Metodi di ricerca in microbiologia. Metodi specifici di diagnostica allergologica Metodo di ricerca allergologica

introduzione

Attualmente, la ricerca microbiologica è un'attività importante e rilevante in biologia e medicina, in quanto ci consente di confermare o negare la presenza di agenti patogeni di malattie infettive nel corpo (o altro oggetto in studio) con un alto grado di accuratezza e affidabilità. I metodi classici di ricerca microbiologica risolvono il problema dell'isolamento di una coltura pura dell'agente patogeno con la sua successiva identificazione mediante caratteristiche biochimiche, antigeniche e di altro tipo. La base della diagnosi microbiologica delle malattie infettive sono i metodi microscopici, microbiologici, biologici, sierologici e allergologici. Grazie ai metodi di ricerca microbiologici, è possibile identificare gli agenti causali di alcune malattie infettive e scegliere il metodo giusto per curare questa malattia.

Bersaglio : Descrivere i principali metodi di ricerca microbiologica utilizzati in biologia e medicina.

Compiti :
- caratterizzare i principali metodi di ricerca in microbiologia secondo le fonti letterarie;
- far conoscere sinteticamente agli studenti i principali metodi di ricerca microbiologica.

Metodo microscopico

I metodi di ricerca microscopica sono metodi per studiare oggetti molto piccoli e indistinguibili ad occhio nudo utilizzando microscopi. Ampiamente usato in studi batteriologici, istologici, citologici e di altro tipo.
I metodi di ricerca microscopica includono la preparazione di strisci e preparazioni per la microscopia. Nella maggior parte dei casi, i risultati degli esami microscopici sono indicativi (ad esempio, determinano il rapporto tra agenti patogeni e colore), poiché molti microrganismi mancano di evidenti caratteristiche morfologiche (cioè strutturali) esterne e interne. Tuttavia, la microscopia del materiale può determinare alcune caratteristiche morfologiche dei patogeni (ad esempio la presenza di nuclei, flagelli, inclusioni intracellulari, ecc.), nonché stabilire il fatto stesso della presenza o dell'assenza di microrganismi nei campioni in esame .
Ci sono microscopia a luce, contrasto di fase, campo oscuro (ultramicroscopia), luminescente, polarizzante, ultravioletta ed elettronica.

metodo microbiologico

I metodi di ricerca microbiologica sono il "gold standard" della diagnostica microbiologica, poiché i risultati degli studi microbiologici consentono di stabilire con precisione la presenza di un agente patogeno nel materiale di prova. L'identificazione delle colture pure (al tipo di microrganismo) viene effettuata tenendo conto delle proprietà morfologiche, culturali, biochimiche, antigeniche del microrganismo. La maggior parte degli studi include anche la determinazione della sensibilità ai farmaci antimicrobici (p. es., gli antibiotici) nel patogeno isolato. Per una valutazione epidemiologica del ruolo di un microrganismo, l'identificazione intraspecifica viene effettuata determinando fagovar, biovar, ecc.

metodo biologico

I metodi di ricerca biologica mirano a determinare la presenza di tossine patogene nel materiale di prova e a rilevare l'agente patogeno stesso (soprattutto con il suo basso contenuto iniziale nel campione di prova). I metodi includono l'infezione di animali da laboratorio con il materiale di prova, seguita dall'isolamento di una coltura pura dell'agente patogeno o dall'accertamento della presenza di una tossina microbica e della sua natura.

La simulazione di infezioni sperimentali in animali sensibili è uno strumento importante per studiare la patogenesi della malattia e la natura delle interazioni all'interno del sistema microrganismo-macroorganismo. Per i test biologici vengono utilizzati solo animali sani di un certo peso corporeo ed età. Il materiale infettivo viene somministrato per via orale, nel tratto respiratorio, per via endovenosa, intramuscolare, sottocutanea, nella camera anteriore dell'occhio, attraverso il foro della bava del cranio, suboccipitale (nella grande cisterna del cervello). Il sangue viene prelevato dagli animali durante la loro vita, essudato (liquido accumulato) dalla cavità addominale, dopo la morte - sangue, pezzi di vari organi, essudati da varie cavità.

Metodo sierologico

I metodi di ricerca sierologica per il rilevamento di specifici anticorpi e antigeni dell'agente patogeno sono uno strumento importante nella diagnosi delle malattie infettive. Sono di particolare valore nei casi in cui non è possibile isolare il patogeno. In questo caso, è necessario identificare un aumento dei titoli anticorpali (cioè la loro concentrazione), e quindi vengono esaminati campioni di siero accoppiati prelevati nell'intervallo di 10-20 giorni (a volte questo intervallo può essere più lungo). Gli anticorpi di solito compaiono nel sangue nella 1a-2a settimana della malattia e circolano nel corpo per un tempo relativamente lungo, il che consente di utilizzarne il rilevamento per studi epidemiologici.

Di particolare importanza sono i metodi per rilevare gli antigeni microbici che generano anticorpi. Appaiono in quantità significative già nelle prime fasi, il che rende la loro identificazione uno strumento importante per la diagnosi rapida delle malattie infettive e la loro determinazione quantitativa nella dinamica del processo infettivo funge da criterio per l'efficacia della terapia antimicrobica.

Metodo allergologico

Gli antigeni di molti agenti patogeni hanno un effetto sensibilizzante, ad es. può causare reazioni allergiche. Questo è usato per diagnosticare malattie infettive, così come negli studi epidemiologici. I test di allergia cutanea, inclusa la somministrazione intradermica di Ag (allergene), hanno riscontrato la massima distribuzione. I test cutanei hanno trovato applicazione nella diagnosi di malattie come morva, melioidosi, brucellosi. Il più famoso è il test di Mantoux, utilizzato sia per diagnosticare la tubercolosi sia per valutare l'immunità del corpo all'agente patogeno.

Conclusione

In questo articolo sono stati brevemente descritti i principali metodi di ricerca in microbiologia (metodi di ricerca microbiologica):
1. Metodo microscopico.
2. Metodo microbiologico.
3. Metodo biologico.
4. Metodo sierologico.
5. Metodo allergologico.

Con l'aiuto dei metodi utilizzati in microbiologia, le persone hanno imparato a identificare e identificare vari agenti patogeni di alcune malattie infettive. Il metodo scelto correttamente contribuisce al corretto trattamento delle malattie in futuro.
Attualmente, i metodi di ricerca microscopici, microbiologici e biologici sono i più ampiamente utilizzati, poiché è grazie a questi metodi che è possibile identificare la causa dell'insorgenza e della manifestazione di malattie infettive negli organismi viventi e fornire una corretta descrizione degli agenti causali di queste malattie.

Fonti:

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Compilatore: Fomina E.

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Esame fisico

Include l'esame del paziente, la palpazione, l'auscultazione (l'ascolto dei suoni che accompagnano il lavoro degli organi) e la percussione (l'ascolto dei suoni quando vengono toccate determinate aree del corpo del paziente).

Diagnosi di laboratorio delle allergie

Il metodo di laboratorio per la diagnosi delle allergie determina lo stato del corpo in base ai test prelevati dal paziente. La maggior parte dei metodi si basa su ELISA (test immunoassorbente legato all'enzima), una specifica reazione antigene-anticorpo. Il metodo della chemiluminescenza multipla e il metodo dell'immunofluorescenza basato sull'apparato ImmunoCAP si basano su ELISA.

Chimica del sangue

Studia lo stato degli organi e dei sistemi interni, la presenza di processi infiammatori, determinando la composizione chimica del sangue.

Esame allergologico di screening

Oggetto di studio- siero di sangue. I test ELISA vengono eseguiti per i principali gruppi di allergeni. Il metodo consente di restringere la ricerca dell'allergene colpevole.

Determinazione delle IgG specifiche

L'oggetto è il siero del sangue. Il test LgG-ELISA viene eseguito con singoli antigeni per identificare con precisione l'allergene colpevole.

Indicazioni: Diagnosi di allergie e intolleranze alimentari.

Interpretazione dei risultati:

• 50 U / ml - il risultato è negativo;

• 50 - 100 U / ml - una debole violazione della tolleranza;
• 100 - 200 U / ml - moderata violazione della tolleranza;
• più di 200 U / ml - una pronunciata violazione della tolleranza.

Ricerca di anticorpi IgE specifici

Gli anticorpi IgE sono responsabili delle reazioni immediate. Determinato nel siero del sangue mediante ELISA. L'agente allergico è identificato.

Indicazioni: incapacità di identificare l'allergene attraverso l'anamnesi, rifiuto dei test cutanei, anamnesi di reazioni sistemiche, dermatiti, ipo e iperreattività della pelle, valutazione quantitativa degli anticorpi, allergia alimentare IgE-dipendente.

Il sangue viene prelevato dalla vena cubitale. Pochi giorni prima della donazione di sangue, gli alimenti allergenici vengono esclusi dalla dieta e dal contatto con gli animali e gli antistaminici vengono sospesi. L'analisi viene eseguita durante il periodo di remissione, il sangue viene prelevato a stomaco vuoto.

Il valore normale (di riferimento) di lgE nel sangue è inferiore a 0,35 UI / ml

Se vengono rilevate allergie IgE-dipendenti, è indicata l'immunoterapia allergene-specifica.

Studio della composizione gassosa del sangue

Vengono determinati il ​​pH, la pressione parziale di O2 e CO2, la quantità di bicarbonato nel sangue del paziente.

Studio del profilo ormonale

Nel sangue viene misurato il livello degli ormoni della corteccia surrenale.

Analisi clinica delle urine

Vengono valutate le caratteristiche fisiche e chimiche dell'urina: colore, trasparenza, densità, acidità, composizione chimica. Nel sedimento viene determinata la presenza di epitelio, eritrociti, leucociti, batteri.

Coprogramma

Utilizzato nella diagnosi delle allergie alimentari.

Analisi generale dell'espettorato

È utilizzato nella diagnosi delle allergie respiratorie. Vengono esaminati la quantità, la consistenza, il colore, l'odore, il carattere (muco, pus, sangue, fluido sieroso), la flora e gli elementi formati.

Test reumatologici

L'oggetto è il sangue. Viene analizzato il livello di fattore reumatologico, fibrinogeno, proteina C-reattiva e antistreptolisina. Il metodo consente di stabilire la presenza, la localizzazione e la fonte dell'infiammazione del tessuto connettivo.

Ricerca virologica

Oggetti: sangue, feci, espettorato, liquido cerebrospinale. Viene determinata la presenza di virus nel corpo.

Analisi batteriologica dell'espettorato e di altre secrezioni (segreti) dalle mucose e dalla pelle

Il campione viene inoculato in un terreno nutritivo e viene eseguita la successiva analisi delle colonie cresciute. Consente di identificare e quantificare la presenza di agenti patogeni di malattie infettive.

Esame citologico di secrezioni, strisci o lavaggi dalla cavità nasale, dalla mucosa congiuntivale, ecc.

Il metodo consiste nell'esaminare al microscopio le cellule presenti nel campione prelevato al fine di individuarne le patologie morfologiche e le lesioni e le loro cause.

