Corinebatteri. difterite. Coltura per la difterite (Corynebacterium diphtheriae)

L'agente eziologico della difterite - Corynebacterium diphtheriae e un grande gruppo di microrganismi simili nelle proprietà morfologiche e biochimiche del genere Corynebacteria sono chiamati batteri corineformi O difteroidi. Sono rappresentati da bastoncini immobili gram-positivi, spesso con ispessimenti alle estremità, che ricordano una mazza (coryne - macis). I difteroidi sono ampiamente distribuiti nel suolo, nell'aria, nei prodotti alimentari (latte). Tra questi, si possono distinguere tre gruppi ecologici:

• - patogeni umani e animali;
• - patogeni delle piante;
• - corinebatteri non patogeni.

Molti tipi di difteroidi sono normali abitanti della pelle, delle mucose della faringe, del rinofaringe, degli occhi, delle vie respiratorie, dell'uretra e degli organi genitali.

Difterite.

La difterite è una malattia infettiva acuta prevalentemente dell'infanzia, che è caratterizzata da intossicazione organismo tossina difterica e caratteristico infiammazione fibrinosa (diphtheritic). nel luogo di localizzazione dell'agente patogeno (phther - film).

Proprietà morfologiche e tintorie. C. diphtheriae - sottili bastoncini polimorfici con estremità a forma di clava, spesso contenenti inclusioni di volutina, rilevate mediante colorazione con blu di metilene o Neisser. Con quest'ultimo i bastoncini sono di colore giallo paglierino, i granelli di volutina (polimetafosfato) sono di colore bruno scuro. Nelle culture, i bastoncini sono inclinati l'uno rispetto all'altro (caratteristiche di divisione), formando varie forme: dita allargate, V, Y, L, ecc. Hanno una microcapsula, così come la fimbria, che facilitano l'adesione all'epitelio delle mucose.

beni culturali. I batteri della radice della difterite non crescono su terreni semplici. Richiedono terreni con sangue o siero di sangue (Leffler, Roux media), sui quali si nota la crescita dopo 10-12 ore, durante le quali la microflora di accompagnamento (campioni contaminanti) non ha il tempo di svilupparsi completamente.

Il più ottimale tellurite medium e tellurite-McLeod chocolate agar. Elevate concentrazioni di tellurito di potassio in questi terreni inibiscono la crescita della flora estranea. Corynebacterium diphtheria riduce il tellurito a tellurio metallico, che conferisce alle loro colonie un colore grigio scuro o nero.

Questo patogeno produce biotipi - gravis, mitis, intermedius, differendo per morfologia, proprietà antigeniche e biochimiche, gravità delle malattie nell'uomo. Il tipo gravis provoca spesso focolai e un decorso più grave, è caratterizzato da grandi colonie con bordi frastagliati e striature radiali a forma di margherita (forma R). Il tipo mitis provoca malattie sporadiche prevalentemente lievi, forma piccole colonie lisce con bordi lisci (forme a S) su terreni densi. Il tipo intermedius occupa una posizione intermedia; su supporti densi, forma forme RS che hanno caratteristiche transitorie, ma anche più piccole. Su mezzi liquidi causare torbidità dei mezzi, formare un precipitato friabile.

proprietà biochimiche. Corynebacterium diphtheria fermenta glucosio, maltosio. Mancanza di attività riguardo saccarosio e urea un'importante caratteristica differenziale tra i difteroidi. Possedere cistenasi attività (clivare la cisteina) - Piso test.

Struttura antigenica. Assegna gli antigeni O e K. I componenti polisaccaridici degli antigeni O della parete cellulare hanno proprietà intergeneriche, causando reazioni incrociate aspecifiche con micobatteri, actinomiceti (nocardia).

Gli antigeni K di superficie sono proteine ​​capsulari specie-specifiche e immunogeniche. Ci sono 11 sierotipi. I sierotipi 1-5 e 7 appartengono alla biovar gravis. La sierotipizzazione delle colture viene eseguita in AR con sieri diagnostici ai corrispondenti sierotipi e siero agglutinante poligruppo.

Nella diagnosi sierologica nell'uomo, l'RPHA è più spesso utilizzato, che è più sensibile dell'AR. Attualmente viene utilizzato anche l'ELISA. Molti ceppi di Corynebacterium diphtheria (specialmente quelli non tossigeni) sono spontaneamente agglutinabili e poliagglutinabili.

fattori di patogenicità. I ceppi tossigeni dell'agente eziologico della difterite producono un forte esotossina(proteina immunogenica altamente tossica termolabile). I ceppi non tossigeni non causano malattie.

La tossina provoca il blocco irreversibile dell'allungamento della catena polipeptidica, cioè qualsiasi sintesi proteica. Principalmente sono colpiti alcuni sistemi: simpatico-surrenale, cuore e vasi sanguigni, nervi periferici. Ci sono disturbi strutturali e funzionali del miocardio, demielinizzazione delle fibre nervose, che portano alla paralisi e alla paresi.

Solo i ceppi lisogenici infettati da un batteriofago (beta-fago) che porta il gene tox, che codifica la struttura della tossina (cioè che portano i geni di un profago moderato nel loro cromosoma), mostrano la capacità di produrre tossina. La tipizzazione fagica viene utilizzata per differenziare i ceppi di Corynebacterium diphtheria.

Epidemiologia. Serbatoio - una persona (malata, convalescente, portatore di batteri). La principale via di trasmissione è aerea, la stagionalità è autunno-inverno. L'agente patogeno è ben conservato a basse temperature, allo stato secco (saliva, muco, polvere).

Caratteristiche cliniche e patogenetiche. L'agente eziologico nel sito di introduzione provoca un'infiammazione fibrinosa con la formazione di un film fibrinoso saldamente saldato ai tessuti. L'azione dell'esotossina (descritta nella sezione “Fattori di patogenicità”) è essenziale nella patologia provocata. Secondo la localizzazione, si distinguono la difterite dell'orofaringe (il più delle volte), le vie respiratorie, il naso e la localizzazione rara (occhi, organi genitali esterni, pelle, superficie della ferita). La difterite della faringe può causare groppa e asfissia.

