergia infettiva è una maggiore sensibilità a ...
1) allergeni di microrganismi;
2) allergeni sierici;
3) polline delle piante;
4) allergeni alimentari.
48. Test di allergia cutanea utilizzati nella tubercolosi
1) r. Mantova;
2) r. Burne;
3) r. con tularina;
4) r. con antraxina;
5) r. con allergene candida.
49. Il sistema diagnostico RSC include il seguente antigene
1) complemento;
2) diagnostico;
3) siero del sangue del paziente;
4) eritrociti di pecora;
5) siero emolitico.
50. Il sistema indicatore RSC include il seguente antigene
1) complemento;
2) diagnostico;
3) siero del sangue del paziente;
4) eritrociti di pecora;
5) siero emolitico.
51. A che scopo è p. opsonizzazione?
1) rilevazione di anticorpi nel siero studiato;
2) rilevamento di anticorpi contro virus;
3) identificazione di AG microbici;
4) istituire un serovar di batteri.
52. Indicare i reagenti utilizzati per rilevare gli anticorpi nel metodo indiretto del dosaggio immunoenzimatico
1) anticorpi marcati contro l'antigene;
2) anticorpi marcati contro immunoglobuline;
3) anticorpi non marcati contro le immunoglobuline;
4) complementare.
53. Assegnare un nome all'ingrediente che funge da etichetta per il dosaggio immunoenzimatico
1) enzima indicatore;
2) antigeni;
3) anticorpi marcati con enzimi;
4) anticorpi non marcati;
5) cromogeno.
54. Nomina i metodi di analisi immunochimica che utilizzano un substrato cromogenico
1) saggio radioimmunologico;
2) analisi immunofluorescente;
3) immunoelettroforesi;
4) immunoblotting.
55. Selezionare le caratteristiche del metodo immunoblot
1) basato su una combinazione di elettroforesi e immunodosaggio enzimatico;
2) consente di rilevare i nucleotidi;
3) consente di giudicare la sieroconversione;
4) include l'uso di anticorpi marcati.
56. Qual è lo scopo della reazione di neutralizzazione?
1) opsonine
2) tossine
3) anticorpi incompleti
4) antigene ottenuto per ebollizione.
57. Assegna un nome agli antigeni coinvolti nella reazione di neutralizzazione
2) polisaccaridi;
3) antigeni corpuscolari;
4) estratti cellulari.
58. Le reazioni di precipitazione sono usate per...
1) rilevazione di anticorpi nel siero del test;
2) rilevamento di anticorpi contro virus;
3) identificazione di antigeni microbici;
4) istituire un serovar di batteri;
5) stabilire il sierogruppo di microrganismi.
59. Assegna un nome alla reazione utilizzata per determinare gli anticorpi incompleti
1) reazione di Ouchterlony;
2) Reazione di Coombs;
3) Reazione di Wasserman
60. Assegna un nome al siero utilizzato per neutralizzare l'attività biologica del virus
1) siero antitossico;
2) siero antivirale;
3) esotossina;
61. Assegnare un nome all'oggetto indicatore nell'RN per determinare l'effetto citopatogeno del virus
1) embrioni di pollo;
2) animali da laboratorio;
4) siero immunitario;
5) coltura tissutale
62. Le reazioni di neutralizzazione si basano sull'inibizione da parte degli anticorpi ...
1) proprietà infettive dei virus;
2) embrione di pollo
63. Le reazioni PH vengono utilizzate per determinare ...
1) attività delle esotossine;
2) attività endotossina
64. Quali sono i modi per impostare il pH.
1) nel corpo di animali da laboratorio;
2) su vetro con metodo a goccia
65. Gli indicatori PH sono ...
1) particelle di lattice;
2) eritrociti
66. La determinazione delle immunoglobuline secondo Mancini è...
1) RP in gel;
2) PR in provetta;
RISPOSTE AI TEST
| 1. | 23. | 45. | |||
| 2. | 24. | 46. | |||
| 3. | 25. | 47. | |||
| 4. | 26. | 48. | |||
| 5. | 27. | 49. | |||
| 6. | 28. | 50. | |||
| 7. | 29. | 51. | |||
| 8. | 30. | 52. | |||
| 9. | 31. | 53. | |||
| 10. | 32. | 54. | |||
| 11. | 33. | 55. | |||
| 12. | 34. | 56. | |||
| 13. | 35. | 57. | |||
| 14. | 36. | 58. | |||
| 15. | 37. | 59. | |||
| 16. | 38. | 60. | |||
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COMPITI SITUATIVI
Compito 1. Una coltura pura di Sh.flexneri è stata isolata dalle feci di un paziente con sospetta dissenteria. Quale reazione sierologica consentirà di determinare il sierotipo dell'agente patogeno per decifrare la situazione epidemiologica? Assegna un nome ai componenti della reazione.
Compito 2. Un paziente è stato ricoverato in clinica con una presunta diagnosi: "Influenza", "Parainfluenza". Per la diagnostica rapida è stato impostato un metodo RIF indiretto. Assegna un nome ai componenti della reazione.
Compito 3. Due pazienti con presunta diagnosi di Epatite A sono stati ricoverati presso l'Ospedale Malattie Infettive. Nel primo paziente, nel siero del sangue sono state trovate IgM contro il virus dell'epatite A e nel secondo - IgG. Quale metodo può essere utilizzato per determinare le Ig? Quale dei pazienti è stato diagnosticato e perché?
Compito 4.È stata isolata una coltura pura del virus della poliomielite. È necessario determinare il sierotipo del virus (1,2,3) nella reazione di neutralizzazione su coltura tissutale. Nomina gli ingredienti e il meccanismo della reazione.
Compito 5. Il laboratorio virologico ha ricevuto materiale (liquido cerebrospinale) da un paziente con diagnosi presunta di encefalite da zecche. Dopo l'isolamento di una coltura pura del virus, viene effettuata l'identificazione del virus nella RN nei topi. Nomina gli ingredienti e il meccanismo della reazione.
Compito 6. Il laboratorio ha ricevuto il siero del sangue di un paziente che era stato malato di febbre tifoide. Quale reazione sierologica può essere utilizzata per stabilire il vettore batterico del tifo? Dai un nome agli ingredienti.
Compito 7.È raro isolare una coltura pura di M.pneumoniae e non prima di un mese dopo. A questo proposito, il metodo principale per diagnosticare la polmonite è la sierodiagnosi, che viene eseguita impostando RSK. Assegna un nome ai componenti della reazione.
Compito 8. Nello studio della faringe staccabile del paziente è stata isolata una coltura di C. diphteriae. Quale metodo dovrebbe essere utilizzato per determinare la sua tossigenicità? Nomina gli ingredienti della reazione.
