Раздавленная капля микробиология. Пошаговая инструкция проведения биоревитализации вискодермом. Приготовление бактериальной суспензии

Раздавленная капля - это способ наблюдения живых микроорганизмов в микроскоп. На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала, ее осторожно накрывают покровным стеклом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Капля должна заполнять все пространство между стеклами л не выступать за края покровного стекла. Иногда, если препарат нужно рассматривать длительное время, края покровного стекла предварительно смазывают вазелином. Препарат можно окрасить, осторожно добавив к нему петлей разведенный краситель. См. также Бактериологическое исследование, Микроскопическая техника.

Раздавленная капля - это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.

Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тканей на предметное стекло наносят каплю суспензии клеток в культуральной жидкости. Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100-1:1000 и т. д.); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию. Так как при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1-1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.

Помимо изучения неокрашенных бактерий, простейших и т. д., метод раздавленной капли позволяет применять методы прижизненной окраски. В качестве красителя широко используют 0,1% водный раствор нейтрального красного. См. также Микроскопическая техника.

На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. ! Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его

Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру

Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х

Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания

Метод висячей капли

Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).

Рис. №10 . Техника приготовления препарата висячая капля

Рис. №11 . Лептоспира в темном поле

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Зачетное занятие с замером навыков по теме:

«Морфология микроорганизмов»

Перечень манипуляций к зачету:

Подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода

Подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода

Подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода

Подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода

Подготовить препарат висячая капля, значение методики

Подготовить препарат раздавленная капля, значение методики

Промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.

Вопросы к зачету:

Назовите основные формы бактериальных клеток,

Перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,

Укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,

Назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,

Укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).

Тестовые задания для самоконтроля

1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

а) окрашивание

б) фиксация

в) приготовление мазка

г) высушивание

2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:

стафилококк а) по Граму

микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену

пневмококк в) Бурри - Гинсу

бацилла сибирской язвы г) Ожешко

3. Простой метод окраски:

а) по Нейссеру

б) метиленовым синим

в) по Граму

г) по Романовскому - Гимзе

4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:

а) нуклеоид

в) включения

г) капсула

5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:

а) по времени окрашивания

б) отсутствия фуксина Пфейффера

в) разные разведения туши

г) мазок фиксируется в пламени горелки

6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:

в) 5% Н 2 SО 4

г) 25% Н 2 SО 4

7. К спорообразованию способны:

а) стафилококки

б) бациллы

в) сарцины

г) кишечная палочка

8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в

9. Укажите соответствие:

Метод окраски: Цель метода:

метод Ожешко а) обнаружение капсулы

метод Бурри б) определение кислотоустойчивости

метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму

4. метод Грама г) определение споры

10. При изучении подвижности используется микроскопия: а) фазово-контрастная

б) темнопольная

в) электронная

г) люминисцентная

11. Гонококки - это шаровидные бактерии, в мазках выглядят как:

а) диплококки

б) сарцины

в) микрококки

г) тетракокки

12. При окраске по Граму используется следующий краситель:

а) фуксин Циля

б) метиленовый синий

в) бриллиантовый зеленый

г) генциановый фиолетовый

13. Спору у бактерий можно выявить, окрасив препарат:

а) метиленовым синим

б) методом Ожешко

в) методом Грама

г) по Бурри-Гинсу

14. Флагеллин - это белок, входящий в состав:

а) оболочки

б) капсулы

в) цитоплазмы

г) жгутиков

15. Укажите соответствие:

Вид микроскопии: Цель применения:

1) Световая обычная микроскопия а) для изучения живых неокрашенных

препаратов

2)Фазово-контрастная микроскопия б) для изучения окрашенных препаратов

16. Перетрихи - имеют следующее расположение жгутиков на клетке:

а) по всей поверхности

б) на обоих концах

в) пучок на одном из концов

г) один жгутик на конце клетки

17. Виды фиксации:

1) физический а) пламя горелки, б) смесь Никифорова,

2) химический в) ацетон, г) спирт

18. Предметное стекло с лункой используется:

а) в методе Циля-Нильсена

б) изучение подвижности

в) изучения на наличие капсулы

г) при обнаружении споры

19. Дополнительной структурой бактерий является:

а) нуклеоид

в) капсула

г) рибосомы

20. Препарат из нативного материала готовится при окраске:

б) Бурри - Гинса

в) Ожешко

г) Циля-Нильсена

21. Бактерии штопорообразной формы называют:

а) спирохеты

б) спириллы

в) вибрионы

г) бруцеллы

22. Негативные методы окраски используются при методе:

а) Бурри-Гинса

б) Циля-Нильсена

г) Ожешко

д) Нейссера

23. В состав клеточной стенки бактерий входит:

а) крахмал

б) муреин

в) альбумин

24. Методы изучения микроорганизмов:

а) серологические

б) бактериологические

в) аллергические

г) все ответы верны

ОТВЕТЫ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

2 – б, в, г

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Алешукина А.В. Медицинская микробиология: Учебное пособие. – Ростов н/Д: Феникс, 2003 г.

Бакулина Н.А., Краева Э.Л. Микробиология. М., «Медицина», 1976

Микробиология /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986 г.

Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебник / А.А.Воробьев, Ю.С. Кривошеин, А.С. Быков и др. Под ред. А.А. Воробьева и Ю.С. Кривошеина. – М.: Мастерство; Высшая школа, 2001 г.

Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.В. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебное пособие для средних специальных медицинских учебных заведений. – Ростов н/Д: Феникс, 2002 г.

Руководство для малого практикума по микробиологии, П.А.Чиров, З.И.Остроухова, Е.И.Тихомирова, Изд-во СГУ, 1998 г.

Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник для средних медицинских учебных заведений / В.Б. Сбойчаков. – СПб.: СпецЛит, 2007г.

ПРИЛОЖЕНИЕ №1

Техника безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии

Правила работы со спиртовкой

Заправленную спиртовку хранят плотно закрытой притертым колпачком, чтобы предотвратить испарение спирта с фитиля

При зажигании спиртовки нужно снять колпачок и поджечь фитиль спичкой. При этом нельзя сдвигать держатель фитиля, т.к. пламя проскочит внутрь спиртовки, что вызовет сильную вспышку и разбрызгивание горящего спирта

Нельзя зажигать спиртовку от другой уже горящей спиртовки, т.к. при этом может сдвинуться держатель фитиля и вылиться спирт

Нельзя дуть на пламя, чтобы погасить спиртовку. Для этого следует аккуратно закрыть спиртовку колпачком.

Необходимо следить за тем, чтобы спиртовка не перегревалась. Это ведет к испарению спирта и опасности взрыва

При длительном нагревании лучше пользоваться двумя спиртовками

Не следует при работе наклонять голову над спиртовкой, т.к. при накоплении паров спирта под держателем фитиля может происходить самопроизвольное вспыхивание

Правила пользования ручным химическим пенным огнетушителем

ОХП -10

В случае возникновения пожара необходимо:

Для приведения огнетушителя в действие – ручку верхней части корпуса поворачивают на 180 о и переворачивают огнетушитель вверх дном

Струю пены следует направлять не в центр пламени, а под минимальным углом к поверхности горения в нижнюю часть пламени, последовательно сбивая и оттесняя его от краев к центру

При тушении огня ОХП – 10 необходимо обесточить все помещения с помощью рубильника, т.к. химическая пена в составе огнетушителя обладает высокой электропроводностью

ОХП – 10 применяют для тушения крупных очагов возгорания, когда другие средства малоэффективны

Правила работы с живой культурой

Правила работы с нагревательными приборами

При работе с электроплитками склянки с огнеопасными жидкостями следует держать на расстоянии не менее 1 м от рабочего места

Работать на неисправном и незаземленном оборудовании категорически запрещается

При временном прекращении работы, даже на непродолжительное время, источники нагревания выключать

Нельзя нагревать толстостенную стеклянную посуду, мерную посуду, неградуированные цилиндры. Фарфоровую посуду (стаканы, выпарительные чашки) можно нагревать на открытом пламени или водяной бане

Стеклянную посуду с плоским дном нагревать на открытом пламени или электроплитке с открытой спиралью нельзя

ПРИЛОЖЕНИЕ №2

Правила работы в микробиологической лаборатории

Работа с заразным материалом требует особой тщательности и соблюдения правил личной и общественной безопасности при ее выполнении