Diagnostica di laboratorio. Il principale metodo diagnostico è batteriologico. Utilizzato per identificare pazienti, portatori di batteri, contatti. I tamponi sterili prelevano materiale per microscopia e colture: muco dalla gola e dal naso, pellicole dalle tonsille e altri luoghi sospetti per la presenza di lesioni difteriche.

L'agente eziologico viene isolato mediante inoculazione su terreni selettivi per tellurito e agar sangue. C.xerosis (una possibile causa di congiuntivite cronica) viene spesso rilevato sulla membrana mucosa dell'occhio, C.pseudodiphtheriticum (bacillo di Hofmann) nel rinofaringe e vengono rilevati anche altri difteroidi.

Per differenziare l'agente eziologico della difterite dai difteroidi, indicatori quali la capacità di ridurre il tellurito e formare colonie scure, il Pisu test, la fermentazione dei carboidrati (glucosio, maltosio, saccarosio) e dell'urea, la capacità di crescere in condizioni anaerobiche (tipiche dell'agente eziologico della difterite).

Un passaggio obbligatorio è determinare la tossicogenicità della coltura. I metodi più comuni sono i saggi biologici su cavie, la reazione di precipitazione dell'agar. ELISA con antitossina, sonde genetiche e PCR sono utilizzati anche per rilevare il frammento A del gene tox.

Trattamento. Vengono utilizzati siero difterico antitossico, antibiotici e farmaci sulfamidici.

Immunità post-infettiva- resistente, prevalentemente antitossico. Per determinare quantitativamente il livello di immunità antitossica, in precedenza veniva utilizzato il test Shik (iniezione intradermica di una tossina), ora - RPHA con un diagnostico eritrocitario ottenuto dalla sensibilizzazione degli eritrociti con tossoide difterico.

Prevenzione. Si basa sull'immunizzazione di massa della popolazione. Vengono utilizzati vari preparati contenenti tossoide difterico: DTP, ADS, ADS-M, AD e AD-M.

1. Corinebatteri

Il genere Corynebacterium comprende batteri con ispessimenti claviformi alle estremità: corinebatteri, patogeni per l'uomo e per gli animali, e difteroidi (corinebatteri non patogeni e opportunisti).

L'agente eziologico della difterite

La scoperta dell'agente eziologico della difterite è stata preceduta da approfonditi studi clinici, anatomopatologici, epidemiologici e sperimentali, che hanno ampiamente aperto la strada alla sua individuazione (Klebs E., 1883), all'isolamento in coltura pura (Leffler F., 1884), all'ottenimento una tossina (Ru E. e Yersen A., 1888), siero antitossico (Bering E., Kitazato, 1890, Ru E., 1894) e tossoide difterico (Ramon G., 1923).

Morfologia. Diphtheria corynebacteria - Corynebacterium diphtheriae (latino coguna macis, diphthera - pellicola, pelle) bastoncini dritti o leggermente ricurvi lunghi 1 8 µm e larghi 03 0,8 µm, polimorfici, si colorano meglio ai poli, sui quali sono presenti granuli metacromatici di volutina (grani di Babes) localizzato Ernst, polimetafosfati) Nei corynebacteria difterici si osservano ispessimenti claviformi alle estremità, contenenti grani di volutina, a volte compaiono forme ramificate e filamentose, oltre a formazioni corte, quasi coccoidi e simili a lieviti. Nei tratti, sono disposti a forma di V (ad angolo), assumendo la forma di dita aperte. Non formano spore, capsule e flagelli, gram-positivi.

Coltivazione. L'agente eziologico della difterite è un aerobio o anaerobio facoltativo, ben coltivato su terreni contenenti proteine ​​(siero coagulato, agar sangue, agar siero), nonché su brodo di zucchero. Sul mezzo di Roux (siero di cavallo coagulato) e sul mezzo di Leffler (3 parti di siero bovino + 1 parte di brodo di zucchero), i corinebatteri di difterite si sviluppano entro 16-18 ore, la loro crescita ricorda la pelle zigrinata, le colonie non si fondono tra loro.

I corinebatteri di difterite sono suddivisi in tre biovar gravis, mitis e intermedius in base alle proprietà culturali e biologiche, che differiscono l'una dall'altra in vari modi.

Corynebacteria biovar gravis su agar tellurito contenente sangue defibrinato e tellurito di potassio forma grandi colonie ruvide (a forma di R) a forma di rosetta di colore nero o grigio. Fermentano destrina, amido e glicogeno, formano una pellicola superficiale e un sedimento granulare nel brodo, sono generalmente altamente tossici e hanno proprietà invasive più pronunciate.

Corynebacterium biovar mitis cresce su agar tellurio formando colonie lucenti scure, lisce (a forma di S). Non fermentano l'amido e il glicogeno, fermentano la destrina in modo incoerente, provocano l'emolisi degli eritrociti di tutte le specie animali, nel brodo si nota una torbidità diffusa. Le colture di questo tipo, di regola, sono meno tossiche e invasive del Corynebacterium biovar gravis.

I Corynebacteria biovar intermedius occupano una posizione intermedia. Le loro colonie su agar tellurito sono piccole (forme RS), di colore nero, non fermentano amido e glicogeno, crescono in brodo con aspetto di torbidità e sedimento granulare.

proprietà enzimatiche. I corinebatteri di difterite (tutti e tre i biovar) non coagulano il latte, non decompongono l'urea, non rilasciano indolo, formano debolmente l'idrogeno solforato, riducono i nitrati in nitriti, così come il tellurito di potassio in solfuro di tellurito, a seguito del quale le colonie di difterite i corinebatteri su agar tellurito diventano neri o grigi.

I corinebatteri della difterite fermentano glucosio e maltosio, galattosio intermittente, amido, destrina, glicerina.