Metodi specifici di esame allergologico

Questo gruppo di metodi per diagnosticare le allergie viene eseguito su un paziente e ha lo scopo di identificare l'agente che causa le allergie.

Test cutanei (scarificazione)

Viene valutata la reazione locale al contatto dell'allergene con la pelle.

Esistono i seguenti tipi di test cutanei:

Indicazioni: dati storici che indicano la natura allergica della malattia.

Controindicazioni:

• Fase acuta dell'allergia;
• Malattie infettive acute;
• Malattie autoimmuni, oncologiche, sistemiche;
• malattie del sangue;
• Malattie nervose e mentali;
• Età inferiore a 3 anni;
• Gravidanza, allattamento al seno;
• Assunzione di farmaci antistaminici broncospasmolitici e ormonali.

Motivi per risultati falsi:

• Violazione della tecnologia di campionamento;
• Conservazione impropria dei preparati allergenici;
• Reattività cutanea ridotta;
• Assunzione di antistaminici.

Un risultato positivo indica la sensibilizzazione del corpo, se corrisponde ai risultati dell'anamnesi, viene fatta una conclusione sulla natura allergica della malattia, se c'è una discrepanza, vengono eseguiti ulteriori test.

Con una reazione positiva al test di Mantoux, viene eseguita una diagnosi differenziale di allergie post-vaccinazione e infettive, ovvero viene determinato cosa ha causato la reazione locale: il bacillo di Koch o gli anticorpi senza infezione.

Il test viene eseguito da un allergologo, utilizzando soluzioni allergeniche poste sulla pelle dell'avambraccio. Vengono applicati fino a 15 campioni contemporaneamente.

Un frammento della trama del canale televisivo MIR: condurre prick test per bambini

Prove di eliminazione

Per diverse settimane viene escluso il contatto del paziente con possibili allergeni, il che porta a un miglioramento delle condizioni generali. Alla ripresa dell'esposizione all'allergene desiderato, il paziente mostra nuovamente i sintomi dell'allergia.

In questo modo è possibile identificare con precisione la sostanza che provoca la reazione allergica. Il metodo è più efficace per il cibo, le allergie ai farmaci e la dermatite da contatto.

Prove provocatorie

L'allergene viene applicato alla mucosa dell'organo bersaglio, si verifica una reazione allergica locale.

Quando si diagnosticano le allergie, vengono utilizzati i seguenti tipi di test provocatori:

• Nasale(indicazioni: polinosi, riniti): l'allergene viene posto nella narice;
• Congiuntivale: l'allergene viene instillato sotto la palpebra inferiore;
• Sublinguale(allergia alimentare): l'allergene viene instillato sotto la lingua;
• inalazione(indicazioni: asma bronchiale): viene inalato un aerosol di un preparato allergenico;
  • Test di inalazione con carbacolo: conferma della diagnosi di asma bronchiale;
  • Test di inalazione con aria fredda: studio dell'iperreattività bronchiale aspecifica;
• Metodi aggiuntivi esame allergico:
  • Prova di Duncan(per allergia al freddo): posizionare un pezzo di ghiaccio sulla pelle per 20 minuti;
  • Prova termica(per allergia al calore): una bottiglia di acqua calda (40 ° C) viene posta sulla pelle dell'avambraccio per 10 minuti.

Metodi funzionali per la diagnosi delle allergie

Consente di valutare il lavoro dei sistemi fisiologici del corpo attraverso la misurazione strumentale delle manifestazioni esterne del loro lavoro.

Quando si diagnosticano le allergie, viene valutato il lavoro dei polmoni e delle vie respiratorie:

• Flussimetria di picco- misurazione del picco di flusso espiratorio;
• Spirometria e spirografia- vengono misurate la velocità e le caratteristiche volumetriche della respirazione;
• Pneumotachimetria- misurazione della velocità dell'aria durante l'inspirazione e l'espirazione forzata.

Metodi dell'esame strumentale

L'arsenale di metodi strumentali per la diagnosi delle allergie comprende:

• Rinoscopia anteriore: diagnosi delle lesioni della mucosa nasale.
• Rinomanometria anteriore: misura il restringimento del lume delle vie nasali a causa di un test di allergia nasale.
• Esami endoscopici: esame degli organi interni attraverso un endoscopio.

Oltre ai metodi tradizionali di cui sopra, esistono metodi alternativi per diagnosticare le allergie.

Metodi alternativi per la diagnosi di malattie allergiche

Se una malattia allergica si manifesta con sintomi insoliti o la diagnosi è difficile con metodi tradizionali, si ricorre a metodi alternativi per diagnosticare le allergie.

Test leucocitotossico

Viene determinato il numero di leucociti che trasportano un antigene specifico. La presenza di un antigene è determinata dal cambiamento di aspetto di un leucocita quando reagisce con un sospetto allergene.

Test allergologico per la rilevazione delle IgG in ELISA

Viene utilizzato nell'identificazione di un agente allergico e nella diagnosi di intolleranze alimentari.

Test VEGA (test elettrodermico) metodo Voll

Studio della conducibilità elettromagnetica nel corpo. La diminuzione della conduttività indica un processo allergico.

Analisi dei capelli e test allergologici

Riflesso auricolocardico

Il cambiamento del polso e del riempimento del sangue viene valutato al contatto con l'allergene.

Per una diagnosi inequivocabile, l'allergologo durante l'esame utilizza a turno diversi metodi elencati per diagnosticare le allergie.

Programma "Ciao, dottore!". Metodi moderni di diagnostica molecolare dell'allergia

15.1. Caratteristiche dei laboratori microbiologici e immunologici

Tutto il lavoro con i microbi viene svolto in laboratori che, a seconda dei compiti principali, possono essere di ricerca, diagnostica o produzione.

Il sistema sanitario ha:

Laboratori diagnostici clinici di tipo generale o speciale (biochimici, batteriologici, immunologici, citologici, ecc.) che fanno parte di ospedali, policlinici, dispensari e altre istituzioni mediche;

Laboratori batteriologici della Vigilanza Sanitaria ed Epidemiologica dello Stato (GSN);

Laboratori sanitari e batteriologici del GOS;

Laboratori chimico-sanitari del GOS;

Laboratori didattici centrali (TsNIL), problematici, periferici, delle università;

Laboratori specializzati (in particolare infezioni pericolose, ecc.).

Attualmente, i laboratori e le istituzioni di laboratorio più grandi (dipartimenti, istituti, impianti di produzione) sono generalmente specializzati e lavorano con uno o un altro gruppo di microbi.

I virus vengono trattati nei laboratori virologici che dispongono delle attrezzature appropriate e utilizzano metodi di ricerca speciali. Sono presenti laboratori micologici e protozoologici. Carattere specializzato

vengono inoltre acquisiti laboratori batteriologici, in cui il lavoro è concentrato su determinati gruppi di batteri, ad esempio rickettsia, tubercolosi, leptospirali, anaerobici, ecc. Gli studi immunologici vengono eseguiti in laboratori immunologici, sebbene alcuni tipi di studi possano essere eseguiti anche in laboratori microbiologici laboratori, ad esempio, sierodiagnosi di malattie infettive.

Il lavoro di laboratorio con microbi patogeni viene svolto in laboratori appositamente attrezzati che garantiscono la modalità operativa e le precauzioni di sicurezza che escludono la possibilità di infezione del personale e la fuoriuscita di microbi al di fuori del laboratorio.

La necessità di una chiara regolamentazione delle condizioni di lavoro con i microbi, che sono pericolosi a vari livelli per i lavoratori di laboratorio e la popolazione circostante, ha portato allo sviluppo di una classificazione dei microbi, suddividendoli in 4 gruppi in base al loro grado di rischio biologico (classificazione OMS ). In Russia, secondo le raccomandazioni dell'OMS, anche i microbi patogeni sono divisi in 4 gruppi: Gruppo 1 - agenti patogeni di infezioni particolarmente pericolose; gruppo 2 - agenti patogeni di malattie epidemiche umane altamente contagiose; 3o gruppo - agenti causali di malattie infettive, assegnati a gruppi nosologici indipendenti; 4o gruppo - microbi condizionatamente patogeni - agenti causali di infezioni opportunistiche. La numerazione dei gruppi di microbi adottati in Russia differisce nell'ordine inverso dalla classificazione dell'OMS, dove i microbi con la patogenicità più bassa appartengono al 1o gruppo e quelli particolarmente pericolosi al 4o gruppo.

In accordo con la divisione dei microbi in gruppi in base al grado di rischio biologico, anche i laboratori sono suddivisi in categorie. Secondo la nomenclatura dell'OMS, esistono 3 categorie di laboratori microbiologici:

Laboratori di base (di base o generali), che, per le caratteristiche specifiche del lavoro, possono essere dotati di vari dispositivi di protezione;

Laboratori di sicurezza (isolati) e laboratori a regime speciale (massimalmente isolati).

La sicurezza del lavoro nei laboratori di tutte le categorie è garantita dall'attuazione della routine e delle regole di lavoro in laboratorio, dall'adempimento dei requisiti per i locali del laboratorio e delle loro attrezzature, dalla fornitura di laboratori con attrezzature adeguate.

monitoraggio, sorveglianza medica della salute dei dipendenti, formazione e addestramento del personale in sicurezza in laboratorio.

15.2. Attrezzature per laboratori microbiologici e immunologici

I locali del laboratorio di base dovrebbero essere spaziosi per garantire lo svolgimento sicuro del lavoro di laboratorio. Pareti, soffitti e pavimenti devono avere una superficie liscia, facile da pulire, impermeabile ai liquidi e resistente ai disinfettanti comunemente usati in laboratorio. La superficie dei tavoli da lavoro deve essere impermeabile, resistente a disinfettanti, acidi, alcali, solventi organici e calore moderato. I mobili da laboratorio devono essere durevoli. Lo spazio sotto i tavoli e tra i mobili dovrebbe essere facilmente accessibile per la pulizia. Il laboratorio dovrebbe disporre di un'autoclave per la disinfezione dei rifiuti.

Le apparecchiature di laboratorio di base dovrebbero limitare o impedire il contatto del microbiologo con materiale infettivo, dovrebbero essere realizzate con materiali durevoli, impermeabili ai liquidi e resistenti alla corrosione. Le apparecchiature devono essere progettate e installate in modo da poter essere facilmente pulite, decontaminate e ispezionate.

Il laboratorio è dotato di microscopio, autoclave, termostati, armadi di essiccazione e sterilizzazione, apparato per sierocoagulazione, distillatore, centrifughe, bilance da laboratorio, pHmetro, FEC, agitatore magnetico e bagno di lavaggio.

I locali di lavoro del laboratorio devono essere forniti di acqua fredda e calda, elettricità, vuoto, ossigeno, aria ad alta pressione, ecc. Alcuni armadi sono dotati di cassette e cappe aspiranti.

I locali obbligatori comprendono laboratori per infezioni intestinali e goccioline, sanitari e batteriologici, sierologici, nonché locali ausiliari: una cucina media, una lavanderia, una stanza di sterilizzazione (pulita e sporca), un'anagrafe, magazzini, un bagno per i dipendenti, un vivaio. Nei laboratori con punti per i test per il trasporto di microrganismi, doteranno inoltre una sala di accoglienza, una sala di trattamento, servizi igienici per il campionamento

Materiale. Disporre i locali in modo tale che i flussi sporchi e puliti non si intersechino e non si tocchino.

