Determinazione dell'affiliazione Rh del sangue. Antigeni di superficie delle cellule del sangue

Metodo di agglutinazione su gel per la determinazione degli antigeni eritrocitari e degli anticorpi anti-eritrociti

introduzione

La tecnologia del gel in microtubi (GTM) è stata proposta da Y. Lapierre nel 1989. Il metodo si basa sull'agglutinazione degli eritrociti in gel di agar Sephadex posto in microtubi. Tipicamente, il sistema è una scheda di plastica contenente microtubi riempiti di gel (brevetto DiaMed AG, Svizzera). Gli studi immunoematologici basati sulla reazione di emoagglutinazione vengono solitamente eseguiti in sistemi in fase liquida.

Una delle condizioni più importanti per ottenere dati corretti sulla reazione di agglutinazione è la valutazione del risultato. Una risposta debole può essere male interpretata, specialmente da personale inesperto. Risultati falsi deboli o negativi di un test dell'antiglobulina indiretto possono verificarsi a causa della neutralizzazione del reagente dell'antiglobulina da parte di tracce di siero a causa di un lavaggio insufficientemente efficace dei globuli rossi. Una miscelazione inadeguata dei globuli rossi e l'eluizione di anticorpi debolmente fissati durante il processo di lavaggio possono causare errori nel test indiretto dell'antiglobulina.

La tecnica dell'agglutinazione su gel è stata sviluppata per standardizzare le reazioni di emoagglutinazione e ottenere risultati affidabili. La tecnologia del gel prevede la separazione degli eritrociti durante la centrifugazione, mentre gli eritrociti non agglutinati passano attraverso il gel e si depositano sul fondo delle provette (esito negativo), mentre gli eritrociti agglutinati vengono trattenuti sulla superficie o nello spessore del gel (esito positivo ). La centrifugazione del gel può essere la fase finale di qualsiasi test sierologico basato sull'emoagglutinazione, ad eccezione dei metodi che richiedono la dispersione per valutare il risultato.

La gamma di test eseguiti comprende la fenotipizzazione degli eritrociti (comprese le varianti deboli dell'antigene), il test dell'antiglobulina, lo screening e l'identificazione degli anticorpi, i test di compatibilità e pochi altri.

Principio del gel test

Il gel di destrano tamponato Sephadex TM G 100 superline può essere neutro o contenere antisieri specifici o un reagente antiglobulina su una matrice di gel. I globuli rossi o una miscela di globuli rossi e siero vengono applicati al gel. Le cellule vengono sempre applicate prima dei sieri, a differenza delle tecniche sierologiche standard, in modo che i sieri da testare non entrino in contatto con il gel, il che è particolarmente importante quando si esegue un test dell'antiglobulina. Dopo l'incubazione, segue la centrifugazione in una modalità rigorosamente definita. Se le condizioni di centrifugazione non sono soddisfatte (la centrifugazione non è abbastanza lunga o troppo delicata), possono verificarsi risultati falsi positivi. Risultati falsi negativi possono verificarsi anche se vengono violate le condizioni (forzatura) della centrifugazione. L'uso di una centrifuga ID automatica (Diamed) elimina questi problemi. Tre tipi di gel sono comunemente usati per i test:

1. neutro, non contenente anticorpi specifici (utilizzato per la ricerca e l'identificazione di anticorpi mediante metodi salini ed enzimatici, la fase fredda del test per la compatibilità del sangue del donatore e del ricevente);
2. specifici, contenenti anticorpi (monoclonali o policlonali) contro antigeni eritrocitari umani (utilizzati per tipizzare antigeni eritrocitari dei sistemi ABO, Rhesus, Kell, ecc.)
3. antiglobulina, contenente anticorpi (polispecifici o monospecifici) contro immunoglobuline umane e componenti del sistema del complemento (utilizzato per il test diretto e indiretto dell'antiglobulina (reazione di Coombs) nella ricerca e identificazione di anticorpi auto- e alloimmuni, un test per la compatibilità del donatore e del ricevente sangue).

Il sangue analizzato viene aggiunto alla parte superiore delle microprovette delle schede diagnostiche e durante la centrifugazione, gli eritrociti agglutinati e non agglutinati vengono separati come segue: gli eritrociti non agglutinati hanno una dimensione paragonabile alla dimensione delle particelle di gel e li attraversano liberamente sotto l'azione della forza centrifuga, formando un precipitato rosso compatto sul fondo della microprovetta - esito negativo; gli eritrociti agglutinati, a causa delle loro grandi dimensioni, indugiano sulla superficie del gel o nel suo spessore - un risultato positivo.

L'agglutinazione fissa nel gel facilita la valutazione del risultato della reazione e la presenza di una microprovetta di controllo nella cartella diagnostica conferma l'attendibilità dei dati ottenuti.

A seconda della forza della reazione di agglutinazione nel mezzo gel, è stata accettata la seguente valutazione dei risultati ottenuti:

• fortemente positivo (++++) - gli agglutinati eritrocitari formati sono rimasti sulla superficie del gel;
• positivo (+++) - gli agglutinati si trovano nel terzo superiore della colonna di gel;
• debolmente positivo (++) - gli agglutinati sono fissati nei due terzi superiori del gel;
• molto debolmente positivo (+) - gli agglutinati si trovano nel terzo inferiore del gel;
• negativo (-) - gli eritrociti formano un sedimento compatto sul fondo del microtubo.

Attrezzature e reagenti

• Carte d'identità per la determinazione degli antigeni eritrocitari e degli anticorpi anti-eritrociti;
• Centrifuga ID per centrifugazione card;
• termostato a +37°С;
• supporto per provette e carte;
• provette con una capacità di 5 e 10 ml;
• pipette monocanale semiautomatiche (10, 25, 50 µl);
• guanti chirurgici in gomma;
• soluzione di diluizione 1 (soluzione di bromelina);
• soluzione di diluizione 2 (soluzione a bassa forza ionica - LISS, RNIS);
• Soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%;
• eritrociti umani tipizzati standard per il rilevamento di anticorpi e reazioni crociate.

Caratteristiche delle carte d'identità

Carte d'identità (carte d'identità) Dia-Med sono carte di plastica con sei microtubi incorporati. Cinque provette contengono una miscela di gel e antisieri. Ogni card ha una sesta provetta di controllo contenente un gel neutro senza anticorpi (ctl). Le provette sono etichettate nella scheda ID in base agli antigeni rilevati, ad esempio: A-B-AB-D-CDE-ctl o C-c-E-e-K-ctl. Le carte di identificazione per la rilevazione degli anticorpi contro gli antigeni eritrocitari presentano alcune differenze, ad esempio le carte "Coombs / Enzyme Test": tre provette situate a sinistra contengono un gel contenente anticorpi contro globuline umane (anti-IgD monospecifiche o polispecifiche - contro immunoglobuline di vari classi) - Reazione di Coombs. Le successive tre provette contengono solo un gel neutro progettato per rilevare gli anticorpi contro gli antigeni eritrocitari in un mezzo salino.