I batteri difterici fermentano la cisteina per formare idrogeno solforato e non decompongono l'urea, mentre i batteri difteroidi decompongono l'urea ma non fermentano la cisteina.

I diphtheria corynebacteria producono batteriocine (corynecins) che conferiscono loro alcuni vantaggi selettivi.

Formazione di tossine. I corinebatteri della difterite producono forti esotossine nelle colture in brodo (istotossina, dermonecrotossina, emolisina). La tossigenicità del Corynebacterium diphtheria è associata alla lisogenicità (la presenza di moderati fagi profagi nei ceppi tossigeni). Anche il classico ceppo di riferimento internazionale Park-Williams 8, produttore di esotossina, è lisogeno ed è in grado di produrre tossina da più di 85 anni. Determinanti genetici di tossigenicità (tox + -geni) sono localizzati nel genoma del profago integrato con il nucleoide di Corynebacterium diphtheria.

Come risultato della lisogenizzazione, i ceppi non tossigeni di C. diphtheriae (mitis biovar) vengono convertiti in ceppi tossigeni ( conversione tossicogena).

La tossina difterica è un polipeptide termostabile costituito da due frammenti, denominati A e B. Il frammento B è necessario per il trasporto del frammento A nella cellula, dove inibisce l'allungamento della catena polipeptidica sul ribosoma. La soppressione della sintesi proteica probabilmente fornisce entrambi gli effetti tossici della tossina difterica, necrotica e neutrotossica.

La tossina difterica è instabile. Viene facilmente distrutto sotto l'influenza della temperatura, della luce e dell'ossigeno atmosferico, ma è relativamente resistente all'azione degli ultrasuoni.

Dopo aver aggiunto alla tossina lo 0,3-0,4% di formalina e poi averla mantenuta a 38 - 40 °C per 3-4 settimane, si trasforma in tossoide difterico, che è più resistente agli attacchi fisici e chimici rispetto alla tossina originaria.

I ceppi tossigeni di difterite corinebatteri, insieme alla lisogenicità, sono caratterizzati da una pronunciata attività deidrogenasi e neuraminidasi, mentre i ceppi non tossigeni non possiedono tale attività.

Struttura antigenica. 11 sierotipi sono stati identificati nell'agente eziologico della difterite mediante reazione di agglutinazione.

Le tossine prodotte da vari ceppi dei biovar gravis e mitis non differiscono l'una dall'altra e sono completamente neutralizzate dall'antitossina difterica standard. Numerosi autori hanno stabilito la presenza di antigeni proteici di superficie termolabili specifici della variante (antigeni K) e antigeni polisaccaridici somatici termostabili specifici del gruppo in Corynebacterium diphtheria.

Tra Corynebacterium diphtheria ci sono 19 tipi di fagi, con l'aiuto dei quali vengono identificate le fonti di infezione; i tipi di fago vengono presi in considerazione anche quando si identificano le colture isolate.

resistenza. I corinebatteri della difterite sono relativamente resistenti agli effetti nocivi dei fattori ambientali. Sul siero piegato rimangono in vita fino a 1 anno, a temperatura ambiente fino a 2 mesi, sui giocattoli per bambini fino a diversi giorni. I corinebatteri si conservano per un tempo piuttosto lungo nei film dei pazienti con difterite, specialmente se i film non sono esposti alla luce. Dall'azione di una temperatura di 60 ° C e una soluzione all'1% di fenolo, i corinebatteri muoiono entro 10 minuti.

Patogenicità per gli animali. In condizioni naturali, i corinebatteri virulenti della difterite si trovano in cavalli, mucche, cani, infetti, probabilmente da pazienti umani e portatori. Tuttavia, gli animali domestici non svolgono un ruolo come fonti di infezione umana.

Tra gli animali da laboratorio, cavie e conigli sono i più sensibili. Quando vengono infettati da una coltura o da una tossina, sviluppano un quadro tipico di infezione tossica con formazione di infiammazione, edema e necrosi nel sito di iniezione. Gli organi interni sono iperemici, si osservano emorragie nelle ghiandole surrenali. Una dose di 0,06 microgrammi della tossina uccide una cavia da 250 g.

La patogenesi della malattia nell'uomo. La fonte dell'infezione sono pazienti con difterite e portatori. La malattia è trasmessa da goccioline trasportate dall'aria, a volte con particelle di polvere; la trasmissione è possibile anche attraverso vari oggetti (giocattoli, piatti, libri, asciugamani, sciarpe, ecc.), prodotti alimentari (latte, piatti freddi vari, ecc.) infetti da corinebatteri difterici.

I portatori svolgono un ruolo importante nell'epidemiologia della difterite. In media, il numero di portatori da convalescenti e soggetti sani varia dal 3 al 5%.

La più alta incidenza di difterite si nota in autunno, il che si spiega con un aumento del sovraffollamento dei bambini in questo periodo dell'anno e una diminuzione della resistenza del corpo sotto l'influenza del raffreddamento.

I corinebatteri di difterite, a causa della presenza in essi di un fattore di diffusione, hanno la capacità di penetrare nel sangue e nei tessuti di persone malate e animali infetti. Il fattore di diffusione è un enzima ialuronidasi che ha la capacità di abbattere l'acido ialuronico. I fattori di invasività includono neuraminidasi, fattore necrotico, fibrinolisina.

Nella patogenesi della difterite, il ruolo principale è svolto dall'istotossina, che blocca la sintesi proteica nelle cellule di mammifero e inattiva l'enzima transferasi responsabile della formazione della catena polipeptidica.

Nella clinica e negli esperimenti sugli animali è stata dimostrata l'influenza di stafilococchi e streptococchi patogeni sullo sviluppo della malattia, che aumentano notevolmente la gravità dell'infezione.

Nell'uomo, nel sito di introduzione dell'agente eziologico della difterite (faringe, naso, trachea, congiuntiva degli occhi, pelle, vulva della vagina, superficie della ferita), si formano film con un gran numero di difterite corinebatteri e altri microbi . L'esotossina prodotta provoca necrosi e infiammazione difterica delle mucose o della pelle, essendo assorbita colpisce le cellule nervose, il muscolo cardiaco e gli organi parenchimali, provocando fenomeni di generale grave intossicazione.