Compito 9. Per chiarire la diagnosi della malattia di un paziente con sospetta brucellosi, è necessario utilizzare una reazione opsonofagocitica. Quali ingredienti dovrebbero essere preparati per la sua ambientazione? Cosa sono le opsonine, l'indice fagocitico e l'indice opsonico?
Compito 10. Quali ingredienti devono essere preparati per impostare un metodo ELISA indiretto per determinare i T-helper?
Compito 11. In un paziente con sepsi cronica è necessaria una valutazione dello stato immunologico. Quali ingredienti devono essere preparati per impostare un metodo ELISA indiretto per determinare i linfociti B?
Compito 12. Un bambino di 3 anni è sospettato di avere stato di immunodeficienza. Quali indicatori verranno utilizzati per valutare il sistema B di immunità e quali test saranno inclusi nell'analisi immunologica?
Compito 13. Il laboratorio ha ricevuto sangue da un paziente con febbre tifoide per il test di agglutinazione. Quali ingredienti verranno utilizzati per allestirlo? Quale indicatore di reazione verrà utilizzato come indicatore diagnostico?
Compito 14. E.coli è stato isolato dalle feci del paziente. Quali metodi di reazione di agglutinazione verranno utilizzati per identificare la coltura?
Compito 15. Nell'asilo è prevista la rivaccinazione dei bambini contro la tubercolosi. Che tipo di test allergico e per quale scopo i bambini dovrebbero essere testati preliminarmente? Quale farmaco viene utilizzato per allestire il campione?
Compito 16. Il laboratorio ha ricevuto materiale (pelle di un cappotto di montone) per identificare l'agente eziologico dell'antrace. Che cosa reazione sierologica dovrebbe essere utilizzato per rilevare antigeni patogeni nel materiale di prova? Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione?
Compito 17. Il laboratorio ha ricevuto il sangue di un paziente con sospetta influenza. Per confermare la diagnosi, è necessario inserire RSK. Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione? Su quale base valuterai un positivo o risultato negativo reazioni?
Compito 18. Una coltura del virus dell'influenza A è stata isolata mediante infezione nella cavità allantoica di un embrione di pollo. È necessario inserire RTGA per determinare il sierotipo del virus dell'influenza. Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione? Su che base si può valutare il risultato della reazione?
Compito 19. Il laboratorio ha ricevuto un tampone dal rinofaringe di un paziente con infezione da adenovirus. È necessario mettere una reazione di neutralizzazione per scopi diagnostici. Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione? Valuta il risultato.
Compito 20. IN asiloè prevista la vaccinazione contro difterite e tetano con vaccino ADS. Che cosa reazione immunologica utilizzato per determinare l'intensità dell'immunità post-vaccinazione? Quali ingredienti dovrebbero essere preparati? Come viene valutata la risposta?
Compito 21. Il laboratorio dell'Istituto di vaccini e sieri ha ricevuto siero antidifterico per determinarne l'attività specifica. Quale reazione dovrebbe essere usata per questo scopo? Quali ingredienti dovrebbero essere preparati per la sua ambientazione?
Compito 22. Il laboratorio ha ricevuto sangue da un paziente con sospetto tifo epidemico. Studiandolo nella reazione di agglutinazione, è stato ottenuto un risultato positivo (titolo sierico 1:800). Gli anticorpi nel tifo vengono rilevati dal 5-6° giorno di malattia, raggiungono il massimo entro il 14-16° giorno e rimangono nel corpo di coloro che sono malati da molti anni.
È stato possibile fare una diagnosi eziologica? Perché? Quali ulteriori ricerche possono essere suggerite?
Compito 23. In una lattaia di una fattoria statale, un esame del sangue per la presenza di anticorpi contro la Brucella ha rivelato un titolo di 1:200. Come dimostrare se la lattaia è malata al momento o questo indicatore è il risultato della vaccinazione?
Compito 24. IN reparto chirurgico Il paziente ha sviluppato una complicazione della ferita postoperatoria. Clinicamente, si sospettava cancrena gassosa. L'RNGA è stato inserito per rilevare l'esotossina nel sangue del paziente. Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione?
Compito 25. Una nave con un carico proveniente dall'Africa è arrivata al porto. Il servizio di quarantena portuale ha trovato i cadaveri dei topi nelle stive. Specificare il metodo di esame sierologico del termoestratto del materiale cadaverico dei ratti. Probabile diagnosi di peste.
Compito 26. Un uomo di 40 anni è andato dal medico l'8° giorno di malattia. Qualche giorno fa ha fatto il bagno nel fiume, a monte del quale c'era un posto per il bestiame. La leptospirosi è stata segnalata tra gli animali della zona. Il medico sospettava la possibilità di leptospirosi. Per confermare la diagnosi, è necessario inserire una reazione di agglutinazione-lisi. Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione? Su che base valuterete il risultato positivo o negativo della reazione? Come viene valutata la risposta? Assegna un nome al meccanismo di reazione.
Compito 27. In uno degli asili sono stati segnalati casi di scarlattina. Come verificare la presenza di immunità antitossica alla scarlattina nei bambini a contatto? Quali ingredienti devono essere preparati per la sua ambientazione?
Compito 28. I primi esperimenti sull'immunizzazione antitubercolare furono condotti da R. Koch. Ha ripetutamente iniettato la tubercolina in una cavia e poi l'ha infettata con il micobatterio tubercolare. L'animale è morto di tubercolosi in 2-4 settimane. Perché gli animali non avevano l'immunità contro la tubercolosi?
RISPOSTE AI COMPITI SITUATIVI
1. RA su vetro con metodo a goccia.
Componenti: Coltura pura isolata di Sh.flexneri, sieri monorecettori diagnostici contro Sh.flexneri tipi 1 e 2, soluzione fisiologica.
2. Secrezione nasofaringea, sieri diagnostici specie-specifici (antiinfluenzali e antiparainfluenzali), siero antiglobulinico marcato con fluorocromo; soluzione isotonica di cloruro di sodio
3. L'Ig delle singole classi viene determinata mediante ELISA. L'epatite A è confermata nel primo paziente, poiché l'Ig M è un indicatore dell'attività del processo infettivo.
4. Virus in studio, sieri diagnostici tipo-specifici con anticorpi contro tre sierotipi di virus della polio, colture tissutali. La reazione è presa in considerazione dall'assenza di CPE sulla coltura tissutale dovuta alla neutralizzazione delle proprietà patogene del virus da parte di anticorpi specifici.
5. Virus in esame, siero diagnostico specie-specifico con anticorpi contro il virus encefalite da zecche, topi bianchi per esperienza e controllo (virus senza siero). Con una reazione positiva, il topo sopravvive grazie alla neutralizzazione della proprietà infettiva del virus da parte di anticorpi omologhi.