Per quanto riguarda i locali dei laboratori sicuri, devono essere osservati gli stessi requisiti del laboratorio di base. Inoltre, questo tipo di laboratorio dovrebbe essere separato da quelle parti dell'edificio in cui il movimento dei dipendenti non è limitato. Le strutture per il lavaggio delle mani dovrebbero essere dotate di dispositivi per l'apertura dell'acqua con un pedale o un gomito. Le finestre devono essere chiuse e sigillate. Le porte d'ingresso ai locali dei laboratori devono essere autochiudenti e dotate di serratura. La ventilazione di scarico è progettata in modo tale da creare la pressione più bassa nelle stanze con il più alto rischio di infezione. In questo caso il movimento dell'aria avverrà dai locali ausiliari in direzione del locale di lavoro principale. L'aria esausta viene immessa nell'ambiente solo dopo essere stata filtrata attraverso filtri antibatterici. Quando si dotano di attrezzature per laboratori sensibili, sono guidati dalle raccomandazioni sviluppate per i laboratori di base, con l'aggiunta che tutto il lavoro con materiale infettivo al loro interno viene svolto in scatole protettive. Nella modalità dei laboratori di massimo isolamento, ci sono una serie di caratteristiche per garantire la massima sicurezza biologica del personale, del pubblico e dell'ambiente. L'ingresso al laboratorio e l'uscita dallo stesso vengono effettuati tramite un posto di controllo sanitario. All'ingresso è obbligatorio cambiarsi completamente indossando abiti appositi; all'uscita, prima di cambiarsi, è obbligatoria la sanificazione mirata (doccia, disinfettanti) del personale. La boxe viene utilizzata per ridurre il rischio che materiale infettivo entri nell'ambiente. Usando scatole (da tavolo, laminare) creano barriere fisiche per impedire il possibile contatto del personale che lavora con materiale infetto.

15.3. Regole per lavorare in un laboratorio microbiologico

Le regole di base per lavorare nel laboratorio di base includono:

Divieto di lavorare con una pipetta usando la bocca;

Divieto di mangiare, bere, fumare, conservare alimenti e utilizzare cosmetici negli ambienti di lavoro;

Mantenere la pulizia e l'ordine;

Disinfezione delle superfici di lavoro almeno una volta al giorno e dopo ogni contatto con materiale infetto;

Lavarsi le mani dal personale dopo aver maneggiato materiale infetto, animali, prima di lasciare il laboratorio;

Eseguire tutti i lavori in modo tale da ridurre al minimo la possibilità di formazione di aerosol;

Decontaminazione di tutti i materiali infetti prima dello smaltimento o del riutilizzo.

15.4. Principi di diagnosi microbiologica delle malattie infettive

Il posto più importante nella diagnosi di laboratorio delle malattie infettive è occupato da una specifica diagnostica microbiologica, che viene effettuata in laboratori batteriologici, virologici, immunologici e di altro tipo. Si compone di tre fasi: pre-analitica, analitica e post-analitica.

La prima fase della diagnostica microbiologica è preanalitico, compreso il prelievo di materiale per la ricerca. La scelta del materiale di prova è determinata dalla patogenesi e dal quadro clinico della malattia infettiva. Il materiale di prova viene prelevato, se possibile, in condizioni asettiche, posto in un contenitore sterile e consegnato al laboratorio il prima possibile (preferibilmente entro 1 ora). In alcuni casi, la semina del materiale viene effettuata al capezzale del paziente. A volte è consentito lo stoccaggio a breve termine del materiale in condizioni regolamentate. Il materiale studiato è accompagnato da un documento, che deve indicare il momento della presa, la natura del materiale, la sua fonte e determinare con precisione lo scopo dello studio.

Il materiale per la ricerca in microbiologia medica sono vari fluidi corporei biologici e patologici (sangue, pus, urina, espettorato, liquido cerebrospinale, feci, vomito, lavaggi, ecc.) E tessuto - materiale bioptico da un vivente o autopsia da un cadavere. Nella microbiologia sanitaria, gli oggetti ambientali (aria, acqua, cibo, ecc.) o i tamponi da essi vengono prelevati per la ricerca. Quando si prende materiale

la per la ricerca microbiologica, devono essere osservate le seguenti regole:

Il materiale viene prelevato direttamente dalla fonte dell'infezione o viene esaminato lo scarico corrispondente (pus, urina, bile, ecc.);

La quantità di materiale dovrebbe essere sufficiente per condurre lo studio e ripeterlo se necessario;

Il materiale viene prelevato, se possibile, nel periodo iniziale della malattia, poiché è durante questo periodo che i patogeni vengono isolati più spesso, ce ne sono di più, hanno una localizzazione più tipica;

Il materiale viene prelevato prima dell'inizio della chemioterapia antimicrobica o dopo un certo periodo di tempo dall'assunzione del farmaco antibatterico, necessario per la sua rimozione dall'organismo;

È necessario prevenire la possibilità di entrare nel materiale dei preparati antimicrobici (disinfettanti, antisettici, antibiotici);

Il trasporto del materiale al laboratorio deve essere effettuato il prima possibile, in condizioni che escludano la morte di specie microbiche instabili, o collocato in speciali mezzi di trasporto;

Durante il trasporto devono essere osservate tutte le norme di sicurezza biologica;

Al materiale è allegato un documento di accompagnamento, contenente le informazioni di base necessarie per condurre uno studio microbiologico (cognome, nome, patronimico del paziente, numero di anamnesi, diagnosi clinica, ecc.).

15.5. Metodi di diagnostica microbiologica

La fase analitica comprende metodi microscopici, culturali, biologici, sierologici e allergologici di diagnostica microbiologica.

Metodo microscopico consiste nella preparazione di preparazioni (native o colorate con metodi semplici o complessi) a partire dal materiale in studio e nella loro microscopia utilizzando vari tipi di apparecchiature microscopiche (luce, campo oscuro, contrasto di fase, luminescenti, elettroniche, ecc.). In batteriologia, il metodo microscopico è chiamato batterioscopico, in virologia - viroscopia.

Metodo culturale consiste nell'inoculazione del materiale di prova su terreni nutritivi artificiali, colture cellulari o embrioni di pollo al fine di isolare e identificare una coltura pura dell'agente patogeno o degli agenti patogeni. In batteriologia, viene chiamato il metodo di coltura batteriologico, in micologia - micologico, in protozoologia - protozoologico, in virologia - virologico.

metodo biologico (sperimentale o saggio biologico) consiste nell'infettare animali da laboratorio sensibili o altri oggetti biologici (embrioni di pollo, colture cellulari) con il materiale di prova. Viene utilizzato per isolare una coltura pura dell'agente patogeno, determinare il tipo di tossina, l'attività dei farmaci chemioterapici antimicrobici, ecc.

Metodo sierologico consiste nel determinare il titolo di anticorpi specifici nel siero del sangue del paziente, meno spesso nella rilevazione dell'antigene microbico nel materiale di prova. A tale scopo vengono utilizzate le risposte immunitarie.

Metodo allergologico consiste nell'identificare un'allergia infettiva (HRT) a un allergene microbico diagnostico del farmaco. A tale scopo vengono eseguiti test di allergia cutanea con gli allergeni corrispondenti.

Il valore diagnostico di questi metodi è disuguale. Il metodo principale di diagnostica microbiologica è metodo batteriologico, in quanto consente di isolare e identificare l'agente microbico-patogeno, cioè la causa principale della malattia. I restanti metodi sono meno informativi, poiché consentono di rilevare i cambiamenti nel corpo dovuti alla presenza di un microbo in esso. Il secondo per importanza è metodo sierologico, poiché l'interazione di antigene e anticorpo è caratterizzata da un alto grado di specificità. Il contenuto informativo degli altri tre metodi è basso e di solito servono come aggiunta ai metodi batteriologici e sierologici. Pertanto, la microscopia del materiale in studio non sempre ci consente di vedere e identificare i microbi al microscopio. Possono essere rilevati solo quando il materiale ne è altamente contaminato. Anche trovando i batteri al microscopio, è impossibile identificarli morfologicamente alla specie. Come è noto, tutta la diversità delle specie di batteri è ridotta a 4 forme morfologiche principali: cocchi, bastoncelli, forme convolute e ramificate. Pertanto, secondo micro

Nel quadro scopico, i batteri osservati possono essere attribuiti molto provvisoriamente a un grande taxon, ad esempio cocchi gram-positivi. Solo in casi isolati, quando i batteri hanno una morfologia unica, possono determinare microscopicamente il loro genere. Il contenuto informativo del metodo microscopico di funghi e protozoi è maggiore, poiché funghi e protozoi, essendo eucarioti, hanno dimensioni maggiori e morfologia più caratteristica.

Le capacità diagnostiche del metodo biologico sono limitate dal fatto che gli animali da laboratorio sono immuni alla maggior parte dei patogeni delle infezioni antroponotiche umane, quindi non è possibile causare un'infezione sperimentale in essi.

Le possibilità del metodo allergologico sono limitate dal fatto che la maggior parte dei microbi nel corpo umano non causa la terapia ormonale sostitutiva.

Poiché gli studi microbiologici sono uno dei tipi più costosi di ricerca di laboratorio, il microbiologo deve affrontare il compito di effettuare una diagnosi microbiologica affidabile con il minor tempo, fatica e denaro. Pertanto, per fare una diagnosi vengono utilizzati 1-5 metodi diagnostici, in modo che l'insieme di metodi selezionato garantisca la risposta corretta.

Di particolare importanza sono i metodi di diagnostica espressa, che consentono di effettuare una diagnosi microbiologica entro un breve periodo di tempo (da alcuni minuti a diverse ore) dal momento in cui il materiale di prova viene consegnato al laboratorio. I metodi espressi includono RIF, ELISA, RIA, PCR, l'uso di biochip, cromatografia, ecc. Le caratteristiche della diagnosi delle infezioni anaerobiche sono descritte nei materiali del disco.

Accanto alle tradizionali metodiche classiche di diagnostica microbiologica, negli ultimi anni hanno acquisito sempre maggiore importanza le metodiche diagnostiche di biologia molecolare (DNA probes, PCR, ligase chain reaction - LCR, cromatografia, elettroforesi, immunoblot, biochip, ecc.).

I metodi diagnostici biologici molecolari si basano sull'identificazione di DNA e RNA specifici per una determinata specie microbica e comprendono l'ibridazione basata su sonde di DNA e la diagnostica basata su PCR.

post-analitico la fase della diagnostica microbiologica consiste nell'interpretazione clinica dei risultati degli esami di laboratorio. Allo stesso tempo, il medico curante dovrebbe valutare il significato eziologico dei microbi isolati dal paziente, regolare la chemioterapia antimicrobica empirica somministrata al paziente sulla base dei dati del monitoraggio microbiologico, ecc.

15.5.1. Metodi di diagnostica microbiologica delle infezioni batteriche

In batteriologia, vengono utilizzati metodi batterioscopici, batteriologici e biologici per rilevare un agente patogeno nel materiale di prova.