Profondi cambiamenti si verificano nel muscolo cardiaco, nei vasi sanguigni, nelle ghiandole surrenali, così come nel sistema nervoso centrale e periferico. Pertanto, assegna tre punti di applicazione tossina difterica nel corpo: miocardio(sviluppo di miocardite difterica tossica), ghiandole surrenali(calo del tono vascolare e della pressione sanguigna a causa di una diminuzione della produzione di adrenalina), sistema nervoso(sviluppo di paralisi e paresi).

Secondo la localizzazione del processo, si osservano più spesso difterite della faringe e groppa difterica (difterite della laringe), quindi difterite del naso. Relativamente rara è la difterite degli occhi, delle orecchie, dei genitali, della pelle e delle ferite. La difterite faringea rappresenta oltre il 90% di tutte le malattie, seguita dalla difterite nasale.

La morte per difterite della laringe può essere dovuta ad asfissia, soffocamento, perché anche un piccolo film di difterite può ostruire completamente la glottide. Con la difterite della faringe, la maggior parte dei decessi è associata a danni cardiaci dovuti a intossicazione.

Immunità. Nella difterite, l'immunità dipende principalmente dal contenuto di antitossina nel sangue. Tuttavia, non è possibile escludere un certo ruolo del complesso antibatterico associato alla fagocitosi e alla presenza di opsonine, agglutinine, precipitine e sostanze leganti il ​​complemento. L'immunità nella difterite è di natura antinfettiva (antitossica e antibatterica).

Il test di Shik. La presenza di immunità antitossica antidifterica può essere rilevata mediante la reazione di Schick. 1/40 Dlm di tossina di cavia in un volume di 0,2 ml viene somministrato per via intradermica ai bambini nell'avambraccio. Con una reazione positiva, che indica l'assenza di immunità antitossica, arrossamento e gonfiore fino a 2 cm di diametro compaiono nel sito di iniezione dopo 24-48 ore Una reazione Shik positiva si verifica in assenza di antitossina o una piccola quantità di essa nel siero di sangue. Un test di Schick negativo è, in una certa misura, un indicatore di immunità alla difterite.

A causa del fatto che l'esotossina difterica provoca uno stato di sensibilizzazione e provoca lo sviluppo di gravi complicanze in molti bambini, la reazione di Schick precedentemente ampiamente utilizzata viene utilizzata in misura limitata.

Per determinare la quantità di antitossine nel sangue, si raccomanda una reazione di emoagglutinazione indiretta con eritrociti sensibilizzati con tossoide difterico.

I più suscettibili alla difterite sono i bambini di età compresa tra 1 e 4 anni. Negli ultimi anni, c'è stato un relativo aumento dell'incidenza tra le persone di età pari o superiore a 15 anni.

Il trasferimento della difterite lascia un'immunità meno forte rispetto ad altre malattie dell'infanzia (morbillo, pertosse). Ripetute infezioni da difterite si osservano nel 6-7% dei casi.

Trattamento. Il trattamento per la difterite include isolamento malato, grave riposo a letto, appuntamento anticipato antitossina e relativi terapia antibiotica. Per l'ostruzione delle vie aeree può essere necessaria una terapia di supporto come il cateterismo e la ventilazione.

I pazienti con difterite sono dati siero antitossico in dosi di 5000 - 15000 ME con moderata gravità della malattia e 30 000 50 000 ME con forme gravi.

C. diphtheriae è sensibile alla penicillina, alla tetraciclina, alla rifampicina e alla clindamicina. L'eritromicina è preferita alla penicillina per il trattamento della difterite della gola, specialmente nel trattamento dei portatori. Sono stati descritti ceppi resistenti all'eritromicina e alla tetraciclina.

La terapia antibiotica non ha alcun effetto sulla tossina preformata (precedentemente formata), che si diffonde rapidamente dal sito della lesione e, se non neutralizzata dall'antitossina, si lega rapidamente alle cellule dei tessuti in modo irreversibile.

trattamento) non deve attendere la conferma del laboratorio se vi è un forte sospetto clinico perché il tasso di mortalità è direttamente correlato al periodo di ritardo prima della somministrazione dell'antitossina, passando da zero al 20% tra l'insorgenza della malattia e il giorno 5 dell'infezione, il caso mediano è una mortalità tasso del 5-7%.

Vengono anche utilizzate penicillina, tetracicline, rifampicina, clindamicina, sulfamidici e agenti cardiaci.

Gli antibiotici sono prescritti per trattare i portatori. Un buon risultato è l'uso di tetraciclina, eritromicina in combinazione con vitamina C.

Prevenzione. Consiste nella diagnosi precoce, ricovero immediato, disinfezione completa dei locali e degli oggetti, identificazione dei portatori.

Profilassi specifica effettuata mediante immunizzazione attiva. Esistono diversi vaccini utilizzati per la prevenzione specifica della difterite: 1) tossoide difterico adsorbito (AD-tossoide); 2) tossoide difterico-tetanico adsorbito (ADS-tossoide); 3) vaccino pertosse-difterite-tetano adsorbito (vaccino DPT). Tutti questi farmaci sono usati secondo le istruzioni o le istruzioni.

Va notato che non tutti i bambini immunizzati acquisiscono resistenza alla difterite. In media, il 5-10% di loro rimane suscettibile, o refrattario, cioè incapace di formare anticorpi dopo l'immunizzazione. Questa condizione è il risultato di tolleranza immunologica, agammaglobulinemia o ipogammaglobulinemia.

In precedenza, la difterite era una formidabile malattia dei bambini. In Russia nel 1886-1912. ogni anno si ammalavano più di 250.000 persone. La mortalità è stata molto alta del 12-30%.

Grazie all'introduzione dell'immunizzazione obbligatoria contro la difterite, sono stati fatti passi da gigante nella lotta contro questa infezione. L'incidenza della difterite nel 1975 rispetto al 1913 è diminuita a casi isolati, il tasso di mortalità per difterite è diminuito di oltre 100 volte.