6. Reazione di Vi-emoagglutinazione passiva. Ingredienti: siero paziente, erythrocyte Vi diagnosticum (Vi - AG S.typhi adsorbito sulla superficie degli eritrociti di ariete), soluzione fisiologica.
7. Siero del sangue del paziente, M.pneumoniae diagnosticum, siero di cavia (complemento), eritrociti di ariete, siero emolitico, soluzione fisiologica.
8. RP in gel secondo Ouchterlony. Ingredienti: coltura pura isolata di C. diphtheriae, una striscia di carta da filtro impregnata di antidifterico siero antitossico, Piastra Petri con mezzo nutritivo.
9. Ingredienti: siero del sangue di prova, coltura microbica giornaliera, sospensione di neutrofili (fagociti).
Le opsonine sono anticorpi (IgG, parzialmente IgA) che potenziano la fagocitosi dei microbi. Il ruolo delle opsonine è svolto anche dai componenti del complemento, le proteine fase acuta, proteine tensioattive dei polmoni e altri fattori.
Indice fagocitico: il numero di microbi assorbiti da un neutrofilo viene determinato contando il numero medio di batteri fagocitati per leucocita.
Indice opsonico - indice fagocitico del siero immunitario (testato) / indice fagocitico del siero normale.
Maggiore è l'indice opsonico (dovrebbe essere > 1), maggiore è l'immunità.
10. Ingredienti: plasma sanguigno (sospensione linfocitaria), anticorpi monoclonali contro cellule CD3, siero antiglobulina marcato con perossidasi; substrato per perossidasi (OPD), soluzione salina tamponata con fosfato.
11. Ingredienti: plasma sanguigno (sospensione linfocitaria), anticorpi monoclonali contro cellule CD19-22, siero antiglobulina marcato con perossidasi; substrato per perossidasi (OPD), soluzione salina tamponata con fosfato.
12. Determinazione del numero di linfociti B mediante il metodo EAC - formazione di rosette (EAC-ROK), ELISA, PC. Determinazione della concentrazione di immunoglobuline nella reazione di precipitazione secondo Mancini, ELISA. Determinazione della produzione di IL-4, 5, 6 mediante ELISA e citometria a flusso.
13. Ingredienti: siero di sangue del paziente nelle diluizioni 1:100, 1:200, 1:400, 1:800; diagnosticums (S.typhi, S.P.A., S.P.B), soluzione fisiologica. Titolo diagnostico - 1:200, cioè la reazione è considerata positiva in presenza di agglutinazione in una diluizione del siero di 1:200 o superiore. Di solito si verifica in grandi diluizioni. Se si osserva l'agglutinazione di gruppo con due o tre antigeni, la reazione viene presa in considerazione dalla massima diluizione del siero.
14. RA su vetro con metodo a goccia. Una reazione positiva è confermata da una RA dispiegata.
15. Prima della vaccinazione, viene eseguito un test di Mantoux per determinare l'immunità non sterile anti-tubercolosi post-vaccinazione. Le persone con un test di Mantoux negativo sono soggette a rivaccinazione. Per il test viene utilizzata la tubercolina purificata (PPD-L), una proteina purificata del bacillo tubercolare.
16. RP secondo Ascoli. Per avviare una reazione di precipitazione, è necessario disporre di: precipitinogeno - aptene di B. antanthracis (estratto di tessuto), precipitina (siero anti-antrace precipitante) e soluzione salina.
17. Ingredienti: sieri di sangue appaiati (sieri prelevati all'inizio e alla fine della malattia), diagnostico del virus dell'influenza, complemento (siero di cavia), siero emolitico, sospensione al 3% di eritrociti di pecora, soluzione salina. Con una reazione positiva si osserva emoagglutinazione, con una reazione negativa si osserva emolisi degli eritrociti (sangue laccato). Valore diagnostico ha un aumento di quattro volte del titolo anticorpale nel secondo siero.
18. Liquido allantoideo dell'embrione di pollo, sieri diagnostici anti-influenzali tipo-specifici: A0, A1, A2; Sospensione al 5% di eritrociti di pollo, soluzione fisiologica.
La reazione viene posta sul vetro con il metodo della goccia. 1 goccia di siero diagnostico e materiale di prova vengono applicati al vetro, miscelati, quindi viene aggiunta 1 goccia di sospensione di eritrociti. Con una reazione positiva si osserva un arrossamento omogeneo e con una reazione negativa cadono fiocchi rossi (emoagglutinazione).
19. Flushing dal rinofaringe, siero diagnostico specifico per specie con anticorpi contro l'adenovirus, indicatore di reazione (colture tissutali o eritrociti).Con una reazione positiva, vi è un ritardo nell'effetto citopatogeno nella coltura tissutale o l'assenza di emoagglutinazione).
20. Gioco di ruolo. Ingredienti richiesti: siero di prova in varie diluizioni (1:10, 1::20, 1:40, ecc.); diagnostici eritrocitari (difterite e tetano), soluzione fisiologica, sieri di controllo (antidifterite e antitetano) con attività di 10 UI/ml.
La contabilizzazione della reazione viene effettuata in base al grado di agglutinazione degli eritrociti. A contraccolpo gli eritrociti si depositano sotto forma di un punto compatto o di un anello spesso, con uno positivo si depositano sotto forma di uno strato uniforme di cellule con un bordo irregolare (a forma di ombrello).
Il titolo di antitossina nel materiale di prova è considerato l'ultima diluizione massima, in cui si osserva ancora l'agglutinazione.
21. Puoi usare la reazione di flocculazione. Ingredienti di reazione: siero antidifterico in varie diluizioni, tossoide difterico con attività 1Lf, soluzione fisiologica.
L'attività sierica è espressa in UI/ml. ( importo minimo siero, che dà un'intensa flocculazione "iniziale" con 1Lf del tossoide). Il fenomeno della flocculazione - (torbidità) - è una manifestazione esterna della formazione del complesso tossoide + antitossina nei rapporti quantitativi ottimali degli ingredienti.
22. No perché la reazione può essere positiva in 3 casi: nei pazienti che sono stati malati e vaccinati. Si raccomanda di ripetere la reazione dopo 10-14 giorni per determinare l'aumento del titolo anticorpale di 4 o più volte, che viene determinato solo nei pazienti.
23. La diagnosi può essere confermata mediante ELISA mediante la determinazione delle IgM e IgG anti-brucellosi. Le IgM sono un indicatore di brucellosi acuta.
24. Diluizioni doppie del siero studiato, anticorpo diagnostico eritrocitario (eritrociti con antitossine adsorbite a esotossine dei corrispondenti tipi di agenti patogeni della cancrena gassosa), soluzione salina.