I vantaggi del metodo batterioscopico sono la semplicità, la velocità, l'economia. Tuttavia, trova un uso limitato, poiché può essere utilizzato solo se sono presenti caratteristiche morfologiche o tintoriali dell'agente patogeno e il suo contenuto sufficiente nel materiale di prova. Questo metodo è indicativo.

Il metodo principale e più accurato per diagnosticare le infezioni batteriche è batteriologico, che viene utilizzato per quasi tutte le malattie, nonostante i suoi difetti: la durata dello studio (da 4-5 giorni a 2 mesi), il pericolo (poiché una pura coltura dell'agente patogeno accumula), costo relativamente elevato. Nel caso in cui si preveda che il materiale di prova contenga l'agente patogeno in quantità sufficienti, il materiale viene seminato su terreni densi di nutrienti per ottenere colonie isolate. Con un basso contenuto di microbi, il materiale di prova viene prima seminato su terreni nutritivi liquidi - terreni di arricchimento. La coltura pura isolata è identificata da proprietà morfologiche, tintoriali, colturali, biochimiche, antigeniche e tossigeniche (a seconda del tipo di patogeno). La definizione delle proprietà elencate consente di impostare il tipo di agente patogeno. Ai fini della marcatura epidemiologica, viene effettuata l'identificazione intraspecifica della coltura isolata: vengono determinati i suoi fagovar, biovar, ecc.. Inoltre, per prescrivere un trattamento razionale, di norma, viene determinata la sensibilità della coltura isolata agli antibiotici.

Nella diagnosi microbiologica delle malattie causate da microbi opportunisti, rappresentanti della normale microflora, è obbligatorio determinare il numero di agenti patogeni nel materiale di prova.

Il metodo biologico è antieconomico, disumano e quindi trova un'applicazione limitata. Topi bianchi, porcellini d'India, conigli, scimmie e altri animali sono usati come animali da esperimento.

La diagnosi di una malattia infettiva può essere stabilita anche utilizzando il metodo sierologico, che consente di rilevare anticorpi specifici nel siero del paziente o antigeni specifici direttamente nel materiale di prova. Gli anticorpi contro l'agente eziologico della malattia compaiono, di norma, entro la fine della prima settimana di malattia. L'incapacità di rilevarli nei primi giorni della malattia è un grave inconveniente del metodo, soprattutto nei casi in cui la malattia è acuta. Inoltre, molte malattie richiedono lo studio della formazione di anticorpi in dinamica e il rilevamento di un aumento del numero di anticorpi, che inoltre non consente una diagnosi rapida. Lo svantaggio del metodo è che non può identificare con precisione l'agente patogeno e determinare il suo antibiogramma. Ma allo stesso tempo è un metodo completamente sicuro e relativamente economico che ti consente di fare una diagnosi in breve tempo. Attualmente, in una serie di malattie, vengono determinate non solo la quantità, ma anche le classi di immunoglobuline.

In alcune malattie, il metodo sierologico viene utilizzato per rilevare antigeni specifici nel materiale di prova. Poiché gli antigeni specifici che compongono l'agente patogeno si trovano nel materiale patologico fin dai primi minuti della malattia, questa variante del metodo sierologico viene utilizzata per la diagnosi accelerata (durante il primo giorno di malattia) o addirittura espressa (entro diverse ore) di malattie infettive.

Come ausiliario in un piccolo gruppo di malattie infettive, viene utilizzato un metodo allergologico, che consente di rilevare l'ipersensibilità a un antigene specifico (allergene), che è l'agente eziologico della malattia.

15.5.2. Metodi di diagnostica microbiologica delle infezioni virali

In virologia, i metodi per la diagnosi di laboratorio delle infezioni virali hanno le loro specificità, tenendo conto delle caratteristiche della biologia dei virus. Vengono utilizzati metodi viroscopici, virologici e sierologici di diagnostica di laboratorio.

Il metodo viroscopico consiste nel rilevare il virus nel materiale di prova al microscopio. Viene utilizzato più spesso un microscopio elettronico, meno spesso un microscopio a fluorescenza. A causa delle dimensioni trascurabili dei virus, la microscopia ottica non viene praticamente utilizzata. Solo per il rilevamento di virus di grandi dimensioni, utilizzando metodi di supercolorazione, può essere utilizzato un microscopio ottico. Inoltre, con l'aiuto di un microscopio ottico, è possibile rilevare inclusioni intracellulari che si formano nelle cellule colpite durante determinate infezioni.

Il metodo virologico consiste nell'infettare un modello biologico sensibile (animali da laboratorio, embrioni di pollo o colture cellulari) con il materiale di prova, indicando il virus e la sua successiva identificazione. Quando gli animali da laboratorio sono infetti, i virus sono indicati, di norma, secondo il quadro clinico della malattia, i cambiamenti patologici e anatomici approssimativamente e infine, ad esempio, utilizzando una reazione di emoagglutinazione. La stessa reazione consente di rilevare virus in un embrione di pollo, che, di norma, non mostra cambiamenti visibili durante l'apertura. Nella coltura cellulare, la presenza del virus è determinata dall'azione citopatica (compresa la formazione di inclusioni intracellulari), dall'emoadsorbimento, dal fenomeno della formazione della placca, dalla reazione di emoagglutinazione e dall'assenza di variazione del colore dell'indicatore. L'identificazione del virus viene effettuata mediante test sierologici (RPHA, RTGA, RN, RSK, ELISA, ecc.). Il metodo virologico consente di determinare con precisione la natura dell'agente patogeno, ma richiede tempo sufficiente (5-7 giorni o più), costi materiali significativi e non è sicuro.

Una caratteristica del metodo sierologico in virologia è lo studio dei sieri accoppiati. Il primo siero viene prelevato dal paziente nel periodo acuto all'esordio della malattia, conservato ad una temperatura di 4-8°C, ed il secondo siero viene prelevato dopo 10-14 giorni. Sieri

esplorare allo stesso tempo. La malattia è evidenziata dalla sieroconversione, cioè aumento del titolo anticorpale nel secondo siero rispetto al primo. La sieroconversione di 4 volte o più è diagnostica. Poiché molte malattie virali sono acute, questa variante del metodo sierologico viene solitamente utilizzata per la diagnosi retrospettiva.

Il metodo principale di diagnosi di laboratorio delle infezioni virali è virologico.

La diagnostica accelerata ed espressa delle malattie virali viene eseguita allo stesso modo delle infezioni batteriche.

15.5.3. Caratteristiche della diagnosi microbiologica delle micosi

Il metodo microscopico viene solitamente utilizzato per diagnosticare le infezioni fungine. Il metodo micologico consiste nel seminare materiale patologico su speciali terreni nutritivi, isolare una coltura pura del patogeno e identificarlo per proprietà morfologiche, colturali e biochimiche. Una caratteristica di questo metodo è la sua durata: diverse settimane a causa della lenta crescita dei funghi. Il rilevamento degli anticorpi durante l'esame sierologico è possibile dalla 2a alla 4a settimana della malattia. In alcune malattie, vengono rilevati antigeni specifici nel materiale di prova. Il metodo allergologico è usato raramente. Spesso, con le micosi, viene utilizzato un metodo istologico, che consiste nel rilevare elementi del fungo (spore, teste di conidi, ecc.) In organi e tessuti colpiti da funghi. A tale scopo vengono preparate sezioni istologiche di tessuto sottile o ultrasottile, colorate con speciali metodi istologici e istochimici ed esaminate mediante microscopia ottica e, se necessario, elettronica.

15.5.4. Caratteristiche della diagnosi microbiologica delle infezioni da protozoi

L'esame microscopico del materiale patologico consiste nella preparazione sia di preparati nativi ("goccia spessa") che di strisci colorati secondo il metodo Romanovsky-Giemsa, ed è il metodo principale per diagnosticare malattie causate da protozoi. In alcuni casi vengono utilizzati metodi diagnostici sierologici e allergologici.

15.6. Principi di diagnosi immunologica delle malattie umane

L'immunodiagnostica è una sezione dell'immunologia che studia e sviluppa metodi per diagnosticare malattie infettive e non infettive associate alla funzione del sistema immunitario.

Molte malattie infettive hanno subito oggi cambiamenti significativi, che si riflettono in un aumento della quota di forme lievi, cancellate e asintomatiche, in un aumento della componente allergica e in un'alta frequenza di infezioni miste. Ciò complica la diagnosi tradizionale delle malattie, quindi l'importanza dell'immunodiagnostica, finalizzata alla ricerca di antigeni patogeni o specifici turni immunitari nel corpo del paziente, è in aumento.

Sotto immunoreattività (stato immunitario, profilo immunitario) comprendere la capacità del sistema immunitario di rispondere immunitaria in un dato momento. È caratterizzato dalla concentrazione di immunoglobuline, dal numero di linfociti e leucociti, dal rapporto tra cellule T e B e indicatori funzionali, in particolare dalla capacità delle cellule immunocompetenti di rispondere alla stimolazione.

15.7. Controllo di qualità della ricerca di laboratorio

Un elemento importante del lavoro del laboratorio microbiologico e immunologico è ottenere risultati di test accurati e comparabili, per i quali è necessario controllare la qualità degli studi. Il controllo di qualità può essere interno o esterno.

Controllo di qualità intralaboratorio - un sistema di misure di controllo che vengono eseguite in un laboratorio separato dal personale di questo laboratorio e mirano a garantire l'adeguato livello di qualità del lavoro del laboratorio.

Controllo di qualità esterno - un sistema di misure di controllo che vengono svolte nell'ambito del Sistema federale unificato per la valutazione esterna della qualità (FSVOK) della ricerca di laboratorio da parte di gruppi di esperti e mirano a garantire la corretta organizzazione dei processi tecnologici per la produzione della ricerca di laboratorio.

Il sistema federale di valutazione esterna della qualità della ricerca di laboratorio è costituito da sezioni, all'interno di ciascuna delle quali

viene effettuata una valutazione della qualità di un certo tipo di ricerca di laboratorio. La struttura di FSVOK comprende gruppi di esperti per lo sviluppo e l'attuazione del controllo di qualità esterno in vari tipi di ricerca di laboratorio.

Compiti per l'autoformazione (autocontrollo)

UN.Assegna un nome al metodo di ricerca microbiologica, che consente di stabilire il tipo di agente patogeno:

1. Allergico.

2. Microscopico.

3. Culturale.

4. Biologico.

B.Assegna un nome al compito principale del metodo di ricerca batteriologica.

B.Il siero è stato prelevato da un paziente con una sospetta infezione virale il 7° giorno della malattia, in cui sono stati trovati specifici anticorpi antivirali. Valutare l'affidabilità del risultato della ricerca.

G.Indicare il tipo di laboratorio a cui inviare il materiale di un paziente sospettato di avere un'infezione particolarmente pericolosa.

Secondo le statistiche dell'OMS, il 40% della popolazione soffre di allergie. E questo è comprensibile: l'aria, l'acqua e il suolo del pianeta sono saturi di sostanze nocive, il cibo ha cessato da tempo di essere pulito e semplice nella composizione, l'uso della chimica nella vita di tutti i giorni ha superato ogni ragionevole limite.