Tuttavia, attualmente la difterite è tornata ad essere una vera e propria infezione per i paesi dell'ex Unione Sovietica, compresa l'Ucraina.

La difterite è una malattia infettiva acuta in cui sono colpiti i sistemi nervoso e cardiovascolare e il processo infiammatorio locale è caratterizzato dalla formazione di placche fibrinose. ( diphtherion - "film", "pelle" in greco).

La malattia è trasmessa da goccioline trasportate dall'aria da pazienti con difterite e portatori dell'infezione. Il suo agente eziologico è il bacillo della difterite ( Corynebacterium diphtheriae, bacillo di Leffler), che produce un'esotossina che determina tutta una serie di manifestazioni cliniche.

La difterite è nota all'umanità fin dai tempi antichi. L'agente eziologico della malattia fu isolato per la prima volta nel 1883.

L'agente eziologico della difterite

L'agente eziologico della difterite appartiene al genere Corynebacterium. I batteri di questo genere hanno ispessimenti claviformi alle estremità. Blu colorato di Gram (gram-positivo).

Riso. 1. Nella foto, agenti patogeni della difterite. I batteri hanno l'aspetto di piccoli bastoncini leggermente ricurvi con ispessimenti a forma di clava alle estremità. I grani di Volutin si trovano nell'area degli ispessimenti. I bastoncini sono immobili. Non formare capsule e spore. Oltre alla forma tradizionale, i batteri possono avere la forma di lunghi bastoncini, forme piriformi e ramificate.

Riso. 2. Agenti patogeni della difterite al microscopio. Colorazione Gram.

Riso. 3. In uno striscio, i patogeni della difterite si trovano ad angolo l'uno rispetto all'altro.

Riso. 4. Nella foto, la crescita delle colonie di bacilli di difterite su diversi terreni. Con la crescita dei batteri sui terreni di tellurito, le colonie assumono un colore scuro.

Biotipi di Corynebacterium diphtheria

Esistono tre biotipi di Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius.

Riso. 5. Nella foto a sinistra, colonie di Corynebacterium diphtheriae gravis (Corynebacterium diphtheriae gravis). Sono grandi, convesse al centro, striate radialmente, con bordi frastagliati. Nella foto a destra è Corynebacterium diphtheriae mittis. Sono di piccole dimensioni, di colore scuro, lisce e lucenti, con bordi lisci.

Pseudo batteri difterici (difteroidi)

Alcuni tipi di microrganismi sono simili per proprietà morfologiche e biochimiche ai corinebatteri. Questi sono Corynebacterium ulceran, Corynebacterium pseudodiphteriticae (Hofmani) e Corynebacterium xeroxis. Questi microrganismi non sono patogeni per l'uomo. Colonizzano sulla superficie della pelle e delle mucose delle vie respiratorie e degli occhi.

Riso. 6. Nella foto, falsi bastoncini di difterite di Hoffman. Si trovano spesso nel rinofaringe. Spesse, corte, disposte in tratti paralleli tra loro.

formazione di tossine

La difterite è causata da ceppi tossigeni di bacilli difterici. Formano un'esotossina che colpisce selettivamente il muscolo cardiaco, i nervi periferici e le ghiandole surrenali nel corpo di una persona malata.

La tossina difterica è un veleno batterico altamente efficace, di forza inferiore alle tossine del tetano e del botulino.

Proprietà della tossina:

• alta tossicità,
• immunogenicità (la capacità di suscitare una risposta immunitaria),
• termolabilità (la tossina perde le sue proprietà immunogeniche sotto l'influenza delle alte temperature).

Formare ceppi lisogeni di tossina di batteri difterici. Quando i batteriofagi entrano nella cellula, portando il gene che codifica la struttura della tossina (gene volpe), le cellule batteriche iniziano a produrre la tossina difterica. La massima produzione di tossina si verifica nella popolazione batterica nella fase della sua morte.

La forza della tossina è determinata sulle cavie. La minima dose letale di una tossina (un'unità della sua misura) uccide un animale del peso di 250 grammi. entro 4 giorni.

La tossina difterica interrompe la sintesi proteica nel miocardio e provoca danni alla guaina mielinica delle fibre nervose. Disturbi funzionali del cuore, paralisi e paresi spesso portano alla morte del paziente.

La tossina difterica è instabile e si distrugge facilmente. È dannoso per la luce solare, temperature di 60 ° C e oltre e una serie di sostanze chimiche. Sotto l'influenza dello 0,4% di formalina entro un mese, la tossina difterica perde le sue proprietà e si trasforma in anatossina. Il tossoide difterico è utilizzato per l'immunizzazione umana perché conserva le sue proprietà immunogeniche.

Riso. 7. La foto mostra la struttura della tossina difterica. È una proteina semplice composta da 2 frazioni: la frazione A è responsabile dell'effetto tossico, la frazione B serve per legare la tossina alle cellule del corpo.

Resistenza dei patogeni della difterite

• Gli agenti causali della difterite sono altamente resistenti alle basse temperature.

Nel periodo autunno-inverno, i patogeni vivono fino a 5 mesi.

• I batteri in un film difterico essiccato rimangono vitali fino a 4 mesi, fino a 2 giorni - nella polvere, sui vestiti e su vari oggetti.
• Con la bollitura i batteri muoiono all'istante, dopo 10 minuti alla temperatura di 60°C. La luce solare diretta e i disinfettanti sono dannosi per i bastoncini difterici.

Epidemiologia della difterite

La difterite si verifica in tutti i paesi del mondo. L'immunizzazione di massa di routine della popolazione infantile nella Federazione Russa ha portato a un forte calo della morbilità e della mortalità per questa malattia. Il numero massimo di pazienti con difterite si registra in autunno e in inverno.