25. Reazione di precipitazione di Ascoli thermoring.
26. Ingredienti della reazione: siero sanguigno da testare in varie diluizioni, coltura viva di laboratorio di leptospira, complemento, soluzione fisiologica. La reazione viene presa in considerazione nelle preparazioni di una goccia "schiacciata" in campo oscuro o con microscopia a contrasto di fase. Sotto l'influenza delle batteriolisine antileptospirali in presenza di complemento, le leptospira perdono la loro mobilità e si disintegrano.
27. È possibile verificare la presenza di immunità alla scarlattina nei bambini in contatto utilizzando RPHA .. Ingredienti della reazione: siero di prova (diluito con una soluzione fisica da 1:10 a 1:20480 in 12 pozzetti di una piastra di polistirene), diagnostico scarlattina eritrocita (Str.pyogenes anatoxin, adsorbito sulla superficie degli eritrociti), siero di controllo della difterite con un'attività di 10 UI / ml, soluzione salina;
Il titolo di antitossina nel materiale di prova è considerato l'ultima diluizione massima, che causa ancora l'agglutinazione degli eritrociti.
28. La tubercolina viene utilizzata per allestire un test dermo-allergico al fine di identificare una sensibilizzazione specifica ad un allergene infettivo, che si verifica a seguito della corrente, malattie trasferite, vaccinazione o infezione. Per prevenzione specifica viene utilizzato il vaccino BCG.
ELENCO DELLA LETTERATURA USATA
Letteratura principale:
1. Microbiologia medica, virologia e immunologia: un libro di testo per studenti di medicina. università / ed. AA Vorobieva. - 2a ed., rev. e aggiuntivi M. : MIA, 2012. - 702 p.
2. Korotyaev A.I., Babichev. S. A. Microbiologia medica, immunologia e virologia [risorsa elettronica]: un libro di testo per il miele. università. San Pietroburgo: SpecLit, 2010.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html.
3. VV Zverev, M. N. Boychenko. Microbiologia medica, virologia e immunologia [risorsa elettronica]: libro di testo: in volumi 2. Vol. 1. M .: Geotar Media, 2010.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html.
4. V. V. Zverev, M. N. Boychenko. Microbiologia medica, virologia e immunologia [risorsa elettronica]: libro di testo: in volumi 2. Vol. 2. M .: Geotar Media, 2010.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html.
5. Khaitov RM Immunologia: libro di testo seconda edizione. - M.: Geotar Media, 2011. - 312s.
6. Khaitov RM Immunologia [risorsa elettronica]: libro di testo. M.: GEOTAR-Media, 2009.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970412220.html.
1. L. V. Kovalchuk, G. A. Ignatieva, L. V. Gankovskaya e altri Immunology. Officina. Metodi di ricerca cellulare, molecolare e genetica [risorsa elettronica]: tutorial. M.: Geotar Media, 2010.
2. R. M. Khaitov, A. A. Yarilin, B. V. Pinegin Immunology [risorsa elettronica]: atlante. M.: GEOTAR-Media, 2011.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970418581.html
3. EN Medunitsyna, R. M. Khaitov, B. V. Pinegin. Metodi diagnostici in allergologia e immunologia [risorsa elettronica]. M.: GEOTAR-Media, 2011.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0001.html.
4. N. F. Snegova, R. Ya Meshkova, M. P. Kostinov e O. O. Magarshak. Profilassi vaccinale in allergologia e immunologia [risorsa elettronica]. M.: GEOTAR-Media, 2011.
Modalità di accesso: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0005.html.
Davletshina Gulshat Kinzyabulatovna
Gabidullin Zainulla Gaynulovich
Akhtarieva Aigul Atlasovna
Tuygunov Marcel Maratovich
Bulgakov Aidar Kazbekovich
Savchenko Tatyana Alekseevna
Husnarizanova Rauza Fazylovna
Gabidullin Yulai Zainullovich
Alsynbaev Makhamat Makhamatullovich
Ci sono due rami dell'immunità acquisita con composizione diversa partecipanti e scopi diversi, ma avendone uno obiettivo comune- eliminazione dell'antigene. Come vedremo in seguito, questi due rami interagiscono tra loro per raggiungere obiettivo finale- eliminazione dell'antigene.
Di questi due filoni della risposta immunitaria acquisita, uno è determinato dal coinvolgimento prevalentemente dei linfociti B e degli anticorpi circolanti, nella forma della cosiddetta immunità umorale (il termine “umorale” era precedentemente utilizzato per definire mezzi liquidi organismo). L'altra direzione è determinata dalla partecipazione delle cellule T che, come abbiamo indicato in precedenza, non sintetizzano anticorpi, ma sintetizzano e rilasciano varie citochine che agiscono su altre cellule. A causa di ciò questa specie la risposta immunitaria acquisita è chiamata immunità cellulare o cellulo-mediata.
immunità umorale
L'immunità umorale è determinata dalla partecipazione di anticorpi sierici, che sono proteine secrete dal legame delle cellule B del sistema immunitario. Inizialmente, dopo il legame degli antigeni a specifiche molecole di immunoglobulina (Ig) di membrana (recettori delle cellule B; recettori delle cellule B - BCR), le cellule B vengono attivate per secernere anticorpi espressi da queste cellule. Si stima che ogni cellula B esprima circa 105 BCR con esattamente la stessa specificità.Dopo il legame con l'antigene, la cellula B riceve i segnali per produrre la forma secreta dell'immunoglobulina che era precedentemente presente nella forma della membrana. Il processo di avvio di una reazione su vasta scala che coinvolge gli anticorpi ha lo scopo di rimuovere l'antigene dal corpo. Gli anticorpi sono una miscela eterogenea di globuline sieriche che hanno la capacità di legarsi indipendentemente ad antigeni specifici. Tutte le globuline sieriche con proprietà anticorpali sono classificate come immunoglobuline.
Tutte le molecole di immunoglobuline hanno proprietà strutturali comuni che consentono loro di: 1) riconoscere e legarsi specificamente a elementi unici della struttura dell'antigene (cioè epitopi); 2) svolgere una funzione biologica generale dopo il legame con un antigene. Fondamentalmente, ogni molecola di immunoglobulina è costituita da due catene identiche leggere (L) e due catene pesanti (H) collegate da ponti disolfuro. La struttura risultante è mostrata in Fig. 1.2.
Riso. 1.2. Tipica molecola anticorpale costituita da due catene pesanti (H) e due leggere (L). Identificati i siti di legame dell'antigene
La parte della molecola che si lega all'antigene è una zona costituita da porzioni terminali di sequenze amminoacidiche su entrambe le catene L e H. Pertanto, ciascuna molecola di immunoglobulina è simmetrica e capace di legarsi a due epitopi identici presenti sulla stessa molecola di antigene o su molecole diverse.