Regole generali per l'uso delle carte d'identità

1. Le carte d'identità devono essere conservate in un luogo asciutto e buio a una temperatura di 18-25°C. La data di scadenza è indicata nella parte dedicata al passaporto di ciascuna carta e sulle scatole di imballaggio.
2. Le soluzioni per la preparazione di una sospensione di eritrociti, così come i sieri standard e gli eritrociti ID standard utilizzati nei singoli studi, devono essere conservati in un luogo asciutto e buio a una temperatura di 2-8°C. La data di scadenza è indicata sull'etichetta di ogni flaconcino e sulla confezione.
3. Per evitare di ottenere risultati falsi del test, non utilizzare reagenti e card scaduti, così come quelli secchi, contenenti bolle di gas o se il guscio è danneggiato.
4. Il sangue viene raccolto utilizzando moderne tecniche di flebotomia ed è adatto anche il sangue arterioso, capillare e ombelicale (senza lavaggio). Sia i campioni di sangue intero (prelevati in una provetta pulita e asciutta) che i campioni di sangue prelevati con conservanti e stabilizzanti sono adatti per la ricerca.

Tipizzazione degli antigeni eritrocitari

Le carte ID DiaMed sono progettate per la determinazione simultanea del gruppo sanguigno ABO e dell'affiliazione Rh degli eritrociti del donatore e del ricevente (comprese le loro varianti antigeniche deboli), nonché per la tipizzazione di altri antigeni eritrocitari. Le carte ID DiaMed possono essere utilizzate al posto o in parallelo con sieri isoemoagglutinanti, reagenti anti-D, anti-DCE, super colicloni anti-A, anti-B, anti-D e anti-D.

• [spettacolo] .

  La fase iniziale si svolge con modalità diverse, a seconda del tipo di carte d'identità utilizzate, contenenti anticorpi policlonali (cfr. successivo paragrafo 1a) o monoclonali (cfr. paragrafo 16):

  1a) Preparare una sospensione degli eritrociti studiati nella Soluzione per diluire ICID-carte contenenti anticorpi policlonali) per la quale:

  • conservare la soluzione di diluizione 1 finché non raggiunge la temperatura ambiente;
  • preparare una sospensione al 5% di eritrociti da testare nella soluzione di diluizione 1 versando in una provetta 0,5 ml di soluzione di diluizione 1 e 50 µl di sangue intero da testare o 25 µl di massa di eritrociti;
  • mescolare delicatamente e incubare 10 min a temperatura ambiente;
  • utilizzare entro e non oltre 15 minuti dopo l'incubazione.

  16) Preparare una sospensione di eritrociti da testare in Dilution Solution 2 (carte d'identità contenenti anticorpi monoclinali) per la quale:

  • conservare la soluzione di diluizione 2 finché non raggiunge la temperatura ambiente;
  • etichettare le provette pulite;
  • preparare una sospensione al 5% di eritrociti da testare nella soluzione di diluizione 2 versando 0,5 ml di soluzione di diluizione 1 e 50 µl di sangue intero da testare o 25 µl di massa di eritrociti in una provetta.
• Ulteriori azioni [spettacolo] .
  1. Contrassegnare la carta d'identità (N del campione di siero del test o il nome completo del paziente).
  2. Rimuovere la pellicola protettiva dai tubi della carta d'identità.
  3. Aggiungere 10 µl di eritrociti di prova, preparati secondo il punto 1a, o 50 µl di eritrociti di prova, preparati secondo il punto 16, a ciascuna provetta della carta d'identità.
  4. Installare le carte d'identità nel rotore ID-centrifuga (con bilanciamento obbligatorio con altre carte d'identità, eventualmente non utilizzate).
  5. Carte identificative della centrifuga (il tempo e la velocità di centrifugazione sono costanti e impostati automaticamente).
  6. Valutare il risultato del test: Il risultato nella microprovetta di controllo - "ctl" - deve essere sempre negativo. Una reazione positiva nel "controllo" può essere dovuta alla presenza di autoanticorpi e proteine ​​plasmatiche non specifiche. Se il "controllo" è positivo - la determinazione non è affidabile, deve essere ripetuta dopo un singolo lavaggio del campione di eritrociti con soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% o soluzione di diluizione 2.
  7. Inserire i risultati della determinazione di ciascun antigene nella colonna appropriata della carta d'identità (sul campo bianco sotto ciascun antigene).
  8. Identificare il risultato secondo lo schema seguente (Tabella 18.7-18.9)

  Tabella 18.7. I risultati dello studio degli antigeni del gruppo sanguigno ABO e dell'affiliazione Rh nella carta d'identità ABO/Rh
  Antigeni rilevabili					Conclusione
  UN	IN	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	A Rh+
  +	-	+	-	-	E Rh-
  -	+	+	+	+	In Rh+
  -	+	+	-	-	In Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Nota: la specificità dello studio è confermata da un risultato negativo nella provetta di controllo della carta d'identità.

  Tabella 18.8 Determinazione di antigeni di erythrocytes del sistema ABO
  Gruppo sanguigno
  	anti-A	anti-B	anti AB
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  A2(II)	++++	-	++++
  A3(II)	++/+++	-	++/++++
  A x (II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  B3 (III)	-	+/+++	+/+++
  SI x (III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Nota: * - la determinazione delle varianti molto deboli degli antigeni A e B richiede ulteriori ricerche.

  Tabella 18.9 Definizione di affiliazione Rh (D, CDE)
  Affiliazione Rhesus	Risultati dello studio sul siero
  	Anti-D	Anti CDE
  D-positivo	++++	++++
  D-negativo	-	-
  D-negativo, C	E-positivo*	-
  Debolmente positivo (D u)	da ± a +++	da +++ a ++++
  Nota: * - Una reazione positiva con siero anti-CDE mentre una reazione negativa con siero anti-D indica la presenza di antigeni C, E e richiede un'ulteriore tipizzazione utilizzando carte d'identità: C-c-E-e-K-stl o C-C w-c-E-e-K

Carte d'identità usate

Quando si determinano i gruppi sanguigni e l'affiliazione Rh, vengono utilizzati quelli policlonali (Tabella 18.10 [spettacolo] ) e monoclonale (Tabella 18.11 [spettacolo] ) reagenti. A causa della fattibilità economica, i sieri monoclonali sono più spesso utilizzati nella pratica.