В помещении лаборатории необходимо строго соблюдать чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Запрещается прием пищи, излишние разговоры, суета

Работа обязательно проводится в халате, шапочке, сменной обуви

Каждый студент имеет в лаборатории свое постоянное рабочее место

Материал для работы принимает дежурный по бригаде у лаборанта и раздает студентам в присутствии преподавателя

В начале занятия необходимо записать в тетрадь дату, номер, тему занятия, план выполняемой работы. В процессе работы делаются записи и зарисовки в дневник

Все предметы, использованные при работе с живой культурой, обезвреживаются

В конце занятия студенты сдают весь материал дежурному по бригаде, а он лаборанту или преподавателю

В конце занятия студент должен:

Привести в порядок свое рабочее место

Сдать микроскоп, материал дежурному

Вымыть руки дез. раствором, а затем мылом

Представить преподавателю для подписи дневник

Анна Вадимовна Палиенко

Руководство для студентов отделения 060110 «Лабораторная диагностика»

к практическим занятиям

по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»

раздел «Морфология микроорганизмов»

Различные методики по восстановлению кожи, ее красоты, эластичности, молодости выделяют биоревитализацию, как самую безопасную. Одним из популярных препаратов, используемых во время процедуры, стал Вискодерм. Он выгодно отличается своим составом и действием.

Описание препарата Вискодерм

Главным действующим компонентом инъекционного препарата, по консистенции напоминающего гель или вязкую жидкость, является гиалуроновая кислота. Производителем продукта является итальянская компания IBSA Farmaceutici. Выход Вискодерма на российский рынок совпал с завоеванием и европейского рынка в 2009 году. Одобрение американского агентства, следящего за качеством медикаментов, препарат получил только в 2014 году.

Линейка препаратов

Вискодерм представлен тремя видами препарата с различными концентрациями гиалуроновой кислоты:

1. Вискодерм 0,8%ГК отличается минимальным содержанием действующего вещества. Инъекции вводятся на уровне эпидермиса. Применение состава рекомендуется для коррекции ранних возрастных изменений, уничтожения следов стресса, курения, излишней любви к солнцу. Этот вариант препарата удачно подходит для заботы о нежной коже вокруг глаз.
2. Вискодерм 1,6%ГК предназначен для борьбы со средними признаками старения. Инъекции вводятся в верхний слой дермы, что позволяет избавиться от обезвоживания кожи, подготовить ее к пластическим операциям и восстановить после них. Эта форма выпуска используется для сохранения молодости рук и зоны декольте.
3. Вискодерм 2.0%ГК вводится в средний и глубокий слой дермы для коррекции серьезных возрастных изменений. С его помощью удается устранить глубокие морщины, старые шрамы и растяжки.

Состав:

• Основным компонентом является синтетически полученная гиалуроновая кислота. Она освобождена от белковых соединений, способных спровоцировать развитие аллергической реакции.
• Минеральные элементы представлены медью, марганцем, цинком, железом, оловом и кальцием.
• Аминокислоты, среди которых изолейцин, аланин, аргинин, глицин.
• Витамины группы В, представленные фолиевой кислотой, инозитолом, холинхлоридом.

Показания к применению

Инъекции используются при:

• Проявлении первых признаков старения кожи с появлением мелких морщинок.
• Для борьбы с явно выраженными признаками старения.
• Обращаться за помощью к уникальному средству следует при потере кожей тонуса и упругости, появлении глубоких морщин.

Показаниями также являются:

• обезвоживание кожных покровов;
• чрезмерная сухость от природы;
• шрамы от акне.

Применять препарат допустимо на любом участке тела, требующем дополнительной заботы.

Противопоказания:

• Необходимо забыть об инъекциях девушкам в возрасте младше 25 лет, а также беременным и кормящим мамочкам.
• Предварительно необходимо пройти тест на свертываемость крови. При низком показателе процедура проводиться не будет.
• Также следует заранее провести тест на выявление аллергической реакции на саму гиалуроновую кислоту и местные анестетики. Положительная реакция означает невозможность проведения процедуры без серьезного риска для здоровья, красоты и даже жизни клиентки.
• Непременным противопоказанием к вводу косметического средства является наличие системных заболеваний соединительной ткани, инфекционные заболевания, онкология, аутоиммунные патологии.