Oltre alle differenze tra i siti di legame dell'antigene, ci sono altre differenze tra le diverse molecole di immunoglobuline, la più importante delle quali riguarda le catene H. Esistono cinque classi principali di catene H (chiamate y, μ, α, ε e δ).
Sulla base delle differenze nelle catene H, le molecole di immunoglobuline sono state suddivise in cinque classi principali: IgG, IgM, IgA, IgE e IgD, ognuna delle quali ha proprietà biologiche uniche. Ad esempio, l'IgG è l'unica classe di immunoglobuline che attraversa la barriera placentare e trasmette immunità materna feto, mentre l'IgA è la principale immunoglobulina presente nelle secrezioni ghiandolari come lacrime o saliva.
È importante notare che gli anticorpi di tutte e cinque le classi possono avere esattamente la stessa specificità per un antigene (siti di legame dell'antigene), pur mantenendo diverse proprietà funzionali (effettori biologici).
Il legame tra antigene e anticorpo è non covalente e dipende da una varietà di forze relativamente deboli come i legami idrogeno, le forze di van der Waals e le interazioni idrofobiche. Poiché queste forze sono deboli, il legame riuscito di un antigene a un anticorpo richiede un contatto molto stretto su un'area limitata, simile al contatto di una chiave e di un lucchetto.
Un altro elemento importante dell'immunità umorale è sistema del complemento. La reazione tra antigene e anticorpo attiva il complemento, che è una serie di enzimi sierici, che porta alla lisi del bersaglio o migliora la fagocitosi (assorbimento dell'antigene) da parte delle cellule fagocitiche. L'attivazione del complemento porta anche al reclutamento di cellule olimorfonucleate (PMN)., che hanno un'elevata capacità di fagocitosi e fanno parte del sistema immunitario innato. Questi eventi forniscono la risposta più efficace del ramo umorale dell'immunità all'invasione di agenti estranei.
Immunità cellulo-mediata
Il ramo antigene-specifico dell'immunità cellulo-mediata coinvolge i linfociti T (Fig. 1.3). A differenza dei linfociti B, che producono anticorpi solubili che circolano per legare i rispettivi antigeni specifici, ogni linfocita T, che porta molti recettori antigenici identici chiamati TCR (circa 105 per cellula), è esso stesso diretto direttamente al sito in cui l'antigene è espresso sul APC. , e interagisce con esso in stretto contatto (direttamente intercellulare).
Riso. 1.3. Recettori per l'antigene espresso come molecole transmembrana sui linfociti B e T
Esistono diverse sottopopolazioni di cellule T che differiscono per fenotipo, ognuna delle quali può avere la stessa specificità per un determinante antigenico (epitopo), ma allo stesso tempo svolgere varie funzioni. In questo caso, possiamo tracciare un'analogia con diverse classi di molecole di immunoglobuline che hanno la stessa specificità, ma differenti funzioni biologiche. Esistono due sottopopolazioni di cellule T: cellule T helper (cellule Th), che esprimono molecole CD4, e cellule T citotossiche (cellule Tc), che esprimono molecole CD8 sulla loro superficie.
A diverse sottopopolazioni di cellule TH vengono assegnate funzioni diverse.
- Interazione con le cellule B per aumentare la produzione di anticorpi. Queste cellule T agiscono rilasciando citochine, che forniscono una varietà di segnali di attivazione alle cellule B. Come affermato in precedenza, le citochine sono sostanze solubili o mediatori rilasciati dalle cellule; tali mediatori rilasciati dai linfociti sono chiamati linfochine. Ad un gruppo di citochine a basso peso molecolare è stato dato il nome di chemochine. Essi, come indicato di seguito, sono coinvolti nella risposta infiammatoria.
- Partecipazione a reazioni infiammatorie. All'attivazione, una specifica sottopopolazione di cellule T rilascia citochine, inducendo la migrazione e l'attivazione di monociti e macrofagi, portando alla cosiddetta reazioni infiammatorie ipersensibilità ritardata. Questa sottopopolazione di cellule T coinvolte nella reazione di ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è talvolta indicata come Trht o semplicemente Tn.
- effetti citotossici. Le cellule T di una sottopopolazione speciale diventano cellule killer citotossiche che, a contatto con il loro bersaglio, sono in grado di colpire, portando alla morte della cellula bersaglio. Queste cellule T sono chiamate cellule T citotossiche (Tc). A differenza delle cellule Th, esprimono molecole CD8 sulle loro membrane e sono quindi chiamate cellule CD8+.
- effetti normativi. Le cellule T helper possono essere suddivise in due distinti sottogruppi funzionali in base alle citochine che rilasciano. Come imparerai nei capitoli seguenti, queste sottopopolazioni (Tn1 e Tn2) hanno proprietà regolatorie distinte che sono mediate dalle citochine che rilasciano. Inoltre, le cellule Th1 possono avere effetti incrociati negativi sulle cellule Th2 e viceversa. Un'altra popolazione di cellule T regolatrici o soppressori co-esprime CD4 e CD25 (CD25 è la catena α del recettore inteluchina-2. L'attività regolatoria di queste cellule CD4+/CD25+ e il loro ruolo nella soppressione attiva dell'autoimmunità è discussa nel Capitolo 12.
- effetti delle citochine. Le cellule T e altre cellule del sistema immunitario (come i macrofagi) forniscono impatto diverso su molte cellule, linfoidi e non, attraverso le varie citochine che rilasciano. Pertanto, direttamente o indirettamente, le cellule T si legano e interagiscono con molti tipi di cellule.
Come risultato di molti anni di studi immunologici, si è scoperto che le cellule attivate dall'esibizione dell'antigene intera linea capacità effettrici. Tuttavia, è solo negli ultimi decenni che gli immunologi hanno iniziato a rendersi conto della complessità degli eventi che si verificano quando le cellule vengono attivate da un antigene e quando interagiscono con altre cellule. Ora sappiamo che il semplice contatto del recettore della cellula T con un antigene non è sufficiente per attivare la cellula.
Infatti, devono essere dati almeno due segnali per attivare una cellula T antigene-specifica. Il primo segnale è fornito dal legame del recettore della cellula T all'antigene, che deve essere opportunamente presentato all'APC. Il secondo segnale è determinato dalla partecipazione di costimolatori, tra cui alcune citochine come IL-1, IL-4, IL-6 e molecole di superficie espresse da APC come CD40 e CD86.
Recentemente, il termine "costimulator" è venuto a significare altri stimoli, ad esempio i prodotti di scarto di microrganismi (infettivi, alieni) e tessuti danneggiati ("ipotesi di pericolo" di P. Matzinger), che amplificheranno il primo segnale se è relativamente debole. Una volta che le cellule T ricevono un segnale sufficientemente chiaro per attivarsi, si verificano una serie di eventi e cellula attivata sintetizza e rilascia citochine. A loro volta, queste citochine contattano recettori specifici su varie cellule e agiscono su quelle cellule.