Secondo l'attuale classificazione, le persone con una variante indebolita dell'antigene D, in grado di produrre anticorpi anti-D, sono suddivise in sette categorie. La categoria VI ha la più alta frequenza di occorrenza e significato pratico, i cui eritrociti portano solo l'epitopo Z dell'antigene D. Le persone della categoria VI (ricevitori Rh-negativi, ma donatori Rh-positivi!) Possono produrre anticorpi contro D invariato e parziale D di tutte le altre categorie. Per confermare il gruppo sanguigno vengono utilizzate varie carte d'identità: D (IV -) - per i riceventi, D (IV +) - per i donatori.

La determinazione del gruppo sanguigno ABO e degli accessori Rh viene effettuata identificando antigeni e anticorpi specifici (reazione doppia o incrociata) (Tabella 18.12 [spettacolo] ).

Per un approfondimento si utilizzano altre mappe (Tabella 18.13-18.14 [spettacolo] ).

Rilevazione di anticorpi anti-eritrociti

Principio del metodo

I sieri del test e gli eritrociti standard per il rilevamento degli anticorpi vengono aggiunti nella parte superiore delle microprovette. Dopo l'incubazione e la centrifugazione, gli eritrociti agglutinati rimangono nella parte superiore della provetta, in quanto non attraversano il gel a causa delle grandi dimensioni degli agglutinati (risultato positivo). In assenza di anticorpi contro gli antigeni degli eritrociti di prova, gli agglutinati non si formano. I globuli rossi non agglutinati passano facilmente attraverso il gel e si depositano sul fondo della provetta (risultato negativo). La natura dell'agglutinazione nella rilevazione degli anticorpi contro gli eritrociti dipende dal titolo degli anticorpi, dalla loro attività ed è stimata da ++++ a +.

• Algoritmo di ricerca [spettacolo] .

  Gli eritrociti tipizzati prima dello studio devono prima essere lavati due volte dal conservante con una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%, quindi eseguire i seguenti passaggi:

  • conservare il Diluente 2 fino al raggiungimento della temperatura ambiente;
  • etichetta tubi;
  • preparare una sospensione allo 0,8% di eritrociti tipizzati in Dilution Solution 2 mettendo 1,0 ml di Dilution Solution 2 e 10 µl di sangue in una provetta;
  • rimuovere la pellicola protettiva dalla carta d'identità;
  • contrassegnare la carta d'identità (numero del campione di siero da testare o nome completo del paziente);
  • aggiungere 50 µl di eritrociti standard ai microtubi;
  • aggiungere 25 µl di siero o plasma del campione in esame in ogni microprovetta;
  • incubare per 15 minuti a una temperatura di +37 "C;
  • carte d'identità della centrifuga nella centrifuga ID (il tempo e la velocità di centrifugazione sono costanti e impostati automaticamente).

  Nota: gli eritrociti standard del pannello ID-DiaCell I-II-III e ID-DiaCell I-Ii-III P di DiaMed sono pronti per l'uso senza previo lavaggio e trattamento con Dilution Solution 2.

• Interpretazione dei risultati [spettacolo] .

  Una reazione positiva indica la presenza di anticorpi immunitari nel campione del test.

  Se c'è una reazione positiva con tutti gli eritrociti del pannello ID-DiaCell, si raccomanda di eseguire un autocontrollo per escludere gli autoanticorpi nel campione del test.

  Se la reazione rimane negativa con uno o più globuli rossi del pannello ID-DiaCell, la specificità degli anticorpi può essere determinata utilizzando il foglio di profilazione antigenica allegato fornito con tutte le confezioni ID-DiaCell. Durante questa operazione assicurarsi che i numeri del pannello ID-DiaCell1 e del foglio allegato corrispondano.

  Se questo pannello non consente la determinazione della specificità anticorpale, si raccomanda di procedere all'identificazione utilizzando il pannello eritrocitario avanzato ID-DiaPanel e/o ID-DiaPanel P (a seconda del metodo originale utilizzato).

Screening e identificazione degli anticorpi

Lo screening anticorpale viene eseguito sia in gel neutro che in gel contenente un reagente antiglobulina (Tabella 18.15-18.16 [spettacolo] ). Nel primo caso vengono utilizzati per lo studio eritrociti trattati con enzima, nel secondo caso viene utilizzata una sospensione di eritrociti in una soluzione a bassa forza ionica. Lo screening e l'identificazione degli anticorpi vengono eseguiti utilizzando un pannello standard di eritrociti. Nel valutare l'efficacia del gel test per lo screening e l'identificazione degli anticorpi, è stata rilevata la sua maggiore sensibilità rispetto ai metodi tradizionali.

Metodi per lo studio degli anticorpi contro gli antigeni eritrocitari

• Test dell'antiglobulina (test di Coombs indiretto) [spettacolo] .

  Il test indiretto dell'antiglobulina (NAT) viene utilizzato per rilevare gli anticorpi anti-RBC. In genere, NAT viene eseguito in due fasi:

  1. incubazione di eritrociti e siero (fissazione di anticorpi) seguita da lavaggio per rimuovere le globuline non legate; la messa in scena di un test indiretto dell'antiglobulina in un gel test non richiede il lavaggio degli eritrociti!
  2. incubazione di eritrociti lavati con globulina antiumana (AHG). L'agglutinazione indica la presenza nel siero di anticorpi che si sono legati agli antigeni eritrocitari in vitro.

  NAT è utilizzato per:

  1. determinazione nel siero del ricevente di anticorpi contro gli eritrociti del donatore - quando si imposta un test di compatibilità;
  2. durante lo screening di anticorpi anti-eritrociti "inaspettati";
  3. nello studio degli anticorpi anti-eritrociti nelle donne in gravidanza;
  4. nello studio degli anticorpi nel siero di pazienti con anemia emolitica autoimmune.

  Progresso della definizione:

  • aggiungere 50 µl di sospensione di eritrociti tipizzati in tre provette della carta d'identità situata a sinistra;
  • aggiungere 25 µl del siero da testare nelle provette;
  • centrifugare le carte d'identità per 10 min;
  • valutare il risultato dello studio. Inserisci il risultato nella carta d'identità.

  Risultati della definizione:

  • un risultato positivo indica la presenza di anticorpi immuni (allo) nel siero o nel plasma del test (per determinare la specificità degli anticorpi, utilizzare la tabella allegata agli eritrociti standard);
  • un risultato negativo indica l'assenza di anticorpi immunitari nel siero o nel plasma del test.
• metodo enzimatico [spettacolo] .