Ogni giorno allergologi e immunologi hanno sempre più pazienti. In questo caso, il fattore ereditario è di non poca importanza: è stato dimostrato che i bambini con allergie hanno il 70% di possibilità di diventare allergici se entrambi i genitori soffrono di questa malattia, ma se solo il padre o la madre, la probabilità scende al 33 %, che è anche parecchio.

Come si verifica una reazione allergica?

Questa è una maggiore sensibilità del corpo a una determinata sostanza, sia essa una medicina, un prodotto, lana, polvere domestica, polline, muffa o un microbo.

La maggior parte delle persone non reagisce a ciò che induce una persona allergica a versare lacrime, tossire e scoppiare in eruzioni cutanee. Il sistema immunitario del paziente dà una risposta specifica a questo patogeno ().

Normalmente il compito degli anticorpi prodotti dal sistema immunitario (immunoglobuline) è quello di contrastare gli agenti patogeni e le sostanze nocive. Tuttavia, vale la pena fallire (la cui causa spesso non è nota con certezza), e questi anticorpi, non riconoscendo "noi" e "loro", innescano una reazione allergica alle sostanze più innocue. E grazie ai meccanismi del "ricordare", la volta successiva, quando questo componente entra nuovamente nel corpo, il sistema immunitario produce una risposta potenziata, che si manifesta con una serie completa di sintomi allergici pronunciati.

Cosa sono gli allergeni

Per loro natura, gli allergeni sono proteine ​​e lipidi estranei, nonché polisaccaridi di origine animale e vegetale.

Gli antigeni possono entrare nel corpo umano in diversi modi:

• Attraverso il sangue (ad esempio, è stata effettuata una puntura di insetto o un'iniezione e ne è seguita una reazione allergica alla sostanza iniettata).
• Per inalazione (gli allergeni erano presenti nell'aria).
• Enterally (l'allergene è arrivato con cibo, acqua).
• Attraverso la pelle e le mucose.

Classificazione degli allergeni

Esistono diverse classificazioni degli allergeni, una delle più comuni si basa sul modo in cui l'allergene entra nel corpo:

A. Allergeni da inalazione:

1. Allergeni domestici:
   • polvere domestica e industriale;
   • spore di funghi simili a lieviti e muffe;
   • acari della polvere domestica, cibo per pesci.
2. allergeni epidermici:
   • epidermide, particelle epidermiche, forfora, capelli umani;
   • lana, segreti animali (saliva, urina, secrezioni di ghiandole sebacee e sudoripare).
3. Allergeni del polline (polline delle piante):
   • alberi (betulla, quercia, ecc.);
   • colture di cereali;
   • erbacce (ambrosia, assenzio, girasole);
   • erbe dei prati (festuca dei prati, ricci, bluegrass).
4. Particelle di corpi di insetti.

B. Allergeni enterali

• Allergeni alimentari di origine vegetale (agrumi, frutta a guscio, sesamo, legumi, cereali, pomodori, ecc.);
• Allergeni alimentari di origine animale (pesce, latte, uova, frutti di mare, ecc.).

B. Medicinali.

D. Allergeni degli insetti:

• veleni di insetti imenotteri (api, vespe, bombi, calabroni, tafani, tafani, ecc.);
• saliva di insetti succhiatori di sangue (zanzare, cimici, moscerini, ecc.).

Sintomi di allergia

Sebbene l'allergia sia caratterizzata da una varietà di manifestazioni, è ancora possibile distinguerne i segni tipici, come:

• naso che cola, congestione nasale, starnuti, gonfiore della mucosa;
• lacrimazione, arrossamento degli occhi, infiammazione della congiuntiva, secrezione torbida;
• difficoltà respiratorie, mancanza di respiro, spasmo bronchiale, respiro sibilante, ecc.;
• arrossamento della pelle, eruzione cutanea, prurito, desquamazione;
• nausea, vomito, diarrea;
• mal di testa.

Maggiori informazioni sui sintomi delle malattie allergiche sono disponibili nelle seguenti pagine del sito:

In cosa consiste un test allergologico?

Dopo aver raccolto un'anamnesi, indirizza il paziente agli studi necessari.

Nella lotta contro le allergie, il ruolo della diagnostica è fondamentale, perché la determinazione dell'allergene che ha causato la reazione patologica del sistema immunitario è una garanzia che il trattamento porterà i risultati desiderati.

Possibilmente in due modi:

• test cutanei;
• test di laboratorio.

Test cutanei

La pelle sensibile all'interno dell'avambraccio viene grattata con uno strumento monouso (test di scarificazione) o vengono praticate punture superficiali (prick test). Successivamente, viene esaminata la reazione dell'area danneggiata agli allergeni più comuni, che vengono applicati mediante fleboclisi. Arrossamento, gonfiore o altra risposta cutanea visibile indicano un'allergia a una particolare sostanza.

Importante! I test cutanei vengono eseguiti durante il periodo di remissione della malattia al fine di evitare la distorsione dei risultati.

A volte i test cutanei non sono indicativi o falsi positivi, ad esempio un paziente ha una maggiore sensibilità dei capillari cutanei all'irritazione meccanica o un'allergia ai componenti conservanti di una soluzione con allergeni.

Ricerca di laboratorio

Questi test esaminano il siero del sangue o il sangue intero.

Definizione di lgE specifico per allergia:

• RAST (test radioallergosorbente). Con il suo aiuto viene stabilita la presenza di anticorpi di diverse classi: IgE, IgM, IgG.
• ELISA (saggio immunoenzimatico) consente inoltre di determinare la presenza e l'attività delle immunoglobuline E, G, M.
• RPHA, emoagglutinazione passiva.
• RTML, inibizione del movimento dei leucociti.

Diagnostica allergologica nella clinica "MedicCity"

Nella nostra clinica puoi passare attraverso tutti i metodi diagnostici più moderni.

Visita allergologica:

• IgE totali ed ECP;
• IgE totali ed ECP;
• Immunoglobulina E;
• Proteina cationica eosinofila;
• Esame microscopico per eosinofili.

Allergeni occupazionali, determinazione delle IgE specifiche:

• lattice;
• Formaldeide/formalina.

Definizione di IgG specifiche:

• Screening degli allergeni inalanti, determinazione delle IgE specifiche;
• Screening degli allergeni domestici - polvere domestica (D. pteronyssimus, D. farinae, scarafaggio);
• Screening degli allergeni della piuma del letto (piuma d'oca, piuma di pollo, piuma d'anatra, piuma di tacchino);
• Screening allergeni microfungini (Aspergillus fumigatus, Alternaria tenuis, Cladosporium herbarum, Penicillium notatum, Candida albicans);
• Screening degli allergeni della miscela di piume di uccelli (piuma di pappagallino ondulato / Melopsittacus undulates, piuma di pappagallo / Psittacidae spp., piuma di canarino / Serinus canaries);
• Screening per allergeni delle erbe n. 1 (squadra di ricci, festuca dei prati, segale perenne, fleolo, bluegrass dei prati);
• Screening degli allergeni dell'erba n. 2 (dito di maiale, pula, timoteo di prato, bluegrass di prato, grano saraceno evidente, sorgo);
• Screening per gli allergeni delle erbe n. 3 (spighetta appuntita, pula, fleolo, segale da semina, olivello spinoso);
• Screening per allergeni delle erbe n. 4 (spighetta appuntita, pula, canna comune, segale da semina, olivello spinoso);
• Screening degli allergeni vegetali (ambrosia, assenzio, lenticchie, tarassaco, verga d'oro);
• Screening allergeni di alberi a fioritura precoce (ontano grigio, nocciolo, olmo, salice, pioppo);
• Screening allergeni per alberi a fioritura tardiva (acero frassino, betulla verrucosa, quercia, faggio latifoglie, noce)

Screening per allergeni alimentari, determinazione delle IgE specifiche

• Frutta (banana, arancia, mela, pesca);
• Frutta a guscio (arachidi, noci americane, nocciole, mandorle, cocco);
• Pesce (merluzzo, gamberi, cozze blu, tonno, salmone);
• Verdure (pomodoro, spinaci, cavolo, peperoncino);
• Carne (maiale, manzo, pollo, agnello);
• Pannello alimentare per bambini n. 1 (albume d'uovo, latte vaccino, grano, merluzzo, arachidi, soia);
• Pannello alimentare per bambini n. 2 (merluzzo, grano, soia, nocciole).

STUDI ALLERGOLOGICI

Allergia questa è una forma patologica di reattività immunogenica del corpo, in cui vi è un aumento della sensibilità del corpo all'esposizione ripetuta agli allergeni.

Allergeni sono sostanze che, al primo ingresso nell'organismo, provocano la formazione di anticorpi della classe IgE e, alla successiva somministrazione, la degranulazione dei mastociti sensibilizzati dagli anticorpi IgE. In effetti, gli allergeni sono un tipo di antigeni. Tipicamente, gli allergeni sono polipeptidi o proteine ​​con un peso molecolare di 5-15 kDa e possono avere una grande varietà di strutture: sono note più di 120 famiglie proteiche a cui possono appartenere gli allergeni. La manifestazione dell'allergenicità è facilitata da: la presenza di attività proteasica (ad esempio, negli allergeni degli acari della polvere domestica), la capacità di interagire con i lipidi (ad esempio, negli antigeni alimentari di origine vegetale e animale) e vari altri ligandi, la capacità per penetrare le barriere tissutali e fornire reticolazione delle molecole di IgE associate ai recettori dei mastociti, somministrazione a basse dosi, ingresso nel corpo attraverso le membrane mucose, ecc.

La sensibilizzazione ad un allergene può avvenire sia attraverso il tratto gastrointestinale che attraverso il tratto respiratorio quando l'allergene viene inalato. Allo stesso tempo, gli allergeni inalanti (principalmente polline) provocano la formazione di IgE, che reagiscono in modo incrociato con proteine ​​simili negli alimenti. Questo è il motivo dello sviluppo di reazioni allergiche incrociate, mentre i sintomi clinici sono determinati dalla stabilità degli allergeni alimentari a reazione incrociata. Reazione incrociata - una reazione allergica che si verifica a causa dell'ipersensibilità agli allergeni simili nella struttura. La somiglianza degli epitopi è alla base della reattività crociata: diversi allergeni possono condividere epitopi comuni che sono simili come molecole con una sequenza amminoacidica simile.

La predisposizione ereditaria alle allergie si riflette nel termine "atopia"- predisposizione geneticamente mediata a reazioni di tipo allergico. Manifestazioni atopiche - una tendenza individuale o familiare del corpo a produrre anticorpi IgE in risposta a un piccolo numero di allergeni, che si manifesta più spesso con sintomi tipici di asma, rinocongiuntivite o eczema / dermatite. Il fenotipo allergico si manifesta in modo diverso nei diversi periodi della vita. Quindi, l'allergia alimentare gioca un ruolo dominante nei primi anni di vita. Le manifestazioni cliniche sono principalmente rappresentate da dermatite atopica e sintomi gastrointestinali. Poiché la frequenza delle allergie alimentari aumenta con l'età, l'importanza degli allergeni inalati aumenta in modo significativo con l'instaurarsi di sintomi dal tratto respiratorio superiore e inferiore. Il termine atopia descrive questa predisposizione clinica e non dovrebbe essere usato per descrivere malattie. Una delle sue manifestazioni è l'assenza di una stretta connessione tra la tendenza a un tipo di risposta allergica e un tipo specifico di allergene. A questo proposito, si sviluppa una tipica manifestazione della progressione dei processi allergici: un'espansione dello spettro di allergeni che causano reazioni patologiche.