Sebbene entrambi i rami umorali e cellulari della risposta immunitaria siano considerati componenti separati e distinti, è importante comprendere che la risposta a qualsiasi patogeno specifico può comportare complesse interazioni tra di loro, nonché elementi di immunità innata. Tutto ciò è finalizzato a garantire la massima sopravvivenza possibile dell'organismo rimuovendo l'antigene e, come vedremo in seguito, proteggendo l'organismo da una risposta autoimmune alle proprie strutture.
Manifestazione della diversità nella risposta immunitaria
Recenti progressi in studi immunologici grazie all'unione di biologia molecolare e immunologia. Perché l'immunologia cellulare è stata in grado di identificare livello cellulare la natura delle molteplici e variegate risposte, nonché la natura dei processi che consentono di raggiungere specificità uniche, sono sorte molte considerazioni sugli effettivi meccanismi genetici che consentono a tutte queste specificità di entrare a far parte del repertorio di ciascun membro della una data specie.In breve, queste considerazioni sono:
- Secondo varie stime, il numero di antigeni specifici a cui può verificarsi una risposta immunitaria può raggiungere 106-107.
- Se ogni risposta specifica, sia anticorpale che linfocita T, è determinata da un singolo gene, significa che ogni individuo avrà bisogno di più di 107 geni (uno per ogni specifico anticorpo)? In che modo questa matrice di DNA passa intatta da individuo a individuo?
La natura ha creato la tecnologia della ricombinazione genica, in cui una proteina può essere codificata da una molecola di DNA, composta da un insieme di mini-geni ricombinabili (riorganizzati), che costituiscono un gene completo. Sulla base di un piccolo insieme di tali mini-geni, che possono essere combinati liberamente per creare un intero gene, è possibile ottenere un vasto repertorio di specificità utilizzando un numero limitato di frammenti genici.
Inizialmente, questo meccanismo aveva lo scopo di spiegare l'esistenza di un'enorme varietà di anticorpi che non solo sono secreti dalle cellule B, ma costituiscono anche recettori specifici per l'antigene o l'epitopo sulle cellule B. Successivamente, si è scoperto che meccanismi simili sono responsabili anche della diversità antigene-specifica Recettori delle cellule T(TCR).
Basti pensare che l'esistenza di vari metodi di biologia molecolare, che consentono non solo di studiare i geni, ma anche di spostarli casualmente da una cellula all'altra, assicura rapidi ulteriori progressi in immunologia.
R. Koiko, D. Sunshine, E. Benjamini
A. Studio dell'immunità umorale
1. Determinazione del numero di linfociti B. Sulla membrana cellulare dei linfociti sono presenti molte glicoproteine che possono essere rilevate mediante citometria a flusso utilizzando anticorpi monoclonali. Alcune di queste glicoproteine sono specifiche per un particolare tipo di cellula, come linfociti T, B e NK, varie sottopopolazioni di linfociti T, monociti e persino per determinati stadi della loro maturazione e differenziazione. Queste molecole sono comunemente chiamate CD. Le funzioni di molti CD sono attualmente definite (vedi Tabella 18.8). Nel valutare i risultati dello studio, è necessario tenere conto dell'età del paziente. Inoltre, è necessario monitorare costantemente la qualità dei reagenti e l'aderenza alla metodologia, poiché anche una sua leggera violazione distorce i risultati dello studio. La determinazione dei linfociti B mediante citometria a flusso si basa sulla rilevazione delle immunoglobuline fissate sulla superficie cellulare, CD19 e CD20 (vedere Tabella 18.8). Nei bambini più grandi e negli adulti, i linfociti B costituiscono il 10-20% di tutti i linfociti del sangue, nei bambini età più giovane ce ne sono di più.
2. Determinazione del titolo anticorpale. Se si sospetta una mancanza di immunità umorale, viene valutato il titolo di anticorpi contro gli antigeni proteici e polisaccaridici. Di solito sono determinati dopo la vaccinazione o l'infezione.
UN. Anticorpi contro gli antigeni proteici. Nella maggior parte dei casi, le IgG contro i tossoidi difterici e tetanici vengono esaminate prima e 2-4 settimane dopo la vaccinazione con DPT o DTP. Poiché quasi tutti gli adulti sono vaccinati con DTP, il livello di anticorpi dopo la rivaccinazione è un indicatore della risposta immunitaria secondaria. È anche possibile determinare gli anticorpi contro l'antigene PRP dopo l'introduzione di un vaccino contro haemophilus influenzae tipo B. Sebbene questo antigene sia un polisaccaride, agisce come antigene proteico nel vaccino coniugato. A volte gli anticorpi vengono testati dopo l'immunizzazione vaccino inattivato contro la poliomielite e il vaccino ricombinante contro l'epatite B. Se si sospetta un'immunodeficienza, i vaccini con virus vivi sono controindicati.
B. Anticorpi contro antigeni polisaccaridici. Per valutare la risposta immunitaria umorale agli antigeni polisaccaridici, vengono utilizzati vaccini pneumococcici e meningococcici che non contengono trasportatori proteici. Il titolo anticorpale viene determinato prima e 3-4 settimane dopo la vaccinazione. In alcuni laboratori di ricerca viene utilizzato a tale scopo un vaccino non coniugato contro l'Haemophilus influenzae di tipo B. I risultati vengono valutati tenendo conto dell'età del paziente. Quindi, nei bambini di età inferiore ai 2 anni, la risposta immunitaria agli antigeni polisaccaridici è debole, in alcuni bambini rimane tale fino a 5 anni. A questo proposito, l'uso di vaccini polisaccaridici nei bambini piccoli è inappropriato e persino controindicato, poiché può portare a tolleranza immunologica e rivaccinazione inefficace in età avanzata.
v. Valutazione della risposta immunitaria umorale primaria e secondaria. Per determinare la clearance dell'antigene, il livello di IgM (nella risposta immunitaria primaria) e IgG (nella risposta immunitaria secondaria), il batteriofago fichi 174 viene utilizzato come antigene proteico - virus batterico sicuro per l'uomo. L'emocianina del mollusco gasteropode viene anche utilizzata per valutare la risposta immunitaria umorale primaria, vaccino ricombinante contro l'epatite B, flagellina monomerica, vaccino contro l'encefalite da zecche.
d. Anticorpi naturali(isoemoagglutinine, anticorpi contro la streptolisina O, anticorpi eterofili, come gli anticorpi contro gli eritrociti di pecora) sono normalmente presenti nel siero di quasi tutte le persone. Questo perché gli antigeni contro i quali questi anticorpi sono diretti sono diffusi e contenuti prodotti alimentari, particelle respirabili, microflora vie respiratorie.