  Il trattamento con enzimi proteolitici aumenta l'agglutinabilità dei globuli rossi.

  Progresso della definizione:

  • aggiungere 50 µl di una sospensione di eritrociti tipizzati standard nelle tre provette della carta d'identità posizionate a destra;
  • aggiungere 25 µl di Dilution Solution 1 alle provette;
  • aggiungere 25 µl del siero da testare nelle provette.

  Nota: la soluzione di diluizione 1 non viene aggiunta se per il test vengono utilizzati eritrociti tipizzati standard pretrattati con un enzima proteolitico (ad es. ID-DiaCell I-II-III P di DiaMed).

  • incubare per 15 minuti a +37°C;
  • centrifugare le carte d'identità in una centrifuga W per 10 minuti (i parametri vengono impostati automaticamente);
  • inserire il risultato nella carta d'identità.

  Risultati della ricerca:

  • un risultato positivo indica la presenza di alloanticorpi nel siero o nel plasma del test (per determinare la specificità degli anticorpi, utilizzare la tabella allegata agli eritrociti standard);
  • un risultato negativo indica l'assenza di alloanticorpi nel siero o nel plasma del test.
• Metodo di agglutinazione a freddo [spettacolo] .

  Progresso della definizione:

  • incubare la soluzione di diluizione 2, gli eritrociti tipizzati e le carte d'identità per 30 minuti a una temperatura di 2-8°C;
  • trattare gli eritrociti tipizzati con la soluzione di diluizione 2, per la quale:
    • contrassegnare la provetta;
    • preparare una sospensione allo 0,8% di eritrociti tipizzati nel Diluente 2 mettendo 1,0 ml di Diluente 2 e 10 µl di sangue in una provetta.

  Nota: gli eritrociti standard ID-DiaCell (DiaMed) sono pronti per l'uso e non devono essere diluiti;

  • aggiungere 50 µl di una sospensione di eritrociti tipizzati trattati con Dilution Solution 2 in tre provette della carta d'identità situata a destra;
  • aggiungere 25 µl del siero in esame a queste provette;
  • incubare per 30 minuti a una temperatura di 2-8 C;
  • centrifugare le carte d'identità nella centrifuga ID per 10 minuti (i parametri vengono impostati automaticamente);
  • valutare il risultato dello studio;
  • inserire il risultato nella carta d'identità. Risultati della ricerca:
  • un risultato positivo indica la presenza di anticorpi freddi nel siero o nel plasma del test (per determinare la specificità degli anticorpi, utilizzare la tabella allegata agli eritrociti standard);
  • un risultato negativo indica l'assenza di anticorpi freddi nel siero o nel plasma del test.

  In presenza di autoanticorpi freddi o caldi nel siero del test, si possono osservare risultati falsi positivi. Per escluderli, è necessario impostare l'autocontrollo:

  • preparare una sospensione allo 0,8% di eritrociti del sangue in esame nella soluzione di diluizione 2 aggiungendo 10 µl di sangue intero a 1,0 ml di soluzione di diluizione 2;
  • aggiungere 50 µl della sospensione di eritrociti preparata alla provetta della carta d'identità situata a sinistra (per la reazione di Coombs) o alla provetta della carta d'identità situata a destra (per il metodo enzimatico e l'agglutinazione a freddo);
  • aggiungere 25 µl del siero da testare nelle provette della ID-card (per il metodo enzimatico è necessario aggiungere altri 25 µl di Dilution Solution 1 nelle provette);
  • incubare le card per 15 minuti a +37°C (per la reazione di Coombs e il metodo enzimatico) oa 2-8°C (per l'autocontrollo dell'agglutinazione a freddo).

  Un risultato positivo nell'autocontrollo indica la presenza di autoanticorpi nel siero del test.

Determinazione della compatibilità del sangue del donatore e del ricevente

Lo scopo del test di compatibilità individuale è prevenire le trasfusioni di emocomponenti incompatibili per gli antigeni eritrocitari. Testare il siero del ricevente con i globuli rossi del donatore previsto è il modo più affidabile per rilevare gli anticorpi che possono causare danni ai globuli rossi trasfusi, reazioni post-trasfusionali e complicanze di tipo emolitico. Questo test ti permette di:

1. confermare la compatibilità ABO del donatore e del ricevente;
2. rilevare gli anticorpi nel siero del ricevente diretti contro gli antigeni eritrocitari del donatore.

Test per la compatibilità individuale del sangue del donatore e del ricevente mediante antigeni eritrocitari (Tabella 18.17 [spettacolo] ) non sostituisce l'esame immunoematologico obbligatorio (tipizzazione degli antigeni eritrocitari dei sistemi ABO, Rhesus, Kell, rilevazione degli anticorpi anti-eritrociti, ricerca e identificazione degli anticorpi allo-anti-eritrociti), ma lo integra solo.

A causa del fatto che la sensibilizzazione può verificarsi anche dopo trasfusioni di emocomponenti selezionati individualmente, per testare la compatibilità, è necessario utilizzare ogni volta siero fresco del paziente ottenuto dopo l'ultima trasfusione di emocomponenti.

È necessario eseguire un test di compatibilità per ogni campione di sangue donato!