Chi è la fonte dell'infezione

• La massima intensità dell'isolamento dei batteri patogeni si osserva nei pazienti con difterite della faringe, della laringe e del naso. I meno pericolosi sono i pazienti con danni agli occhi, alla pelle e alle ferite. I pazienti con difterite sono contagiosi entro 2 settimane dall'inizio della malattia. Con il trattamento tempestivo della malattia con farmaci antibatterici, questo periodo si riduce a 3-5 giorni.
• Le persone che si stanno riprendendo da una malattia (convalescenti) possono rimanere una fonte di infezione fino a 3 settimane. La tempistica della cessazione dell'assegnazione dei bacilli difterici è ritardata nei pazienti con malattie croniche del rinofaringe.
• I pazienti nei quali la malattia non è stata riconosciuta tempestivamente sono di particolare pericolo epidemiologico.
• Anche gli individui sani, portatori di ceppi tossigeni di bacilli difterici, sono una fonte di infezione. Nonostante il loro numero sia centinaia di volte superiore al numero di pazienti con difterite, l'intensità dell'isolamento batterico in essi è ridotta di decine di volte. Bacteriocarrier non si manifesta in alcun modo, e quindi non è possibile controllare la diffusione dell'infezione. Questa categoria di persone viene rilevata durante gli esami di massa in caso di focolai di difterite in gruppi organizzati. Fino al 90% dei casi di difterite si verificano a seguito di infezione con ceppi tossigeni di agenti patogeni della difterite da portatori sani.

Il trasporto di bacilli difterici può essere transitorio (singolo), a breve termine (fino a 2 settimane), a medio termine (da 2 settimane a 1 mese), protratto (fino a sei mesi) e cronico (più di 6 mesi).

I pazienti ei portatori di batteri sono le principali fonti di infezione

Riso. 8. Nella foto, difterite della faringe. La malattia rappresenta fino al 90% di tutti i casi della malattia.

Modi di trasmissione della difterite

• L'aria è la principale via di trasmissione dell'infezione. I bacilli della difterite entrano nell'ambiente esterno con le più piccole goccioline di muco dal naso e dalla gola quando si parla, si tossisce e si starnutisce.
• Possedendo una grande stabilità nell'ambiente esterno, i patogeni della difterite rimangono a lungo su vari oggetti. Articoli per la casa, utensili, giocattoli per bambini, biancheria intima e vestiti possono diventare una fonte di infezione. La via di contatto della trasmissione dell'infezione è secondaria.
• Le mani sporche, soprattutto con le lesioni difterite degli occhi, della pelle e delle ferite, diventano un fattore di trasmissione dell'infezione.
• Sono stati registrati focolai della malattia di origine alimentare con l'uso di alimenti infetti - latte e piatti freddi.

Il numero massimo di pazienti con difterite si registra nella stagione fredda - in autunno e in inverno

La difterite colpisce persone di tutte le età che non hanno l'immunità alla malattia o l'hanno persa a causa del rifiuto di una persona di vaccinarsi.

Riso. 9. La foto mostra una forma tossica di difterite in un bambino.

Contingente suscettibile

La difterite colpisce persone di tutte le età che non hanno l'immunità alla malattia a causa del rifiuto di vaccinarsi. L'80% dei bambini sotto i 15 anni affetti da difterite non è vaccinato contro la malattia. La massima incidenza di difterite si verifica all'età di 1-7 anni. Nei primi mesi di vita i bambini sono protetti dall'immunità passiva antitossica, che viene trasmessa dalla madre attraverso la placenta e il latte materno.

L'immunità alla difterite si forma dopo la malattia, come risultato del portatore di batteri (immunizzazione nascosta) e della vaccinazione.

Focolai sporadici di difterite si verificano quando infetti da portatori dell'infezione, tra i bambini non vaccinati contro questa malattia, immunizzati in modo inadeguato e refrattari (immunologicamente inerti).

La presenza nell'uomo di anticorpi specifici nella quantità di 0,03 AU/ml fornisce una protezione completa contro la difterite.

Lo stato di suscettibilità alla difterite si rivela in base ai risultati della reazione di Schick, che consiste nella somministrazione intradermica di una soluzione di tossina difterica. Il rossore e una papula più grande di 1 cm sono considerati una reazione positiva e indicano la suscettibilità alla difterite.

Riso. 10. Nella foto, difterite degli occhi e del naso.

Patogenesi della difterite

La patogenesi della difterite è associata all'esposizione al corpo della tossina difterica. Le mucose del naso e della faringe, gli occhi, gli organi genitali nelle ragazze, la pelle e le ferite sono la porta d'ingresso per i bacilli della difterite. Nel sito di introduzione, i batteri si moltiplicano, provocando infiammazione con formazione di pellicole fibrinose, saldamente saldate allo strato sottomucoso. Il periodo di incubazione dura da 3 a 10 giorni.

Con la diffusione dell'infiammazione alla laringe e ai bronchi, si sviluppa l'edema. Il restringimento delle vie aeree porta all'asfissia.

La tossina che i batteri secernono viene assorbita nel sangue, causando gravi intossicazioni, danni al muscolo cardiaco, alle ghiandole surrenali e ai nervi periferici. I bacilli della difterite non si diffondono oltre i tessuti colpiti. La gravità del quadro clinico della difterite dipende dal grado di tossicogenicità del ceppo batterico.

La tossina difterica nella sua composizione contiene diverse frazioni. Ogni frazione ha un effetto biologico indipendente sul corpo del paziente.

Riso. 11. La foto mostra una forma tossica di difterite. Grave edema dei tessuti molli e pellicole fibrinose nell'orofaringe.

Ialuronidasi, distruggendo l'acido ialuronico, aumenta la permeabilità delle pareti dei capillari, che porta al rilascio della parte liquida del sangue nello spazio intercellulare, contenente, oltre a molti altri componenti, il fibrinogeno.