3. Definizione delle sottoclassi di IgG. Se, nelle infezioni batteriche ricorrenti delle vie respiratorie, i livelli totali di IgG sono normali o leggermente ridotti, o viene rilevata una deficienza isolata di IgA, è indicata la sottoclasse di IgG. In questo caso si può rilevare un deficit di IgG 2 (l'IgG 2 costituisce circa il 20% delle IgG), che può essere isolato o combinato con un deficit di IgA o IgG 4. Va ricordato che la valutazione funzionale della risposta immunitaria umorale è maggiore metodo informativo ricerca che quantificazione sottoclassi di IgG. Sì, a livello normale Le IgG 2 sono spesso ridotte nel livello di anticorpi contro gli antigeni polisaccaridici dello Streptococcus pneumoniae. Insieme a questo, è possibile una carenza congenita di IgG 2, a causa di una violazione della sintesi delle catene pesanti, in assenza di manifestazioni cliniche di immunodeficienza.
4. Determinazione delle IgA. Il deficit isolato di IgA secretorie con IgA sieriche normali è raro. Di norma, vi è una carenza simultanea di IgA secretorie e sieriche. Il deficit isolato di IgA non è clinicamente manifestato o accompagnato da infezioni lievi tratto respiratorio superiore. Ciò è dovuto al fatto che a Deficit di IgA aumento compensatorio del livello di IgG nel siero e IgM nella secrezione delle mucose. I livelli di IgA sono misurati in lacrime, saliva e altri fluidi corporei. Esistono due sottoclassi di IgA: IgA 1 e IgA 2. L'IgA 1 predomina nel sangue e nelle secrezioni delle vie respiratorie, mentre l'IgA 2 predomina nei segreti del tratto gastrointestinale. Prestazioni normali livelli di IgA 1 e IgA 2.
5. Sintesi di immunoglobuline in vitro. Questo test misura la produzione di IgM, IgG e IgA da parte dei linfociti B stimolati. Mescolando linfociti T e B sani e malati trattati con diversi stimolanti, è possibile valutare la funzione dei linfociti T helper e B. Nella maggior parte dei casi, il deficit anticorpale è dovuto a un'alterata differenziazione dei linfociti B in plasmacellule.
6. Biopsia di linfonodi se si sospetta un'immunodeficienza primaria, di norma, non vengono prodotti. È indicato solo nei casi in cui la diagnosi non è chiara e il paziente ha linfonodi ingrossati, che richiede l'esclusione dell'emoblastosi. Una biopsia viene solitamente eseguita 5-7 giorni dopo la stimolazione antigenica. L'antigene viene iniettato nell'area, la cui linfa scorre in un gruppo di linfonodi, uno dei quali è sottoposto a biopsia. Con una mancanza di immunità umorale nel linfonodo, il numero di plasmacellule è ridotto, il numero di follicoli primari è aumentato, i follicoli secondari sono assenti, lo spessore della sostanza corticale è ridotto, si osserva la ristrutturazione del tessuto linfonodale, e talvolta aumenta il numero di macrofagi e cellule dendritiche.
1. I metodi del primo livello si basano sull'evidenza dell'interazione nel sistema antigene-anticorpo. I risultati positivi indicano la specificità delle reazioni. In linea di principio, si possono distinguere tre tipi di reazioni:
Prova di coniugazione. In questo caso, uno dei reagenti viene etichettato, i risultati vengono valutati dal suo legame con altri reagenti basati su dati fisici o proprietà chimiche coniugato (immunofluorescenza diretta, metodo immunoperossidasi, autoradiografia);
Test basati su un cambiamento nelle proprietà di uno dei reagenti (ad esempio, un cambiamento di fluorescenza, potenziale elettrico, viscosità della soluzione; sintesi di composti con un peso molecolare più elevato, cambiamento attività enzimatica antigeni). Questi test hanno capacità limitate;
Test basati sulla separazione di un complesso antigene-anticorpo da reagenti non legati mediante tecniche di salting out, precipitazione, anticorpo specifico o adesione della superficie cellulare. Questi includono la maggior parte dei test immunoassorbenti radio e enzimatici.
2. I metodi del secondo livello si basano su more natura complessa interazioni tra un antigene (polivalente) anticorpo (almeno anticorpi bivalenti). Allo stesso tempo, i meccanismi di precipitazione, agglutinazione, ecc., Alla base del complesso, in Di più rispetto ai metodi di primo livello dipendono dal pH, dalla forza ionica e da altre condizioni di reazione. Pertanto, i risultati positivi non determinano sempre la gravità della reazione antigene-anticorpo e i risultati negativi non indicano l'assenza di questa reazione. Tuttavia, tra i metodi di questo gruppo si può notare anche tale test immunologici di particolare importanza per la pratica clinica.
I metodi del secondo livello includono le seguenti reazioni: precipitazione, agglutinazione, reazione di fissazione del complemento. Una posizione intermedia tra i metodi del primo e del secondo livello è occupata da studi su cellule isolate, ad esempio la citolisi o il fenomeno del rilascio di mediatori con la partecipazione di eosinofili.
Reazioni basate sul fenomeno dell'agglutinazione. Contrariamente alla reazione di precipitazione durante l'agglutinazione, l'antigene si presenta in forma corpuscolare (agglutinazione diretta di eritrociti o batteri) o è legato a particelle di trasporto (variante indiretta, agglutinazione passiva). Il meccanismo di agglutinazione non è ancora del tutto chiaro. Secondo una teoria, il ruolo principale appartiene all'adsorbimento specifico degli anticorpi sulla superficie cellulare, che porta ad una diminuzione del potenziale di superficie o ad un aumento delle proprietà idrofobiche della membrana. Questa teoria è supportata dal fatto che l'agglutinazione, come la precipitazione, dipende in gran parte dalla presenza di tracce di elettroliti. Secondo un altro concetto, e questo corrisponde alla teoria del "reticolo" di Marrack, l'agglutinazione si verifica se un centro attivo di un anticorpo bivalente è connesso a un determinante antigenico e il secondo centro attivo a un altro determinante. L'eccesso o la mancanza di anticorpi porta all'inibizione dell'agglutinazione. Sebbene proprietà come la dimensione delle particelle e la struttura Ig correggano l'interpretazione dei dati, ci sono comunque argomenti importanti a favore di questa teoria.
Come le precipitazioni questo metodo utilizzato come analisi semiquantitativa, che determina la massima diluizione del siero alla quale è ancora possibile l'agglutinazione. I risultati possono essere valutati macroscopicamente. La sensibilità all'agglutinazione varia notevolmente con l'uso sistemi diversi antigene-anticorpo. Inoltre, l'agglutinazione è un metodo più sensibile della reazione di precipitazione (quasi 103 volte). A condizioni ottimaliè stato possibile rilevare anticorpi con una concentrazione minima di 0,05 ml. Le classi note di Ig hanno diverse proprietà di agglutinazione. Pertanto, la capacità delle molecole IgM di agglutinare è 60-180 volte superiore a quella delle molecole IgG.