• Progresso della definizione [spettacolo]
  • conservare il Diluente 2 fino al raggiungimento della temperatura ambiente (20-24°C);
  • contrassegnare carte d'identità e provette (nome completo del donatore e del ricevente);
  • preparare una sospensione allo 0,8% di eritrociti del donatore e del ricevente nella soluzione di diluizione 2, a tale scopo aggiungere 1 ml di soluzione di diluizione 2 in due provette etichettate, aggiungere rispettivamente 10 µl di sangue del donatore e del ricevente;
  • mescolare;
  • rimuovere la pellicola protettiva dalla carta d'identità corrispondente;
  • aggiungere 50 µl della sospensione di eritrociti del donatore preparata alle microprovette delle carte d'identità 1, 2, 3, 4, 5;
  • aggiungere 50 µl della sospensione di eritrociti del ricevente preparata alle microprovette delle carte d'identità 4, 5, 6;
  • aggiungere 25 µl di siero o plasma del ricevente alle microprovette delle carte d'identità 1, 2, 3, 6;
  • aggiungere 25 µl di Diluente 1 alla microprovetta ID-card 4 (test enzimatico);
  • incubare per 15 minuti alla temperatura di +37°C;
  • centrifuga (tempo e velocità di centrifugazione sono costanti e impostati automaticamente);
  • valutare il risultato dello studio. Compatibilità per antigeni A, B, D (1, 2, 3 microtubi):
  • un chiaro risultato positivo o negativo indica la corrispondenza degli antigeni A, B, O degli eritrociti del sangue del donatore e del ricevente;
  • se si osserva una doppia popolazione di eritrociti (risultato positivo e negativo in una microprovetta), gli antigeni A, B, D del donatore e del ricevente non sono identici!
  • la determinazione della compatibilità per gli antigeni A, B, D è valida solo con reazione negativa nella 6a microprovetta (autocontrollo).
• Risultati del test di compatibilità (4, 5 microtubi) [spettacolo]
  • un risultato positivo nelle microprovette delle carte d'identità 4, 5 con un controllo negativo (microprovetta 6) indica incompatibilità del sangue del donatore e del ricevente in termini di antigeni eritrocitari;
  • un risultato negativo nelle microprovette delle carte d'identità 4, 5, 6 indica la compatibilità del sangue del donatore e del ricevente in termini di antigeni eritrocitari;
  • una reazione positiva nella scheda ID 6 della microprovetta (autocontrollo) richiede un'ulteriore determinazione degli auto- e alloanticorpi nel siero (plasma) del ricevente.
• Restrizioni [spettacolo]
  • alcuni farmaci possono causare una reazione di Coombs falsamente positiva;
  • in alcune condizioni patologiche, i pazienti possono manifestare una reazione di Coombs positiva;
  • la contaminazione batterica o di altro tipo del materiale utilizzato può causare un risultato falso positivo o falso negativo;
  • i residui di fibrina nei campioni in esame possono legarsi alle cellule non agglutinate e, dopo centrifugazione, formare una sottile linea rosa sulla superficie del gel, mentre la maggior parte delle cellule sarà localizzata sul fondo della microprovetta;
  • sospensioni di globuli rossi eccessivamente concentrate possono causare reazioni false positive.
• Condizioni di stoccaggio e funzionamento [spettacolo]

  Le carte d'identità DiaMed devono essere conservate a temperatura ambiente (+18-25°C) in un luogo asciutto durante l'intera durata di conservazione.

  Le carte hanno una validità di 18 mesi. La durata di conservazione dei reagenti è di 2 anni.

  I risultati dello studio sulla mappa vengono salvati invariati:

  • 48 ore a temperatura ambiente;
  • tre settimane in frigorifero (a +2-8°C) con la parte superiore della carta d'identità sigillata con nastro adesivo.

  Il campo inferiore della carta d'identità può essere staccato o tagliato e utilizzato come documento in una cartella clinica o schedario.

  Non è consentito utilizzare carte d'identità con segni di essiccazione del gel, bolle nel suo spessore o danni alla pellicola protettiva.

  Campioni e reagenti devono essere portati a temperatura ambiente prima dell'uso.

Conclusione

Il gel test è un metodo semplice, riproducibile, veloce e molto sensibile che consente la rilevazione immediata delle varianti deboli degli antigeni eritrocitari. Il test viene valutato solo macroscopicamente. Dopo un breve addestramento del personale necessario per la corretta esecuzione del test, i tempi e gli errori che si riscontrano con i metodi tradizionali sono ridotti al minimo.

Il gel test consente di standardizzare i metodi di laboratorio, per dare una valutazione obiettiva dei risultati della reazione di emoagglutinazione. La stabilità dei risultati del test consente di ricontrollare i dati ottenuti, necessari per il controllo. I risultati dei test possono essere fotocopiati per l'archiviazione o per scopi didattici in casi difficili da diagnosticare. Il test utilizza una piccola quantità di siero o globuli rossi, che è estremamente importante per le cliniche pediatriche.

L'uso del sistema gel riduce il rischio di infezione del personale anche durante la manipolazione di campioni potenzialmente infetti. Il gel test può essere utilizzato per testare la compatibilità dell'antigene eritrocitario prima della trasfusione di sangue. Per questo, vengono utilizzati un test dell'antiglobulina indiretto e un metodo enzimatico monofase.

Il test del gel viene eseguito e valutato secondo le regole di cui sopra. L'assenza di fasi di lavaggio degli eritrociti durante l'esecuzione di un test indiretto dell'antiglobulina consente un uso più efficiente del tempo di lavoro e anche, grazie alla stabilità dei risultati del test, di controllare tutti i risultati ottenuti.

Fonte: Diagnostica di laboratorio medico, programmi e algoritmi. ed. prof. Karpishchenko A.I., San Pietroburgo, Intermedica, 2001

La quantità totale di proteine ​​del sangue è di 60-80 g/l. Esistono diverse frazioni proteiche che svolgono funzioni specifiche.

1. Le albumine (40-60 g/l) hanno un'elevata attività osmotica colloidale.

2. Le globuline a, b, g (20-40 g/l) creano immunità umorale, formando vari anticorpi chiamati immunoglobuline (IgM, IgG).

3. Il fibrinogeno (2-4 g/l) è il fattore principale nel meccanismo della coagulazione del sangue.

ANTIGENI(Greco ànti - contro, genos - creare) - sostanze che hanno la capacità di provocare la formazione di anticorpi nel corpo e reagire con essi. Un certo numero di polisaccaridi specifici sono incorporati nella membrana degli eritrociti - complessi di amminoacidi con proprietà antigeniche. Questi complessi sono chiamati agglutinogeni.

Ad oggi, negli eritrociti umani sono stati trovati più di 400 antigeni localizzati nella membrana eritrocitaria, 140 dei quali sono combinati in 20 sistemi geneticamente controllati. I restanti antigeni sono comuni o individuali. Per la pratica clinica, i più importanti sono il sistema ABO e il sistema Rh (sistema Rh). Esistono anche gruppi di Kell-Chelano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, ecc. Questi ultimi contano solo con frequenti trasfusioni di sangue o durante la gravidanza incompatibili con uno qualsiasi di questi agglutinogeni. Pertanto, non è consigliabile trasfondere ripetutamente sangue dallo stesso donatore.

Gli antigeni eritrocitari compaiono nel secondo mese di sviluppo embrionale, tuttavia, al momento della nascita del bambino, la loro attività agglutinabile è bassa e ammonta a 1/5 dell'attività degli adulti.

ANTICORPI Sostanze che reagiscono con un antigene. Gli anticorpi naturali sono sempre presenti nel plasma sanguigno e appartengono alla frazione delle gammaglobuline. Questi includono anticorpi del sistema ABO - a e b agglutinine, che compaiono in una persona nei primi mesi dopo la nascita e raggiungono il loro numero massimo entro 5-10 anni.