Necrotossina ha un effetto dannoso sulle cellule epiteliali. La trombochinasi è secreta dalle cellule epiteliali, che promuove la conversione del fibrinogeno in fibrina. Quindi, sulla superficie del cancello d'ingresso si formano pellicole fibrinose. Soprattutto profondamente i film penetrano in profondità nell'epitelio sulla mucosa delle tonsille, poiché sono ricoperti da epitelio multinucleato. I film nelle vie aeree causano soffocamento, poiché ne interrompono la pervietà.

Il colore dei film di difterite è con una sfumatura grigiastra. Più i film sono saturi di sangue, più scuro è il colore, fino al nero. I film sono saldamente attaccati allo strato epiteliale e, quando si cerca di separarli, l'area danneggiata sanguina sempre. Man mano che le pellicole di difterite si riprendono, si staccano da sole. tossina difterica blocca il processo di respirazione e sintesi proteica nelle strutture cellulari. I capillari, i miocardiociti e le cellule nervose sono particolarmente sensibili agli effetti della tossina difterica.

Il danno ai capillari porta al gonfiore dei tessuti molli circostanti e ad un aumento dei linfonodi vicini.

La miocardite difterica si sviluppa nella 2a settimana della malattia. Le cellule muscolari danneggiate del cuore vengono sostituite dal tessuto connettivo. Si sviluppa la distrofia miocardica grassa.

La neurite periferica si sviluppa da 3 a 7 settimane di malattia. Come risultato dell'esposizione alla tossina difterica, la guaina mielinica dei nervi subisce una degenerazione grassa.

In alcuni pazienti si notano emorragie nelle ghiandole surrenali e danni ai reni. La tossina difterica provoca una grave intossicazione del corpo. In risposta all'esposizione alla tossina, il corpo del paziente risponde con una risposta immunitaria: la produzione di antitossina.

Gruppo Corinebatteri include membri del genere Corinebatterio rappresentato da batteri immobili a forma di bastoncino capaci di ramificarsi.

Corinebatteri. Corynebacterium diphtheriae

L'agente eziologico della difterite. Bacillo della difterite (bacchetta di Klebs-Löffler). Difterite. Garottillo

Difterite- una malattia infettiva acuta causata da Corynebacterium diphtheriae e la sua tossina. Bastoncini di difterite causare infiammazione delle vie respiratorie, meno spesso della pelle. Tossina del bastone di Klebs-Löffler porta alla degenerazione dei nervi periferici, del muscolo cardiaco e di altri tessuti.

difterite nota tanto tempo fa; il medico e storiografo siriano Areteo di Cappadocia (I secolo aC) lo descrisse come “ulcere maligne sulle tonsille che portano al soffocamento. Quest'ultimo è così caratteristico che in Spagna la difterite era chiamata " garotillo”, cioè una piccola garota (un dispositivo utilizzato per strangolare i criminali).

L'agente eziologico della difterite - Corynebacterium diphtheriae; identificato per la prima volta da E. Klebs(1883), e una coltura pura del patogeno fu ottenuta da F. Loefler (1884).

Epidemiologia della difterite. La prevalenza del bacillo della difterite

serbatoio difterico- persona (malata, convalescente, portatore di batteri); i malati rappresentano il maggior pericolo epidemico. I convalescenti secernono il bacillo della difterite entro 15-20 giorni. La principale via di trasmissione del bacillo della difterite- aereo; l'infezione è possibile anche attraverso oggetti usati dal paziente e cibo contaminato (solitamente latte).

A temperatura ambiente dentro atmosfera umida Bastoncino Klebs-Löffler conservato per lungo tempo. A 60 °C bacillo difterico muore entro 10 minuti; nei film essiccati resiste a una temperatura di 98 "C per 1 ora, ea temperatura ambiente può essere conservato fino a 7 mesi.

Bacillo della difterite sui giocattoli dura fino a 2 settimane, in polvere - fino a 5 settimane, in acqua e latte - fino a 6-20 giorni, rimane vitale in luce diffusa fino a 8 ore Disinfettanti e antisettici inattivare l'agente eziologico della difterite entro 5-10 min.

Picco di incidenza della difterite avviene durante i mesi autunnali e invernali.

Corinebatteri. Bordetella.

L'agente eziologico della difterite - Corynebacterium diphtheriae e un ampio gruppo di microrganismi simili nelle proprietà morfologiche e biochimiche del genere Corynebacteria sono chiamati batteri corineformi o difteroidi. Sono rappresentati da bastoncini immobili gram-positivi, spesso con ispessimenti alle estremità, che ricordano una mazza (coryne - macis). I difteroidi sono ampiamente distribuiti nel suolo, nell'aria, nei prodotti alimentari (latte). Tra questi, si possono distinguere tre gruppi ecologici:

Patogeni umani e animali;

patogeni delle piante;

Corinebatteri non patogeni.

Molti tipi di difteroidi sono normali abitanti della pelle, delle mucose della faringe, del rinofaringe, degli occhi, delle vie respiratorie, dell'uretra e degli organi genitali.

Difterite- una malattia infettiva acuta prevalentemente dell'infanzia, che è caratterizzata da intossicazione del corpo con tossina difterica e caratteristica infiammazione fibrinosa (diphtheritic) nel sito dell'agente patogeno (phther - film).

Proprietà morfologiche e tintorie. C. diphtheriae - sottili bastoncini polimorfici con estremità a forma di clava, spesso contenenti inclusioni di volutina, rilevate mediante colorazione con blu di metilene o Neisser. Con quest'ultimo i bastoncini sono di colore giallo paglierino, i granelli di volutina (polimetafosfato) sono di colore bruno scuro. Nelle culture, i bastoncini sono inclinati l'uno rispetto all'altro (caratteristiche di divisione), formando varie forme: dita allargate, V, Y, L, ecc. Hanno una microcapsula, così come la fimbria, che facilitano l'adesione all'epitelio delle mucose.

beni culturali. I batteri della radice della difterite non crescono su terreni semplici. Richiedono terreni con sangue o siero di sangue (Leffler, Roux media), sui quali si nota la crescita dopo 10-12 ore, durante le quali la microflora di accompagnamento (campioni contaminanti) non ha il tempo di svilupparsi completamente.