Эффект от применения

Гиалуроновая кислота – элемент, содержащийся в коже. От него зависит эффективность работы механизма по созданию коллагена. Без последнего невозможно добиться упругости и эластичности:

• После применения кожа заметно разглаживается, ее рельеф становится ровным. Исчезают морщинки, морщины, складки и небольшие рубцы.
• Капиллярная сеть обретает надежного защитника, что снижает активность купероза, скрадывает следы его деятельности. Восстанавливается здоровая окраска лица, при этом участки с гиперпигментацией утрачивают свою интенсивность.
• Воздействие сокращает размер пор, снижает интенсивность выделения кожного сала, регулирует работу сальных желез, улучшает состояние волос.
• Агрессивное химическое воздействие, в том числе и объемное моделирование, пилинг требуют оптимизации достигнутых результатов. Вискодерм превосходно справляется с задачей.
• Воздействие на тело лазером и пластическая хирургия требуют серьезного реабилитационного периода. Значительно сократить его продолжительность помогают инъекции.

Способы введения

В зависимости от состояния кожи и преследуемой цели специалист-косметолог может выбрать определенную глубину введения соответствующей формы препарата:

• Для воздействия на верхний слой кожи достаточно ввести препарат в эпидермис. Это окажет необходимую стимуляцию обменных процессов, необходимых для разглаживания мелких морщин и возвращения сияющего цвета коже.
• Для воздействия на способность к регенерации кожи инъекции проводят в верхний слой дермы.
• Глубокое воздействие необходимо для провоцирования выработки собственной эндогенной кислоты, необходимой в борьбе с глубокими морщинами.

Важно учитывать, что не существует и единого для всех пациентов курса. После первых инъекций делается перерыв, а затем вводится новая порция уникального средства. Продолжительность курса зависит исключительно от результата. Его можно продолжать до тех пор, пока из зеркала не начнет смотреть то самое лицо, о котором мечталось.

В зависимости от индивидуальных особенностей продолжительность перерыва может составлять 2 недели или 1 месяц.

Различны и объемы препарата, используемые за время 1 сеанса. Все зависит от площади обрабатываемых участков.

Плюсы и минусы применения препарата

Вискодерм в кратчайшие сроки увлажняет кожу, улучшает ее состояние. Видимый эффект достигается уже с первого применения, полный курс обеспечивает длительный результат. Жидкость прекрасно сочетается со многими косметическими процедурами, значительно облегчая их.

Большим плюсом является и высокое качество всех элементов, входящих в состав, что обеспечивает безопасную работу с людьми с разным типом кожи и разных возрастов.

После использования самого серьезного из линейки препаратов возникает вероятность образования синяков и отека. Выходить в таком виде на люди неприятно, поэтому придется запереться дома на несколько дней. Есть вероятность развития побочных эффектов или осложнений процедуры. Также к минусам следует отнести необходимость соблюдать определенный ритуал, после проведения процедуры и даже до нее.

Как проводится биоревитализация Вискодермом – пошаговая инструкция

1. До начала процедуры изучается болевой порог клиента. В случае если он оказывается низким используют соответствующие обезболивающие препараты местного действия.
2. Крем, в чью задачу входит притупление болевого синдрома, наносят на кожу и оставляют на полчаса. При необходимости усилить действие анестетика поверх мази накладывают пленку. После завершения предварительной подготовки кожу тщательно очищают от крема и обрабатывают антисептиком.
3. Дальше происходит непосредственное введение жидкости под кожу. Для этого используется одноразовый шприц и тонкая игла. Техника введения средства определяется его видом и участком применения. Для биоревитализации подходит папульная техника. Для ухода за областью вокруг глаз применяется техника раздавленной капли. Ее очевидным преимуществом перед первой техникой становится быстрое исчезновение отеков.
4. Линейная техника применяется для непосредственного воздействия на морщины.
5. В кабинете специалиста на обработку лица потребуется около 30 минут в общей сложности. При желании позаботиться еще и о декольте, руках, шее придется устроиться поудобнее, ведь процедура отнимет не менее одного часа.
6. Места проколов дополнительно обрабатываются антисептиком уже после введения косметического состава под кожу. Для дополнительной защиты запрещается использовать какие-либо кремы или мази непосредственно после завершения сеанса ввода препарата.