I processi allergici sono costituiti da due fasi: sensibilizzazione e manifestazioni di reazioni allergiche. Entrambe le fasi sono innescate dall'ingresso di allergeni nel corpo. Con lo sviluppo della sensibilizzazione, non ci sono manifestazioni di allergia.

Esistono 4 tipi di reazioni allergiche:

1° tipo - reazione di ipersensibilità di tipo immediato (tipo anafilattico, atopico). È causato dal rilascio di sostanze attive dai mastociti sensibilizzati dagli anticorpi IgE quando si legano all'allergene. Si sviluppa con la formazione di anticorpi appartenenti alla classe IgE e IgG4. Sono fissati su mastociti e basofili. Quando le reagine sono combinate con un allergene, i mediatori vengono rilasciati da queste cellule: istamina, eparina, serotonina, fattore di attivazione piastrinica, prostaglandine, leucotrieni e altri che determinano la clinica di una reazione allergica immediata. Dopo il contatto con uno specifico allergene, le manifestazioni cliniche della reazione si manifestano dopo 15-20 minuti. Le manifestazioni cliniche delle reazioni di tipo 1 includono: shock anafilattico, orticaria, edema di Quincke, asma bronchiale, rinite allergica, congiuntivite, cibo, insetti, allergia al lattice, dermatite atopica (allergeni non infettivi, cibo, sostanze medicinali).

2° tipo -ipersensibilità a causa dell'effetto citotossico degli anticorpi che coinvolgono le cellule del complemento o effettrici. Il tipo è caratterizzato dal fatto che gli anticorpi si formano contro le cellule dei tessuti e sono rappresentati da IgG e IgM. Questo tipo di reazione è causato solo da anticorpi in grado di attivare il complemento. Gli anticorpi si legano alle cellule del corpo mutate, il che porta a una reazione di attivazione del complemento, che causa anche danni e distruzione delle cellule, seguita dalla fagocitosi e dalla loro rimozione. Il verificarsi di reazioni secondo il tipo citotossico provoca lo sviluppo di emopatia (anemia emolitica, leucopenia, trombocitopenia, agranulocitosi, pancitopenia) causata da sostanze medicinali, chimiche, organiche.

3° tipo - reazione immunocomplessa (danno tissutale da immunocomplessi - tipo Arthus, tipo immunocomplesso). Si verifica a seguito della formazione di immunocomplessi circolanti, che includono IgG e IgM. Gli anticorpi di questa classe sono chiamati precipitanti, poiché formano un precipitato quando combinati con un antigene. Questo tipo di reazione sta portando allo sviluppo della malattia da siero, alveolite allergica, eczema, allergie a farmaci e alimenti, in una serie di malattie autoallergiche (LES, artrite reumatoide, ecc.). A causa dell'azione pro-infiammatoria degli immunocomplessi solubili.

4° tipo - reazione di ipersensibilità di tipo ritardato (reazione allergica di tipo ritardato, ipersensibilità cellulare). Associato all'attività dei linfociti T pro-infiammatori e dei macrofagi da essi attivati, nonché delle citochine secrete da queste cellule. In questo tipo di reazione, il ruolo di un anticorpo è svolto dai linfociti T sensibilizzati, che hanno recettori sulle loro membrane che possono interagire in modo specifico con gli antigeni sensibilizzanti. Quando un linfocita è combinato con un allergene, vengono rilasciati i mediatori dell'immunità cellulare - le linfochine. Causano l'accumulo di macrofagi e altri linfociti, con conseguente infiammazione. Una delle funzioni dei mediatori è il loro coinvolgimento nel processo di distruzione degli antigeni (microrganismi o cellule estranee) a cui i linfociti sono sensibilizzati. Le reazioni di tipo ritardato si sviluppano in un organismo sensibilizzato 24-48 ore dopo il contatto con l'allergene. Il tipo cellulare di reazione è alla base dello sviluppo di infezioni virali e batteriche (tubercolosi, sifilide, lebbra, brucellosi, tularemia), alcune forme di asma bronchiale infettivo-allergico, rinite, trapianto e immunità antitumorale, nonché contatto, fotoallergico, eritemo- dermatite vescicolare, vasculite emorragica, allergia al lattice.

Classificazione degli allergeni:
1. Gli endoallergeni sono allergeni che si formano all'interno del corpo (cellule danneggiate da infezioni, influenze chimiche e fisiche).
2. Gli esoallergeni sono sostanze che agiscono sul corpo dall'esterno:

• allergeni infettivi: allergeni batterici, virali, fungini, allergeni da elminti;
• allergeni non infettivi: pollini, alimenti, domestici, epidermici, insetti, medicinali, allergeni industriali.

Vie di penetrazione degli esoallergeni nell'organismo: percutanea, inalatoria, enterale, parenterale.

Allergeni da inalazione

Pollineè un allergene responsabile, a seconda del paese e della località, dell'insorgenza di un numero relativamente elevato di rinite intermittente, rinocongiuntivite e asma bronchiale. Le piante contenenti polline allergenico sono suddivise in: cereali, erbe, alberi. I cereali comprendono circa 9000 specie. Ci sono enormi differenze riguardo alla loro impollinazione nel mondo. In Europa, questo periodo copre i mesi di maggio-luglio. Cynodon dactylon, Lolium perenae, Sorghum halepense, Bromus inermis, Holcus lanata, Phleum pratense, Triticum sativum, Festuca elation sono le piante polliniche allergeniche più importanti del nostro Paese e della zona temperata europea. Il polline di graminacee è al secondo posto in termini di sensibilizzazione ai pollini nel nostro Paese. I casi più gravi di sensibilizzazione sono solitamente causati dal polline di ambrosia (Ambrosia artemisitolia, psilostachya, trifida). Di particolare importanza è il polline di Artemisia absinthium, Artemisia vulgaris (assenzio nero) e Crysantemum, che compaiono nel nostro Paese soprattutto in piena e fine estate. Gli alberi, dal punto di vista allergologico, sono accomunati nella famiglia Fagale dalle loro sottosezioni (ad esempio, Betulaceae, Fagaceae, Ulmaceae, Platunaceae, Oleaceae, ecc.). Sebbene il polline degli alberi sia meno allergenico, la sensibilizzazione può essere significativa in alcune aree.

controversia funghi allergenici, che si trovano nell'atmosfera, sono distribuiti in tutto il globo, ma la prevalenza delle specie varia a seconda del continente o della regione, e soprattutto del periodo dell'anno in cui è stato effettuato lo studio, sapendo che la frequenza dei casi si riduce a quasi zero durante i mesi invernali. Nel nostro Paese il fungo più diffuso è il Cladosporium, che, essendo leggermente allergenico, come Penicillium spp. e Alternaria spp raramente portano a sensibilizzazione respiratoria, mentre Aspergillus spp. è considerato uno degli agenti più significativi nel verificarsi di reazioni allergiche respiratorie.

polvere domesticaè considerato in molti paesi il principale allergene sensibilizzante delle vie respiratorie, sia nelle riniti persistenti che nell'asma bronchiale. È anche coinvolto come agente eziopatologico in alcune dermatiti allergiche. La polvere in sé non è un allergene. È una miscela di componenti potenzialmente allergenici. La sua composizione è specifica non solo per una determinata area, ma anche per ogni casa. Zecche, peli ed epidermide di animali, resti di insetti e funghi, nonché resti di varie piante determinano, nell'ordine suddetto, la diversità della composizione allergenica della polvere domestica. L'allergene principale nella polvere domestica è l'acaro Dermatophagoides pteronyssinus. Successivamente è stato scoperto anche l'acaro Dermatophagoides farinae. Le zecche si trovano nello strato corneo della pelle umana. Un grammo di polvere domestica può contenere centinaia o addirittura migliaia di questi allergeni, soprattutto nei mesi di febbraio-marzo e settembre-novembre. La sensibilizzazione agli allergeni degli scarafaggi domestici nella composizione della polvere domestica o come allergene separato è stata osservata abbastanza spesso negli ultimi anni. In individui sensibilizzati, l'allergia può portare ad asma bronchiale o rinite persistente che coinvolge aeroallergeni, sebbene possano svilupparsi anche allergie alimentari. Gli scarafaggi appartengono alla famiglia Blatidae e sono onnipresenti. Tra questi, i più noti sono Blatella germanica, Blatta orientalis, Periplaneta Americana e Blatta Africana. Oltre ai componenti allergici della polvere domestica, che si formano dal pelo e dall'epidermide degli animali, a volte possono essere allergeni indipendenti e molto forti. I peli di gatto non sono solo un allergene forte, ma anche onnipresente. L'allergene "gatto" è una glicoproteina che si trova principalmente nella saliva, ma si trova anche in quantità significative sul pelo dell'animale. La sensibilizzazione del corpo umano si manifesta sotto forma di rinite persistente e asma bronchiale, raggiungendo talvolta una forma grave.

Pelliccia animale.È molto meno probabile che i peli di cane causino sensibilizzazione del corpo. Gli allergeni si trovano principalmente nello strato corneo dell'epidermide, ma si possono trovare anche nelle urine, nel siero o nella saliva dell'animale. Reazioni allergiche agli allergeni della cavia sono state descritte in persone che tengono le cavie come animali domestici. La fonte di allergeni sono la lana, l'urina, la saliva e l'epitelio dell'animale. Negli individui sensibilizzati, il più delle volte si nota lo sviluppo di asma, rinocongiuntivite e dermatite atopica. Sintomi clinici simili possono svilupparsi in risposta agli allergeni dell'epitelio dei criceti.

prodotti alimentari contengono proteine, carboidrati e lipidi. I principali antigeni alimentari sono glicoproteine ​​idrosolubili con un peso molecolare compreso tra 10 e 60 kDa. Queste proteine ​​sono resistenti all'attacco acido, alla proteolisi e alla digestione. Il processo di trattamento termico degli alimenti può modificare la struttura spaziale della proteina, riducendo così l'allergenicità del prodotto alimentare. Tuttavia, molti alimenti hanno proteine ​​termostabili che non vengono distrutte dal trattamento termico. Si ritiene che gli allergeni di latte, uova, pesce, frutta a guscio siano termostabili, gli allergeni di soia, sedano, cereali siano parzialmente termostabili, gli allergeni di frutta e verdura siano termolabili. Verdure, frutta, noci sono gli allergeni più importanti nelle allergie alimentari. Inoltre, questi prodotti alimentari contengono proteine ​​che hanno determinanti molecolari omologhi con allergeni aerogenici. Si ritiene che a partire dai 4-6 anni circa la sensibilizzazione a frutta e verdura avvenga principalmente per via non enterale. Di norma, i pazienti con allergie alimentari hanno precedentemente una sensibilizzazione respiratoria (con vari gradi di gravità dei sintomi clinici). Questa sensibilizzazione agli allergeni respiratori può compromettere la tolleranza alimentare.