REAZIONE DI AGGLUTINAZIONE- incollaggio e precipitazione di eritrociti sotto l'azione di anticorpi specifici - agglutinine. Si ritiene che la molecola anticorpale formi un ponte tra due eritrociti con due siti di legame. Ciascuno di questi eritrociti, a sua volta, si lega ad altri eritrociti e, di conseguenza, si uniscono. Quando viene trasfuso sangue incompatibile, l'agglutinazione porta all'emolisi dei globuli rossi e al rilascio di fattori di coagulazione del sangue. I coaguli risultanti ostruiscono i piccoli vasi e quindi interrompono la circolazione capillare.

L'agglutinazione si verifica quando gli agglutinogeni del donatore con lo stesso nome e le agglutinine del ricevente si incontrano.

antigeni eritrocitari. Sulla superficie degli eritrociti sono presenti più di 100 antigeni appartenenti a 14 sistemi. I più importanti sono gli isoemoagglutinogeni del sistema dei gruppi sanguigni ABO. In base alla presenza di A e B AG e dei corrispondenti anticorpi naturali (a-alfa, b-betta), nell'uomo si distinguono 4 gruppi: 0 (I) - nessun antigene, ci sono anticorpi a e b, A (II ) - sono presenti solo l'antigene A e gli anticorpi b, B (III) - ci sono antigeni B e anticorpi a, AB (IV) - ci sono entrambi gli antigeni, nessun anticorpo.

Le persone che hanno anticorpi contro gli antigeni A e B non devono essere trasfuse con il sangue di coloro i cui globuli rossi portano gli antigeni corrispondenti. Pertanto, i destinatari del gruppo sanguigno I (anticorpi alfa e beta) non possono essere trasfusi con eritrociti di nessuno degli altri gruppi, poiché si verificheranno l'agglutinazione e la lisi di questi eritrociti.

Nell'85% delle persone, gli eritrociti hanno Rh-AG (Rh +), scoperto per la prima volta nelle scimmie della specie di scimmia rhesus. Questo antigene è assente nel 15% delle persone. Se una donna Rh-negativa ha un feto che ha questo antigene sui suoi eritrociti (a causa dei geni del padre), la madre è immunizzata ei suoi anticorpi possono distruggere gli eritrociti fetali, specialmente durante la gravidanza ripetuta.

Antigeni leucocitari. Sui leucociti (linfociti) del sangue è stato rilevato un intero sistema di antigeni leucocitari, chiamato HLA (Human Leycocyte Antigens), che è controllato dai geni (il principale complesso di istocompatibilità). Gli antigeni HLA causano incompatibilità tissutale nei trapianti tra individui. I set di antigeni HLA per ogni persona sono individuali e solo nei gemelli identici sono gli stessi. L'HLA è coinvolto nel riconoscimento degli antigeni e determina la predisposizione alle malattie.

I geni che controllano la sintesi di questi antigeni si trovano sul cromosoma 6. Occupano una vasta area genetica e sono divisi in 5 classi. I geni delle classi I e II di istocompatibilità sono di fondamentale importanza nell'immunoregolazione. I loci genici di classe I sono localizzati nel braccio periferico del cromosoma, classe II - più vicino al centromero.

Le molecole HLA di classe I sono eterodimeri, poiché sono costituite da due catene diverse. Uno di essi è pesante, con un peso molecolare di 43 kDa, il secondo è leggero, con un peso molecolare di 11 kDa, legato in modo non covalente al primo. È una b2-microglobulina. La catena pesante ha tre domini (a1, a2, a3) che sporgono sulla superficie cellulare, una regione idrofobica che fissa la catena sulla membrana e una regione terminale nel citoplasma. L'HLA-AG di classe I è presente su tutte le cellule nucleate: linfociti, in misura minore - sulle cellule del fegato, dei polmoni, dei reni, molto raramente sulle cellule del cervello e dei muscoli scheletrici. I geni che controllano gli antigeni di classe I sono rappresentati da tre loci: HLA-A, HLA-B, HLA-C. In ogni locus ci sono diversi alleli responsabili della sintesi dell'antigene corrispondente (epitopo) e indicati da numeri. Gli alleli del locus HLA-A codificano la sintesi di 21 antigeni, HLA-B - 25, HLA-C - 11 antigeni. Con lo sviluppo dell'immunogenetica, il numero di nuovi alleli scoperti è in costante aumento. Gli antigeni di classe I occupano circa l'1% della superficie cellulare. Regolano e limitano l'interazione tra cellule T killer e cellule bersaglio. Quindi, il loro principale ruolo biologico risiede nel fatto che gli AG di classe I sono marcatori del "proprio". Le cellule che trasportano questi antigeni non vengono attaccate dai propri T-killer a causa del fatto che durante l'embriogenesi, i T-killer autoreattivi che riconoscono gli antigeni di classe I sulle proprie strutture vengono distrutti o soppressi.

Le molecole di classe II del sistema HLA sono costituite da due catene polipeptidiche: a (peso molecolare 34 kDa) e b (peso molecolare 28 kDa). Entrambe le catene hanno due domini ciascuno (a1, a2 e b1, b2) fissati nella membrana cellulare da un sito aggiuntivo. Gli HLA-AG di classe II sono espressi su linfociti B, macrofagi e cellule attivate dopo la loro stimolazione con g-interferone. I geni che controllano gli antigeni di classe II sono rappresentati da tre loci: HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP. Il locus DR ha 12 alleli, il locus DQ ne ha 9 e il locus DP ha 6 alleli. Gli HLA-AG di classe II sono coinvolti nel riconoscimento di antigeni estranei, nelle interazioni intercellulari di linfociti B e macrofagi con T-helper.

Gli antigeni del sistema HLA sono ereditati in modo codominante, cioè sono espressi entrambi gli antigeni di due cromosomi. Un individuo può avere fino a 12 alleli (2 per ogni locus). L'insieme di alleli su un cromosoma (aplotipo) viene ereditato nel suo insieme e ci sono solo 4 possibili combinazioni di 2 aplotipi paterni e 2 materni.

La determinazione degli antigeni HLA è necessaria nelle seguenti situazioni:

durante la tipizzazione dei tessuti per selezionare un donatore per il ricevente. La compatibilità per gli antigeni del locus HLA-DR è della massima importanza;

stabilire una relazione tra l'espressione di determinati antigeni e la predisposizione a una particolare malattia. La correlazione più forte è stata trovata tra la presenza di HLA-B27 e la malattia di Bechterew (spondilite anchilosante): il 95% dei pazienti ha questo antigene.

nella valutazione dello stato immunitario, quando si utilizza la rilevazione di cellule T attivate portatrici di antigeni HLA-DR e la determinazione di cellule mononucleate esprimenti HLA-DR coinvolte nel riconoscimento dell'antigene.