Il terreno e il tellurito più ottimali: l'agar al cioccolato di Macleod. Elevate concentrazioni di tellurito di potassio in questi terreni inibiscono la crescita della flora estranea. Corynebacterium diphtheria riduce il tellurito a tellurio metallico, che conferisce alle loro colonie un colore grigio scuro o nero.

Si distinguono i biotipi di questo patogeno: gravis, mitis, intermedius, che differiscono per morfologia, proprietà antigeniche e biochimiche e gravità delle malattie nell'uomo. Il tipo gravis provoca spesso focolai e un decorso più grave, è caratterizzato da grandi colonie con bordi frastagliati e striature radiali a forma di margherita (forma R). Il tipo mitis provoca malattie sporadiche prevalentemente lievi, forma piccole colonie lisce con bordi lisci (forme a S) su terreni densi. Il tipo intermedius occupa una posizione intermedia; su supporti densi, forma forme RS che hanno caratteristiche transitorie, ma anche più piccole. Su mezzi liquidi causare torbidità dei mezzi, formare un precipitato friabile.

Proprietà biochimiche. Corynebacterium diphtheria fermenta glucosio, maltosio. La mancanza di attività contro il saccarosio e l'urea è un'importante caratteristica differenziale tra i difteroidi. Hanno attività cistenasi (abbattono la cisteina) - il test Piso.

Struttura antigenica. Assegna gli antigeni O e K. I componenti polisaccaridici degli antigeni O della parete cellulare hanno proprietà intergeneriche, causando reazioni incrociate aspecifiche con micobatteri, actinomiceti (nocardia).

Gli antigeni K di superficie sono proteine ​​capsulari specie-specifiche e immunogeniche. Ci sono 11 sierotipi. I sierotipi 1-5 e 7 appartengono alla biovar gravis. La sierotipizzazione delle colture viene eseguita in AR con sieri diagnostici ai corrispondenti sierotipi e siero agglutinante poligruppo.

Nella diagnosi sierologica nell'uomo, l'RPHA è più spesso utilizzato, che è più sensibile dell'AR. Attualmente viene utilizzato anche l'ELISA. Molti ceppi di Corynebacterium diphtheria (specialmente quelli non tossigeni) sono spontaneamente agglutinabili e poliagglutinabili.

fattori di patogenicità. I ceppi tossigeni dell'agente eziologico della difterite producono una forte esotossina (proteina immunogenica altamente tossica termolabile). I ceppi non tossigeni non causano malattie.

La tossina provoca il blocco irreversibile dell'allungamento della catena polipeptidica, cioè qualsiasi sintesi proteica. Principalmente sono colpiti alcuni sistemi: simpatico-surrenale, cuore e vasi sanguigni, nervi periferici. Ci sono disturbi strutturali e funzionali del miocardio, demielinizzazione delle fibre nervose, che portano alla paralisi e alla paresi.

Solo i ceppi lisogenici infettati da un batteriofago (beta-fago) che porta il gene tox, che codifica la struttura della tossina (cioè che portano i geni di un profago moderato nel loro cromosoma), mostrano la capacità di produrre tossina. La tipizzazione fagica viene utilizzata per differenziare i ceppi di Corynebacterium diphtheria.

Epidemiologia. Serbatoio - una persona (malata, convalescente, portatore di batteri). La principale via di trasmissione è aerea, la stagionalità è autunno-inverno. L'agente patogeno è ben conservato a basse temperature, allo stato secco (saliva, muco, polvere).

Caratteristiche cliniche e patogenetiche. L'agente eziologico nel sito di introduzione provoca un'infiammazione fibrinosa con la formazione di un film fibrinoso saldamente saldato ai tessuti. L'azione dell'esotossina (descritta nella sezione "fattori di patogenicità") è essenziale nella patologia causata. Secondo la localizzazione, si distinguono la difterite dell'orofaringe (il più delle volte), le vie respiratorie, il naso e la localizzazione rara (occhi, organi genitali esterni, pelle, superficie della ferita). La difterite della faringe può causare groppa e asfissia.

Diagnostica di laboratorio. Il principale metodo diagnostico è batteriologico. Utilizzato per identificare pazienti, portatori di batteri, contatti. I tamponi sterili prelevano materiale per microscopia e colture: muco dalla gola e dal naso, pellicole dalle tonsille e altri luoghi sospetti per la presenza di lesioni difteriche.

L'agente eziologico viene isolato mediante inoculazione su terreni selettivi per tellurito e agar sangue. C.xerosis (una possibile causa di congiuntivite cronica) viene spesso rilevato sulla membrana mucosa dell'occhio, C.pseudodiphtheriticum (bacillo di Hofmann) nel rinofaringe e vengono rilevati anche altri difteroidi.

Per differenziare l'agente eziologico della difterite dai difteroidi, indicatori quali la capacità di ridurre il tellurito e formare colonie scure, il Pisu test, la fermentazione dei carboidrati (glucosio, maltosio, saccarosio) e dell'urea, la capacità di crescere in condizioni anaerobiche (tipiche dell'agente eziologico della difterite).

Un passaggio obbligatorio è determinare la tossicogenicità della coltura. I metodi più comuni sono i saggi biologici su cavie, la reazione di precipitazione dell'agar. ELISA con antitossina, sonde genetiche e PCR sono utilizzati anche per rilevare il frammento A del gene tox.

Trattamento. Vengono utilizzati siero difterico antitossico, antibiotici e farmaci sulfamidici.

L'immunità post-infettiva è persistente, prevalentemente antitossica. Per determinare quantitativamente il livello di immunità antitossica, in precedenza veniva utilizzato il test Shik (iniezione intradermica di una tossina), ora - RPHA con un diagnostico eritrocitario ottenuto dalla sensibilizzazione degli eritrociti con tossoide difterico.

Prevenzione. Si basa sull'immunizzazione di massa della popolazione. Vengono utilizzati vari preparati contenenti tossoide difterico: DTP, ADS, ADS-M, AD e AD-M.