До того как идти в кабинет косметолога, рекомендуется посетить своего терапевта и проконсультироваться с ним о предстоящем мероприятии. По его направлению нужно будет сдать анализы для исследования состояния организма, чтобы убедиться в отсутствии инфекции.

Полезно посетить дерматолога для общего осмотра, а в случае появления сыпи, покраснений шелушения кожи такой визит просто необходим. Для предупреждения осложнений, лучше исключить все неблагоприятные факторы.

После процедуры следует несколько ограничить свою жизнь во избежание занесения инфекции в полученные ранки. Меры предосторожности сводятся:

• К отказу от посещения пляжа, бассейна или купания в водоеме в течение первых четырех дней после инъекций.
• В первые три дня ни о какой косметике не может быть и речи. Затем можно потихоньку начинать без злоупотребления декоративной. Нанесение привычного макияжа становится допустимым не ранее, чем на шестой день.
• К запрету на использование любых мазей, компрессов или растворов для рассасывания синяков. Под запрет попадают все местные средства лекарственного характера.

Инъекции провоцируют образование отека. Чтобы не усугублять его придется постараться и не находиться в наклон на протяжении четырех суток с момента завершения процедуры. Физическая активность с серьезными нагрузками, а также посещение спортзала и сауны, в первые четыре дня после введения препарата способна нанести серьезный ущерб красоте. Период адаптации совершенно небольшой, поэтому серьезно себя ограничивать и накладывать жесткие запреты нет необходимости.

Возможные осложнения и побочные эффекты

• Небольшая неприятность в виде небольшого отека неизбежна, но исчезнет она самостоятельно уже через пару дней.
• Появление синяков в результате глубокого воздействия омрачит впечатление от полученного результата не меньше, чем на четыре дня. В некоторых случаях следует набраться терпения на целую неделю.
• Первые два дня самые сложные и тяжелые. Реагируя на вмешательство, организм часто отзывается появлением жжения, зуда или среднего покалывания на разных участках кожи. места проколов напоминают о себе покраснением.
• Воздействие солнечных лучей или лампы солярия на измененную кожу в течение первых пяти дней способно привести к повышенной пигментации и развитию воспаления.
• Главным осложнением считается развитие фиброза ткани.

Стоимость препарата

Минимальная цена сеанса с использованием Вискодерма составляет 7000 рублей. Все зависит от количества препарата и его вида. Самым доступным является Вискодерм 0,8%ГК. Цена сеанса обычно не поднимается выше 11 000 рублей. Для состава с более высоким содержанием гиалуроновой кислоты верхним порогом является сумма в 15 тыс. рублей за сеанс. Применение Вискодерма 2.0 требует серьезных расходов. Цена сеанса колеблется в пределах 10-21 тыс. рублей.

РАЗДАВЛЕННАЯ КАПЛЯ - метод приготовления препаратов для микроскопического исследования биологических объектов. В исследовательской практике Р. к. используют при изучении формы, размера и расположения микроорганизмов, выявления подвижности бактерий, при наблюдении за ростом и размножением микроорганизмов, для изучения реакций микроорганизмов на хим. соединения (хемотаксис) и физические факторы. В практике мед. микробиологии этот метод применяют при микроскопическом исследовании материала от больных для обнаружения возбудителей заболеваний, обладающих специфической морфологией,- простейших, спирохет, грибков. Методом Р. к. и его модификациями пользуются также при микроскопическом исследовании кала и других выделений на яйца и личинки гельминтов.