Gli allergeni più comuni per i bambini sono: latte vaccino, uova, noci, soia, grano, pesce; e per gli adulti: frutta e verdura, noci, pesce, frutti di mare, spezie.

Latte di mucca contiene più di 25 diverse proteine ​​che possono agire come antigeni completi per l'uomo, ma solo 4-5 di esse hanno forti proprietà antigeniche. Per lo sviluppo di allergie alimentari, di particolare importanza sono: beta-lattoglobulina (la cui sensibilità è determinata nel 60-70% dei pazienti sensibili alle proteine ​​​​del latte vaccino), caseina (60%), alfa-lattoalbumina (50%), bovino albumina sierica (43-50%) e lattoferrina (35%). Le proteine ​​​​del latte vaccino differiscono l'una dall'altra per la stabilità termica. Il latte contiene una grande quantità di allergeni termostabili e quindi il trattamento termico del latte non consente di includerlo nella dieta dei pazienti con sensibilizzazione alle proteine ​​​​del latte vaccino. Le reazioni allergiche al latte vaccino possono svilupparsi a una o più proteine ​​attraverso diversi meccanismi immunologici. Attualmente sono stati dimostrati i tipi I, II, IV di reazioni allergiche alle proteine ​​​​del latte vaccino.

Allergia a carneè relativamente raro, poiché il potenziale allergenico delle proteine ​​viene spesso perso durante il trattamento termico del prodotto. Le reazioni allergiche alla carne sono spesso causate da reazioni crociate.

Uovo contiene almeno 20 proteine ​​diverse, ma solo 4 o 5 di esse sono allergeni. L'albume è più allergenico del tuorlo d'uovo. Dato che il tuorlo, di norma, contiene componenti della proteina dell'uovo di gallina, le reazioni allergiche potrebbero non essere associate al tuorlo, ma all'ovomucoide, all'ovoalbumina, all'ovomucina e all'ovotransferina contenute nella proteina dell'uovo di gallina.

A cereali usati dall'uomo per il cibo includono grano, segale, orzo, avena. La farina di cereali è composta da glutine, albumine, globuline e amido. Per le colture di grano, i principali antigeni sono albumine e globuline. Si ritiene che l'asma sia causato dalle albumine e le allergie alimentari dalle globuline. Passando attraverso lo stomaco, le proteine ​​dei cereali sono esposte alla pepsina e alla tripsina nel duodeno. Dal glutine "digerito" sono state ottenute tre frazioni, A, B e C. Le frazioni B e C sono tossiche per la mucosa dell'intestino tenue. Le reazioni incrociate tra cereali e polline di graminacee sono abbastanza comuni. Inoltre, è con le reazioni allergiche ai cereali che si può associare l'intolleranza alle bevande alcoliche preparate con i cereali.

Glutine, una proteina elastica del frumento, della segale e dell'orzo, spesso utilizzata nella produzione di biscotti, dolci e pasta, riveste la massima importanza nella patogenesi della malattia celiaca. La celiachia (intolleranza al glutine), mediata dalle immunoglobuline IgA e IgG, va differenziata dall'allergia alle proteine ​​dei cereali (incluso il glutine), mediata dalle immunoglobuline IgE e che si sviluppa come reazione di tipo immediato (caratterizzata da manifestazioni a carico dell'apparato cutaneo, digerente e respiratorio ).

noccioline. L'allergia alle noci è principalmente una sensibilizzazione permanente con reazioni gravi e pericolose per la vita che si verificano anche quando vengono mangiate accidentalmente in piccole quantità.

Pescareè uno dei principali allergeni che possono provocare reazioni allergiche di tipo immediato. I pesci possono causare allergie respiratorie, alimentari, da contatto e persino reazioni anafilattiche. Le reazioni allergiche al pesce possono svilupparsi in presenza di quantità anche trascurabili di antigene nel cibo, la sensibilità al pesce rimane per tutta la vita.

Frutta e verdura. Le cause più comuni di allergie alimentari sono frutta e verdura. Un aumento della frequenza delle allergie alimentari a questi prodotti è associato allo sviluppo di reazioni allergiche incrociate. Fino all'85% dei pazienti con allergia ai pollini presenta un'allergia alimentare incrociata a frutta e verdura. Gli allergeni di frutta e verdura sono nella maggior parte dei casi termolabili, poiché molti di essi perdono le loro proprietà allergeniche durante il trattamento termico. Tuttavia, ci sono anche allergeni termostabili negli alimenti vegetali. Ad esempio, si trovano in carote, pomodori, sedano. Durante la cottura, tali allergeni si trasformano in un decotto, quindi l'uso del decotto vegetale non può essere sicuro per il paziente. Gli antigeni alimentari contengono epitopi che sono presenti nella struttura della profilina e sono comuni con gli epitopi di alcuni tipi di polline (alberi, erbe, cereali), quindi le reazioni allergiche a frutta e verdura, sebbene possano verificarsi ogni volta che questi alimenti vengono consumati, sono molto più grave durante la stagione della fioritura delle rispettive piante.

Allergizzazione da punture di insetti non è comune, ma può avere conseguenze molto gravi, anche la morte. I principali insetti di questa categoria sono le api (Apis mellifera) e le vespe (Vespula spp.). Tutte le proteine ​​contenute nel veleno provocano allergia, in particolare la ialuronidasi e la fosfolipasi A. Dopo l'inoculazione del veleno, vi è uno sviluppo relativamente rapido di reazioni locali con eritema, grave edema e, in alcuni casi, shock anafilattico. A volte si osservano sindromi cliniche come rinite e asma bronchiale.

Di solito effetti collaterali reazioni ai farmaci suddivisi in reazioni allergiche e non allergiche. Il primo si verifica a causa dell'innesco di meccanismi immunologici, di cui il più comune è la reazione di tipo I, sono possibili anche IgE dipendenti e meccanismi di tipo II, III e IV. Nell'ipersensibilità di tipo I del meccanismo IgE-dipendente, i principali allergeni sono: penicillina e suoi derivati, nitrofurantoina, sieri estranei (comprese le gammaglobuline), ormoni (ACTH, TSH, insulina) e vaccini (antitetanico, antinfluenzale e altri contenenti componenti di uova). Gli antibiotici beta-lattamici (penicilline e cefalosporine) sono la causa più comune di reazioni allergiche ai farmaci. La sensibilizzazione può verificarsi durante le procedure terapeutiche (la somministrazione parenterale del farmaco è associata a un rischio maggiore rispetto alla somministrazione orale), nonché dal consumo di alimenti derivati ​​da animali trattati con penicillina o dall'esposizione professionale a determinati composti chimici. Il quadro delle manifestazioni allergiche, IgE-dipendenti, comprende orticaria, edema di Quincke e shock anafilattico. La presenza di gruppi beta-lattamici nella molecola delle penicilline e delle cefalosporine contribuisce al verificarsi di reazioni di sensibilizzazione incrociata tra questi antibiotici. L'incidenza della loro comparsa, tuttavia, è bassa, soprattutto per le cefalosporine di seconda e terza generazione. La penicillina ei suoi derivati ​​semisintetici si comportano come apteni, che diventano allergeni solo quando si combinano con proteine ​​plasmatiche o tissutali per formare un complesso proteina-penicillina o un metabolita proteina-penicillina che stimola la risposta immunitaria. Si ritiene che esistano due tipi di determinanti allergenici nella penicillina, vale a dire: i principali determinanti allergenici (80-85% del numero totale di metaboliti) sono le benzilpenicilline; determinanti allergenici minori costituiti da penicillina cristallina, benzilpenicilline e alfa-benzil penicillamina. Le reazioni allergiche del tipo immediato sono effettuate per mezzo di anticorpi IgE formati al principale, ai determinanti secondari e ad entrambi i determinanti allo stesso tempo. Va notato che i test allergologici in vitro rilevano solo gli anticorpi IgE ai principali determinanti.

Allergeni industriali

Isocianati(toluene diisocianato TDI, difenilmetilene MDI ed esametilene HDI), che trovano largo impiego nella produzione di materie plastiche, adesivi e vernici, poliuretani, collanti, elastomeri, isolamento di cavi elettrici, e sono irritanti per gli occhi e le vie respiratorie. Sono state descritte molte malattie respiratorie che si basano su reazioni di ipersensibilità immediate o ritardate: rinite, bronchite acuta, asma, bronchite cronica, broncopolmonite e polmonite da ipersensibilità. Il decorso asintomatico della malattia è caratterizzato da livelli molto bassi o non rilevabili di anticorpi IgE specifici. La determinazione degli anticorpi IgE specifici consente quindi il monitoraggio dell'esposizione professionale agli isocianati, con un incremento del livello direttamente correlato alle conseguenze dell'esposizione a fattori nocivi. La sensibilità di rilevamento di anticorpi IgE specifici è massima quando i campioni di sangue vengono prelevati entro un mese dall'ultima esposizione a un fattore dannoso.

Anidride ftalica - un composto largamente utilizzato nell'industria come materia prima per la produzione di plastiche, vernici, resine poliestere. Tra le reazioni IgE-dipendenti si distingue l'asma con la rinite che la precede. La determinazione degli anticorpi IgE specifici viene utilizzata con successo nel monitoraggio dell'esposizione ad inquinanti occupazionali.

Formaldeide utilizzato nell'industria tessile, nella produzione di carta, gomma, adesivi, cosmetici. Le persone a contatto con questi materiali possono produrre IgE specifiche responsabili dei sintomi dell'asma bronchiale.

Cloramina T -è un composto micromolecolare che viene utilizzato nella sterilizzazione come disinfettante antisettico e reagente chimico in ospedali, laboratori e nell'industria alimentare. La cloramina è coinvolta nella comparsa di asma professionale nelle persone esposte a fattori nocivi. Sono state stabilite anche altre reazioni IgE-mediate: rinite e orticaria.

Ossido di etilene(ossido di etilene) è comunemente usato per sterilizzare strumenti medici sensibili alla temperatura. I prodotti sterilizzati possono contenere residui di ossido di etilene, causando reazioni allergiche e anafilassi in pazienti con emodialisi cronica, mediata da anticorpi IgE specifici, che vengono rilevati nel siero del sangue.

Enzima alfa amilasi, che è coinvolto nella scomposizione dell'amido, è un additivo alimentare ampiamente utilizzato nei panifici, è di origine fungina (Aspergillus niger o Orizae). Questo enzima, insieme ai componenti del grano, è responsabile della sensibilizzazione e delle reazioni IgE-mediate che si registrano in mugnai, fornai e altre professioni che comportano il contatto con la farina. L'asma dei fornai è causata dalla circolazione di anticorpi IgE specifici per l'alfa-amilasi nel sangue. Sitophilus granarius è un insetto che immagazzina il grano che è stato riconosciuto come una delle cause dell '"asma del mugnaio" e del "polmone del contadino". Alcuni individui esposti a un fattore dannoso possono avere anticorpi IgE specifici.