Anticorpi alloimmuni- anticorpi contro antigeni eritrocitari. Le principali indicazioni per l'uso: prevenzione del conflitto Rh durante la gravidanza, aborto spontaneo, malattia emolitica del neonato, trasfusione di sangue per prevenire complicanze post-trasfusionali.

Gli eritrociti umani contengono un gran numero di antigeni di gruppo che formano sistemi di gruppo costituiti da una o più coppie di antigeni. Tali sistemi sanguigni di gruppo sono noti come AB0, fattore Rh, Kell, Lewis, Kidd, MNS, Duffy, Diego e altri.
Anticorpi anti-eritrociti alloimmuni - anticorpi contro il fattore Rh e altri antigeni eritrocitari che compaiono nel sangue dopo la trasfusione di sangue di donatore incompatibile o durante la gravidanza. La comparsa di anticorpi alloimmuni nel siero del sangue indica la sensibilizzazione del corpo e un aumento del rischio di complicanze durante la trasfusione di sangue incompatibile, il rischio di aborto spontaneo e lo sviluppo della malattia emolitica del feto in una donna Rh negativa con un Rh -sangue positivo nel feto.
Gli anticorpi Rh sono i cosiddetti anticorpi alloimmuni, poiché compaiono nel sangue delle persone Rh-negative solo in condizioni speciali. Le condizioni favorevoli alla formazione di anticorpi Rh sono l'introduzione di una persona Rh negativa di sangue Rh positivo o la gravidanza di una donna Rh negativa con un feto Rh positivo. Gli alloanticorpi sono contenuti nel siero dell'individuo e non interagiscono con gli antigeni dei propri eritrociti. Interagiscono con gli antigeni eritrocitari di altri pazienti dopo una trasfusione di sangue o durante la gravidanza.
La determinazione di Rh - anticorpi, insieme alla definizione di Rh - affiliazione del paziente e del donatore, è necessaria per prevenire la trasfusione di Rh - sangue incompatibile, nonché per diagnosticare una possibile malattia del feto o del neonato con malattia emolitica. La determinazione degli anticorpi Rh è richiesta anche nella preparazione del materiale da utilizzare nella preparazione dei sieri anti-Rh. Rh - gli anticorpi sono diversi per specificità: anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e; e nella forma: completa e incompleta. La specificità degli anticorpi è determinata da quale degli antigeni con cui reagiscono. La forma degli anticorpi è determinata dal modo in cui reagiscono con i globuli rossi contenenti antigeni Rh specifici. Gli anticorpi completi, che si connettono con gli antigeni Rh degli eritrociti, causano l'agglutinazione di questi eritrociti quando reagiscono in un mezzo salino. Gli anticorpi incompleti in queste condizioni si combinano solo con gli eritrociti, ma non causano agglutinazione, quindi questa reazione non si manifesta esternamente. Per stabilire se si è verificata una reazione tra anticorpi Rh incompleti ed eritrociti, sono necessarie condizioni speciali, in particolare l'aggiunta di vari colloidi (gelatina, poliglucina) o un test di Coombs. In tutte queste condizioni, la reazione tra gli anticorpi Rh e gli eritrociti contenenti l'antigene Rh si manifesta infine anche sotto forma di agglutinazione eritrocitaria.
Gli antigeni del sistema Rh sono di origine proteica. Una delle caratteristiche di questo sistema è il pronunciato polimorfismo, che determina la presenza di molte varietà di antigeni. Negli eritrociti umani viene rilevato un gran numero di antigeni e dei loro sistemi: D, Du, C, c, E, e, Cw, M, N, S, Kell, Kidd, Duffy, Diego e altri. Gli antigeni del gruppo Rh (5 principali) - D, C, c, E, e, così come gli antigeni del sistema Kell (antigeni - K, k, Ku, ecc.) Hanno attualmente il maggior significato clinico. Antigene D ed è il cosiddetto fattore Rh (Rh). L'86% della popolazione della Federazione Russa è classificato come Rh-positivo (Rh+). Il restante 14% della popolazione è Rh negativo (Rh-). Sono considerati donatori Rh-negativi, il cui sangue non contiene nessuno degli antigeni - D, C ed E. L'antigene D ha varietà, le cosiddette varianti "deboli" che compongono il gruppo - Du e si presentano con una frequenza di 1%. I donatori contenenti Du dovrebbero essere classificati come Rh-positivi. Questo deve essere preso in considerazione durante la trasfusione di sangue per evitare complicazioni trasfusionali.

Tali antigeni possono essere rilevati utilizzando metodi speciali.
Il test si basa sulla caratteristica immunologica degli eritrociti di gruppo 0: non portano né antigeni A né B. Pertanto, qualsiasi agglutinazione quando viene aggiunto il siero del paziente sarà dovuta alla presenza di anticorpi atipici in esso. L'assenza di agglutinazione indica la loro assenza.
In alcuni casi, inizia la produzione di anticorpi (anticorpi alloimmuni) contro questi antigeni nel corpo umano. Questa condizione è più comune durante la gravidanza e le trasfusioni di sangue. Durante la gravidanza, una madre Rh-negativa di un feto Rh-positivo può sviluppare un conflitto Rh, che consiste nella formazione di anticorpi nel corpo della madre contro i globuli rossi fetali, che contribuisce alla distruzione dei globuli rossi fetali. Un tale conflitto può portare ad aborto spontaneo o anemia emolitica del feto. Se il feto è Rh negativo in una madre Rh positiva, allora il conflitto Rh non si sviluppa. Il rischio maggiore è possibile durante la gravidanza se la madre appartiene al primo gruppo di sangue e Rh-negativo, e il padre è del primo gruppo e Rh-positivo. In questo caso, c'è una possibilità su quattro che il bambino sia Rh positivo.
Uno qualsiasi degli antigeni di cui sopra, se rilasciato nel sangue di una madre antigene negativa (non contenente vari tipi di antigeni eritrocitari), può causare la comparsa di autoanticorpi e complicare il corso della gravidanza. L'immunogenicità dei principali antigeni del sistema Rhesus diminuisce nell'ordine: c-E-C-e.

Per prevenire il conflitto Rh durante la gravidanza, le donne Rh-negative dovrebbero essere registrate nelle cliniche prenatali e sottoporsi a esami periodici per la comparsa di anticorpi alloimmuni (gli anticorpi contro il fattore Rh sono più spesso determinati), poiché il rischio di sviluppare un conflitto Rh in questa situazione può essere fino al 15%.