Una reazione di agglutinazione diretta si verifica se l'antigene è un elemento della membrana cellulare o è presente sulla superficie di altre particelle (eritrociti, batteri, particelle di polline). La formulazione di questa reazione viene effettuata sia in provette (quindi i risultati vengono valutati dopo la sedimentazione), sia in pozzetti posti su un'apposita piastra. In particolare, la determinazione del gruppo sanguigno umano è un metodo espresso generalmente accettato, basato anche sul fenomeno dell'agglutinazione. Per identificare il gruppo sanguigno, una goccia di sospensione eritrocitaria viene miscelata con una goccia di siero agglutinante standard di una certa specificità: con una reazione positiva, gli agglutinati sono già visibili macroscopicamente, se non c'è reazione, la sospensione eritrocitaria rimane omogenea.
Test dell'antiglobulina(reazione di Coombs). Il test dell'antiglobulina serve a dimostrare la presenza di anticorpi non agglutinanti o "incompleti" nel siero. Molto spesso, questo metodo viene utilizzato nella diagnosi delle malattie del sangue causate dall'emolisi immunitaria. Inizialmente, i ricercatori hanno utilizzato il siero antiglobulina (contro la globulina umana), ma in seguito si è scoperto che reagisce con i componenti del complemento. Attualmente, al suo posto, vengono introdotti intensivamente antisieri monospecifici contro alcune classi di Ig ( anticorpi monoclonali). La versione diretta del test serve a rilevare gli anticorpi "incompleti" legati alle cellule; nella variante indiretta vengono rilevati gli anticorpi circolanti: il siero del test viene pre-incubato con gli eritrociti, quindi viene riprodotto il test diretto. È stato sviluppato un test dell'antiglobulina in combinazione con l'emoagglutinazione passiva per rilevare sia gli autoanticorpi non agglutinanti che le reagine. E infine tecnica indiretta la fluorescenza è anche una delle modifiche del test dell'antiglobulina.
Test del consumo di antiglobulina(prova di Steffen). Occorre prestare attenzione a questo metodo, anche se in questo caso si tratta solo di una reazione dell'indicatore. Con questo test è possibile rilevare anticorpi contro antigeni di cellule tissutali, nuclei cellulari o elementi tissutali insolubili. È impossibile determinare questi anticorpi utilizzando il test di agglutinazione. Nel test indiretto, gli antigeni (tessuti omogeneizzati) vengono incubati con il siero del test e quindi lavati accuratamente per rimuovere gli anticorpi non legati. Successivamente, il siero di antiglobulina con un titolo noto viene incubato con questo omogenato. Di conseguenza, l'antiglobulina viene consumata dagli anticorpi adsorbiti sui tessuti. Di conseguenza, il titolo del siero di antiglobulina diminuisce. Il livello degli anticorpi studiati prima e dopo l'incubazione viene determinato utilizzando un sistema indicatore costituito da eritrociti sensibilizzati con anticorpi incompleti, quindi questa opzione può essere considerato come una modifica della reazione di inibizione dell'emoagglutinazione. Quando si imposta una versione diretta del test, la pre-incubazione con il siero del test non viene eseguita.
Questo metodo viene utilizzato per determinare gli autoanticorpi nell'artrite reumatoide, gli anticorpi contro il DNA nel lupus eritematoso sistemico, nonché per dimostrare la produzione di anticorpi contro gli antigeni su leuco e piastrine. Il metodo dipende anche da numerosi fattori non specifici- Ecco perché particolare importanza acquisire adeguate modalità di controllo. Nell'interpretazione dei risultati, non va dimenticato che la tecnica convenzionale può dimostrare il legame della globulina non sempre dovuto al complesso antigene-anticorpo.
Reazione di fissazione del complemento. Questo è un metodo indiretto per rilevare anticorpi o antigeni. La reazione si basa sul fatto che il complemento prende parte a numerose reazioni antigene-anticorpo. L'esperimento è strutturato in due fasi: nella fase I, il siero in esame e un antigene noto vengono incubati con il complemento, nella fase II viene preparato un sistema indicatore, costituito da siero emolitico ed eritrociti, e aggiunto alla miscela di reagenti. Se la prima fase dell'esperimento termina con una reazione antigene-anticorpo, si verifica la fissazione del complemento, mentre l'emolisi degli eritrociti indicatori è assente o leggermente espressa. Se il complesso antigene-anticorpo non si forma nel sistema in esame, il complemento è completamente incluso nel sistema indicatore, che porta all'emolisi. La fonte del complemento è solitamente siero di cavia fresco. Il suo complemento reagisce con gli anticorpi di tutte le specie di mammiferi. Di norma, nel sistema indicatore vengono utilizzati eritrociti di montone sensibilizzati con anticorpi di coniglio contro gli eritrociti di montone.
Reazione immunitaria di emolisi e test citotossico. L'emolisi immunitaria può servire come prova, da un lato, dell'attività del complemento, dall'altro, dell'effetto citotossico degli anticorpi contro gli eritrociti; pertanto, queste reazioni sono importanti per la diagnosi immunoematologica. Emoagglutinazione passiva può essere convertito in una reazione di emolisi passiva, mentre la miscela di reagenti dovrebbe essere costituita da anticorpi, eritrociti caricati con l'antigene appropriato e complemento.
Il test citologico è informativo durante lo studio meccanismi patogenetici. Tuttavia, le possibilità del suo utilizzo sono piuttosto limitate, data la complessità dei metodi di coltura cellulare. Le reazioni citotossiche possono essere mediate da anticorpi (attivazione del complemento), cellule killer e linfociti T sensibilizzati.
Prova di neutralizzazione. Il principio del test è quello certo proprietà biologiche gli antigeni vengono neutralizzati quando esposti agli anticorpi. È ampiamente utilizzato per rilevare anticorpi antitossici (tetano, difterite) e antivirali.
Altri metodi. Oltre ai metodi precedentemente descritti in capitoli separati (anafilassi in vitro secondo Schultz-Dale, rilascio di istamina da granulociti basofili e mastociti, test cutanei, dose "permissiva" dell'allergene come test per valutare la risposta immunitaria, l'anafilassi cutanea passiva e la reazione di Prausnitz-Küstner), si dovrebbero nominare metodi per dimostrare la produzione di IgE, test diagnostici per l'analisi degli immunocomplessi, metodi per rilevazione degli autoanticorpi nelle malattie autoimmuni.