Для приготовления препарата готовят взвесь исследуемого материала в изотоническом р-ре хлорида натрия или водопроводной воде, добавляя вещества, облегчающие процесс микроскопии (красители, осветлители и др.); используют также культуры микроорганизмов на жидких или полужидких питательных средах, биол, жидкости. Каплю материала помещают на предметное стекло и сверху кладут покровное стекло, избегая появления в препарате пузырьков воздуха. Жидкость не должна выступать за пределы покровного стекла. Щель между предметным и покровным стеклами может быть герметизирована вазелином или смесью, состоящей из равных объемов вазелина и парафина. При исследовании быстродвижущихся микроорганизмов, чтобы уменьшить скорость их движения к суспензии можно добавить метилцеллюлозу. В этом случае можно наблюдать движения жгутиков. При микроскопии живых клеток возможно использование прижизненных (витальных) красителей - метиленового синего, нейтрального красного и других (в разведении 1:1000 - 1:10 000), повышающих контрастность препаратов и позволяющих выявить внутреннее строение простейших, грибков и др.

В зависимости от объекта и целей изучения микроскопию можно проводить при малом или большом увеличении с сухой или иммерсионной системами. В простейшем случае микроскопию осуществляют в затемненном поле зрения при суженной диафрагме и опущенном конденсоре. Более четкое изображение дают микроскопия в темном поле зрения, фазово-контрастная или аноптральная микроскопия (см. Микроскопические методы исследования). При приготовлении препаратов толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, а толщина покровных стекол - 0,17 мм. Предметные и покровные стекла должны быть чистыми и обезжиренными. При микроскопии в темном поле зрения препарат готовят как можно тоньше, а толщина покровных стекол не должна превышать 0,11 мм.

С. С. Белокрысенко.

Метод раздавленной капли

Применяется при исследовании морфологии и подвижности микроорганизмов.

Каплю микробной суспензии помещают на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. При работе с культурой, выросшей на твердой среде, на предметное стекло наносят каплю водопроводной воды, затем стерильной пипеткой берут небольшое количество культуры и перемешивают ее в капле. Покрывное стекло помещают ребром на предметное и осторожно помещают его на суспензию, следя за тем, чтобы между стеклами не было пузырьков воздуха. Избыток жидкости удаляют полоской фильтровальной бумаги.

Определение липолитической активности

Липолитические свойства культуры исследуют на среде определённого состава (бульон Штерна). Готовят бульон следующим образом: к 100 см 3 МПБ добавляют 1 см 3 глицерина и приливают 2см 3 свежеприготовленного 10 %-ного водного раствора сульфита натрия, затем по каплям 10 %-й спиртовой раствор основного фуксина (? 5 кап.).

Культуры культивируют в термостате при 37 0 С. Отмечают изменение цвета среды, рН (лакмусовой бумагой), помутнение, наличие хлопков.

Приготовление бактериальной суспензии

Стерильную жидкую синтетическую среду разливают в стерилизованные конические колбы по 100 см 3 .

Для получения биомассы исследуемой культуры микроорганизмов, делают посев на скошенный агар.

Подготовленные таким образом культуры инкубируют в термостате 24 ч при температуре (375)С, по окончании чего в пробирки с микроорганизмами вводят 5 см 3 соответствующей жидкой синтетической среды, осуществляя процесс механического воздействия. Приготовленную таким образом бактериальную суспензию вносят в колбы, содержащие по 100 см 3 соответствующей жидкой синтетической среды.

Культивирование микроорганизмов проводят в термостате при температуре 385С, с переменным механическим воздействием, осуществляемом на Shaker Type, с частотой колебаний 200 об/мин, амплитудой 6 по 1 ч в сутки.

Определение общего количества микроорганизмов (КОЕ)

Сущность метода заключается в определении в 1 см 3 воды общего содержания мезофильных аэробов и факультативных анаэробов при культивировании на синтетической питательной среде при температуре 40 С в течении 24 часов. Определение начинают с приготовления разведений. Для этого в несколько пробирок наливают 10 см 3 стерильной воды. В первую пробирку стерильной пипеткой добавляют 1 см 3 исследуемой воды. Новой стерильной пипеткой вносят пробу в пробирку со стерильной водой, после чего этой же пипеткой набирают 1 см 3 из приготовленного разведения и переносят во вторую, из второй в третью и т. д. Из каждой пробы делают посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. По истечении 24 часов при температуре 40 С подсчитывают число выросших колоний. Если выросло большое количество колоний, то дно чашки делят на секторы и подсчет ведут в каждом отдельном секторе. Результаты подсчета выражают в количестве бактерий на 1 см 3 анализируемой воды с учетом посеянного объема.