Anticorpi alloimmuni- anticorpi contro antigeni eritrocitari. Le principali indicazioni per l'uso: prevenzione del conflitto Rh durante la gravidanza, aborto spontaneo, malattia emolitica del neonato, trasfusione di sangue per prevenire complicanze post-trasfusionali.

Gli eritrociti umani contengono un gran numero di antigeni di gruppo che formano sistemi di gruppo costituiti da una o più coppie di antigeni. Tali sistemi sanguigni di gruppo sono noti come AB0, fattore Rh, Kell, Lewis, Kidd, MNS, Duffy, Diego e altri.
Anticorpi anti-eritrociti alloimmuni - anticorpi contro il fattore Rh e altri antigeni eritrocitari che compaiono nel sangue dopo la trasfusione di sangue di donatore incompatibile o durante la gravidanza. La comparsa di anticorpi alloimmuni nel siero del sangue indica la sensibilizzazione del corpo e un aumento del rischio di complicanze durante la trasfusione di sangue incompatibile, il rischio di aborto spontaneo e lo sviluppo della malattia emolitica del feto in una donna Rh negativa con un Rh -sangue positivo nel feto.
Gli anticorpi Rh sono i cosiddetti anticorpi alloimmuni, poiché compaiono nel sangue delle persone Rh-negative solo in condizioni speciali. Le condizioni favorevoli alla formazione di anticorpi Rh sono l'introduzione di una persona Rh negativa di sangue Rh positivo o la gravidanza di una donna Rh negativa con un feto Rh positivo. Gli alloanticorpi sono contenuti nel siero dell'individuo e non interagiscono con gli antigeni dei propri eritrociti. Interagiscono con gli antigeni eritrocitari di altri pazienti dopo una trasfusione di sangue o durante la gravidanza.
La determinazione di Rh - anticorpi, insieme alla definizione di Rh - affiliazione del paziente e del donatore, è necessaria per prevenire la trasfusione di Rh - sangue incompatibile, nonché per diagnosticare una possibile malattia del feto o del neonato con malattia emolitica. La determinazione degli anticorpi Rh è richiesta anche nella preparazione del materiale da utilizzare nella preparazione dei sieri anti-Rh. Rh - gli anticorpi sono diversi per specificità: anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e; e nella forma: completa e incompleta. La specificità degli anticorpi è determinata da quale degli antigeni con cui reagiscono. La forma degli anticorpi è determinata dal modo in cui reagiscono con i globuli rossi contenenti antigeni Rh specifici. Gli anticorpi completi, che si connettono con gli antigeni Rh degli eritrociti, causano l'agglutinazione di questi eritrociti quando reagiscono in un mezzo salino. Gli anticorpi incompleti in queste condizioni si combinano solo con gli eritrociti, ma non causano agglutinazione, quindi questa reazione non si manifesta esternamente. Per stabilire se si è verificata una reazione tra anticorpi Rh incompleti ed eritrociti, sono necessarie condizioni speciali, in particolare l'aggiunta di vari colloidi (gelatina, poliglucina) o un test di Coombs. In tutte queste condizioni, la reazione tra gli anticorpi Rh e gli eritrociti contenenti l'antigene Rh si manifesta infine anche sotto forma di agglutinazione eritrocitaria.
Gli antigeni del sistema Rh sono di origine proteica. Una delle caratteristiche di questo sistema è il pronunciato polimorfismo, che determina la presenza di molte varietà di antigeni. Negli eritrociti umani viene rilevato un gran numero di antigeni e dei loro sistemi: D, Du, C, c, E, e, Cw, M, N, S, Kell, Kidd, Duffy, Diego e altri. Gli antigeni del gruppo Rh (5 principali) - D, C, c, E, e, così come gli antigeni del sistema Kell (antigeni - K, k, Ku, ecc.) Hanno attualmente il maggior significato clinico. Antigene D ed è il cosiddetto fattore Rh (Rh). L'86% della popolazione della Federazione Russa è classificato come Rh-positivo (Rh+). Il restante 14% della popolazione è Rh negativo (Rh-). Sono considerati donatori Rh-negativi, il cui sangue non contiene nessuno degli antigeni - D, C ed E. L'antigene D ha varietà, le cosiddette varianti "deboli" che compongono il gruppo - Du e si presentano con una frequenza di 1%. I donatori contenenti Du dovrebbero essere classificati come Rh-positivi. Questo deve essere preso in considerazione durante la trasfusione di sangue per evitare complicazioni trasfusionali.

Tali antigeni possono essere rilevati utilizzando metodi speciali.
Il test si basa sulla caratteristica immunologica degli eritrociti di gruppo 0: non portano né antigeni A né B. Pertanto, qualsiasi agglutinazione quando viene aggiunto il siero del paziente sarà dovuta alla presenza di anticorpi atipici in esso. L'assenza di agglutinazione indica la loro assenza.
In alcuni casi, inizia la produzione di anticorpi (anticorpi alloimmuni) contro questi antigeni nel corpo umano. Questa condizione è più comune durante la gravidanza e le trasfusioni di sangue. Durante la gravidanza, una madre Rh-negativa di un feto Rh-positivo può sviluppare un conflitto Rh, che consiste nella formazione di anticorpi nel corpo della madre contro i globuli rossi fetali, che contribuisce alla distruzione dei globuli rossi fetali. Un tale conflitto può portare ad aborto spontaneo o anemia emolitica del feto. Se il feto è Rh negativo in una madre Rh positiva, allora il conflitto Rh non si sviluppa. Il rischio maggiore è possibile durante la gravidanza se la madre appartiene al primo gruppo di sangue e Rh-negativo, e il padre è del primo gruppo e Rh-positivo. In questo caso, c'è una possibilità su quattro che il bambino sia Rh positivo.
Uno qualsiasi degli antigeni di cui sopra, se rilasciato nel sangue di una madre antigene negativa (non contenente vari tipi di antigeni eritrocitari), può causare la comparsa di autoanticorpi e complicare il corso della gravidanza. L'immunogenicità dei principali antigeni del sistema Rhesus diminuisce nell'ordine: c-E-C-e.

Per prevenire il conflitto Rh durante la gravidanza, le donne Rh-negative dovrebbero essere registrate nelle cliniche prenatali e sottoporsi a esami periodici per la comparsa di anticorpi alloimmuni (gli anticorpi contro il fattore Rh sono più spesso determinati), poiché il rischio di sviluppare un conflitto Rh in questa situazione può essere fino al 15%.