Lattice -È una gomma naturale che si ottiene dall'albero Hevea brasiliensis. Viene utilizzato nella produzione dei seguenti prodotti: guanti chirurgici, cateteri, preservativi, palloni, attrezzature sportive. La sensibilizzazione può avvenire sia per via respiratoria per inalazione della polvere dei guanti in lattice, sia per via cutanea per contatto con gli appositi prodotti. Manifestazioni di allergia al lattice: angioedema, orticaria, eczema, rinite, asma, sindrome del frutto del lattice e talvolta anafilassi. Il gruppo ad alto rischio per l'allergia al lattice comprende, oltre al personale medico, i lavoratori dell'industria della gomma, i bambini con spina bifida o patologia urologica, i pazienti che hanno subito diversi interventi chirurgici e sono stati a lungo esposti al lattice. TabaccoÈ una pianta della famiglia della belladonna. L'allergia alle foglie di tabacco mediata da anticorpi IgE è stata descritta in agricoltori e lavoratori dell'industria del tabacco; le manifestazioni cliniche includono orticaria e rinocongiuntivite. È stata segnalata anche la presenza di epitopi antigenici comuni tra tabacco e polline di assenzio.

Diagnostica di laboratorio delle malattie allergiche

I compiti principali della diagnostica di laboratorio delle malattie allergiche sono: determinare il tipo di reazione allergica, stabilire la sensibilizzazione agli allergeni (allergodiagnostica specifica), identificare la natura e il grado dei disturbi immunitari (immunodiagnostica), caratterizzare i cambiamenti patogenetici tipici di una determinata malattia allergica (clinica diagnostica di laboratorio).

I test di laboratorio immunologici possono essere suddivisi in due grandi gruppi:

• non specifico (volto a identificare cambiamenti generali nel sistema immunitario nelle malattie allergiche);
• specifico (rilevamento di anticorpi e cellule coinvolte nella fase immunologica della reazione allergica).

Utilizzo metodi specifici la diagnostica di laboratorio delle malattie allergiche consente:

• confermare la presenza di sensibilizzazione;
• rivelare una sensibilizzazione latente (subclinica);
• distinguere tra risultati di test cutanei positivi/falsi positivi o negativi/falsi negativi;
• determinare i possibili fattori eziologici dell'allergia in presenza di controindicazioni per test cutanei con allergeni.

Va tenuto presente che l'allergodiagnostica specifica caratterizza solo i disturbi immunitari e non la reazione dell'intero organismo, quindi i risultati ottenuti non possono servire come unica prova che questo particolare allergene è la causa eziologica di una malattia allergica. L'assunzione dei principali meccanismi patogenetici determina la scelta di metodi adeguati per la diagnosi di laboratorio delle malattie allergiche.

Metodi di diagnostica di laboratorio specifica

Saggio immunochemiluminescente (ICHL). — Si tratta di studi di laboratorio basati sulle reazioni immunitarie di un antigene con un anticorpo. Il metodo ha un'elevata sensibilità e specificità, che è del 90%.

Analisi immunocromatografica (ICA) — un metodo immunochimico di analisi basato sul principio della cromatografia su strato sottile e comprendente una reazione tra un antigene e il suo corrispondente anticorpo in materiali biologici. Viene eseguito utilizzando speciali strisce reattive, pannelli o cassette reattive.

Metodo immunoblotting sviluppato sulla base di ELISA e viene utilizzato per rilevare lo spettro di anticorpi contro miscele antigeniche. Tecnologia ImmunoCAP determinazione delle IgE allergene-specifiche: il metodo si basa su un immunodosaggio enzimatico completamente automatizzato per la determinazione delle IgE allergene-specifiche con registrazione dei risultati mediante metodo chemiluminescente. Questa tecnologia consente di rilevare concentrazioni estremamente basse di IgE e altri indicatori in una quantità estremamente ridotta di sangue di un paziente. Ciò garantisce un'elevata precisione degli studi, la loro riproducibilità e velocità di esecuzione.

Determinazione degli anticorpi IgE specifici
Quantificazione degli anticorpi IgE circolanti verso allergeni specifici consente:

• condurre una valutazione obiettiva della sensibilizzazione a un allergene specifico;
• identificare gli allergeni che potrebbero essere responsabili dell'infiammazione e dei sintomi allergici sperimentati dal paziente;
• prevedere lo sviluppo di reazioni allergiche in futuro (la presenza di anticorpi IgE specifici contro gli allergeni alimentari nel primo anno di vita è associata ad un aumentato rischio di sensibilizzazione agli allergeni inalati e allo sviluppo di una malattia allergica in età avanzata (7- 10 anni));
• monitorare l'immunoterapia.

Principali vantaggi dei test allergologici in vitro:
UN) sicurezza per il paziente (non richiedono l'introduzione di una quantità aggiuntiva di allergene nel corpo del paziente);
B) può essere effettuato in tutte le fasce di età;
V) la possibilità di utilizzo in qualsiasi periodo della malattia;
G) il trattamento antiallergico farmacologico non influisce sul risultato e non è necessario interromperlo;
e) la possibilità di condurre un numero illimitato di test allergologici alla volta;
e) i risultati dei test allergologici sono emessi in forma quantitativa o semiquantitativa, che caratterizza il grado di sensibilizzazione del corpo da parte di questo allergene.

Caratteristiche interpretative e limiti diagnostici delle IgE specifiche:
UN) il rilevamento di IgE allergene-specifiche verso qualsiasi allergene o antigene non dimostra che questo particolare allergene sia responsabile dei sintomi clinici; la conclusione finale e l'interpretazione dei dati di laboratorio dovrebbero essere effettuate solo dopo il confronto con il quadro clinico e i dati di una storia allergica dettagliata;
B) il titolo di IgE specifico non è sempre correlato alla gravità dei sintomi di una malattia allergica;
V) la valutazione del significato di un aumento della concentrazione di IgE sieriche dipende dal metodo di ricerca, dal tipo di allergene, dall'età del paziente e dalla natura della malattia;
G) l'assenza di IgE specifiche nel siero del sangue periferico non esclude la possibilità della partecipazione di un meccanismo IgE-dipendente, poiché la sintesi locale di IgE e la sensibilizzazione dei mastociti possono verificarsi in assenza di IgE specifiche nel flusso sanguigno (ad esempio, rinite allergica );
e) gli anticorpi di altre classi specifiche per questo allergene, in particolare la classe IgG (IgG4), possono causare risultati falsi negativi;
e) concentrazioni eccezionalmente elevate di IgE totali, ad esempio, in singoli pazienti con dermatite atopica, possono, a causa del legame non specifico con l'allergene, dare risultati falsi positivi;
E) risultati identici per diversi allergeni non implicano lo stesso significato clinico, poiché la capacità di legarsi alle IgE in diversi allergeni può essere diversa.

Lo studio è inappropriato:

• nelle malattie atopiche in caso di risultati soddisfacenti di terapia specifica secondo test cutanei;
• nei pazienti con meccanismo di reazione allergica non IgE-dipendente.

Indicatore di reazione incrociata (CCD- cross-reattivo determinanti dei carboidrati). Molti allergeni sono glicoproteine ​​e possono contenere determinate strutture antigeniche, in particolare strutture di carboidrati, verso le quali alcuni pazienti possono sviluppare anticorpi. La componente CCD (CCD - cross-reactive carboidrato determinants) è presente in molti allergeni di origine vegetale o animale. Il marcatore di reazione incrociata determina il risultato della reazione con le strutture proteiche dell'antigene (rilevamento di IgE specifiche al CCD), fornendo così informazioni aggiuntive e assistendo nell'interpretazione dei risultati del test quando non sono d'accordo con i sintomi clinici, i risultati del test cutaneo, o se una percentuale significativa di test per la presenza di IgE specifiche è positiva.

Antigeni ricombinanti - gli antigeni proteici sintetizzati artificialmente sono analoghi di singoli componenti (proteine) di antigeni naturali, ottenuti mediante ingegneria genetica, originariamente isolati da un estratto allergenico. Ogni allergene è un insieme di antigeni - componenti proteici che causano l'induzione di anticorpi IgE e sintomi allergici. La tecnologia ricombinante consente di ottenere allergeni identici a quelli presenti in natura, mentre non vengono in alcun modo influenzati durante la loro estrazione, come avviene con i metodi di estrazione convenzionali. Assegna maggiore e minore componenti allergeniche. I principali componenti allergenici si trovano in un certo gruppo di allergeni, che causa allergia crociata. Minore - caratteristica di un particolare allergene. Caratteristiche di interpretazione: i test per il rilevamento delle IgE agli antigeni ricombinanti consentono al medico di fornire ulteriori informazioni sul chiarimento delle cause di una reazione allergica al fine di determinare la tattica della gestione del paziente e la nomina dell'immunoterapia specifica per allergeni. Se le reazioni allergiche del paziente sono dovute alla sensibilizzazione al principale componente allergenico, allora con un alto grado di probabilità è possibile prevedere un elevato effetto terapeutico da ASIT, se il paziente è sensibile al componente minore, allora l'immunoterapia non sarà efficace abbastanza, e potrebbe svilupparsi anche una nuova sensibilizzazione. In presenza di IgE per antigeni ricombinanti e loro assenza nella determinazione delle IgE specifiche per lo stesso allergene, si può presumere che vi sia una reazione crociata, in caso di entrambi i risultati positivi, il test consente di confermare la natura del reazione allergica a questo antigene e determinare la componente proteica specifica che provoca una reazione allergica, quando si riceve un risultato negativo per IgE per antigeni ricombinanti e positivo per IgE specifiche, si può presumere che la terapia specifica per allergene sarà inefficace, poiché una non- è possibile una reazione specifica.

Anticorpi specifici della classe IgG:

• si trova spesso nelle allergie alimentari, ma le IgG rilevabili non sono necessariamente reattive agli stessi componenti proteici degli anticorpi IgE;
• Gli anticorpi IgG contro l'allergene possono anche svolgere la funzione di anticorpi bloccanti, che riducono la gravità delle reazioni allergiche che si verificano con la partecipazione di IgE specifiche;
• Gli anticorpi IgG contro gli allergeni alimentari possono essere trovati in persone sane come prova dell'aumento del consumo di determinati alimenti senza esserne allergici.

Lo studio delle IgG agli allergeni alimentari viene solitamente effettuato in aggiunta allo studio delle IgE, che consente di creare un elenco di allergeni che devono essere presi in considerazione quando si formano ulteriori tattiche di gestione del paziente.

Specifica Anticorpi IgG4 possono partecipare a reazioni di ipersensibilità di tipo II (citotossico) e III (immunocomplesso) e possono anche agire come anticorpi bloccanti o reagenti. Il livello di IgG4 può essere uno dei criteri per l'efficacia dell'immunoterapia specifica per allergia. Quando si monitora il trattamento con un'allergia accertata, è necessario determinare il livello iniziale di IgG4 a questo allergene. Un aumento del contenuto è correlato a una diminuzione della sensibilità a un dato allergene. L'interpretazione dei risultati del test dovrebbe essere effettuata in combinazione con i dati clinici e anamnestici e i risultati di ulteriori metodi di ricerca.