Campioni di Coombs. Test di Coombs: diretto e indiretto

Test di Coombs diretto ( test diretto dell'antiglobulina) è un test di laboratorio che rileva gli anticorpi anti-eritrociti fissati sui globuli rossi.

Indicazioni per lo studio

Quali sono le indicazioni per lo studio: stabilire la natura immunitaria dell'anemia emolitica.

Preparazione per lo studio

Come prepararsi allo studio:

1. Se il paziente è un neonato, i genitori devono spiegare che il test aiuterà a diagnosticare la HDN (malattia emolitica del neonato).

2. Se si sospetta che un paziente abbia anemia emolitica, gli si dovrebbe spiegare che lo studio determinerà se è dovuta a disturbi immunitari, farmaci o altre cause.

3. Non sono richieste restrizioni sulla dieta o sull'alimentazione.

4. Il paziente (o i genitori del neonato) devono essere avvertiti che il test richiederà un prelievo di sangue da una vena e informarlo chi e quando effettuerà la venipuntura.

5. È necessario essere avvertiti della possibilità di disagio durante l'applicazione di un laccio emostatico al braccio e durante la venipuntura.

6. I farmaci che possono influenzare il risultato del test devono essere interrotti. Questi includono chinidina, metildopa, cefalosporine, sulfamidici, clorpromazina, difenilidantoina, etosuccimide, idralazina, levodopa, acido mefenamico, melfalan, penicillina, procainamide, rifampicina, streptomicina, tetracicline, isoniazide.

Il prelievo di sangue viene effettuato al mattino a stomaco vuoto.

Materiale per l'analisi

Materiale per l'analisi:

Esecuzione della procedura

Come viene eseguita la procedura di prelievo del sangue:

1. Quando si esegue un test su un paziente adulto dopo la venipuntura, il sangue viene aspirato in provette con EDTA.

2. Dai neonati, il sangue viene prelevato dal cordone ombelicale in una provetta con EDTA.

3. Il sito di venipuntura viene premuto con un batuffolo di cotone fino all'arresto del sanguinamento.

4. Se si forma un ematoma nel sito di venipuntura, vengono prescritti impacchi caldi.

5. Dopo il prelievo di sangue, il paziente può riprendere ad assumere i farmaci sospesi.

6. I genitori del neonato dovrebbero essere avvertiti che potrebbero essere necessari esami ripetuti per monitorare la dinamica dell'anemia.

Metodo di prova diretto di Coombs:

Viene effettuato come segue:

Per ottenere anticorpi contro le immunoglobuline umane (siero antiglobulina) o il complemento (siero anticomplementare), l'animale viene immunizzato con siero umano, immunoglobuline o complemento umano. Il siero ottenuto dall'animale viene purificato dagli anticorpi verso altre proteine.

I globuli rossi del paziente vengono lavati con soluzione salina per rimuovere completamente il siero, che neutralizza gli anticorpi contro le immunoglobuline e il complemento e può causare un risultato falso negativo.

Se gli anticorpi o i componenti del complemento vengono fissati sulla superficie dei globuli rossi, l'aggiunta di antiglobulina o di siero anti-complemento provoca l'agglutinazione dei globuli rossi.

Vantaggi e svantaggi

Quali sono i vantaggi e gli svantaggi del test diretto di Coombs:

Vantaggi dello studio: elevata sensibilità, significativamente superiore alla risoluzione dei metodi di ricerca alternativi utilizzati per rilevare gli anticorpi non agglutinanti.

Svantaggi dello studio:

Il test diretto di Coombs è un metodo di ricerca ad alta intensità di lavoro che richiede particolare attenzione nella sua implementazione. Quando lo si utilizza, ci sono alcune difficoltà legate, in particolare, all'interpretazione delle reazioni debolmente positive. È noto che le false reazioni debolmente positive o negative durante l'esecuzione dei test di Coombs possono essere una conseguenza di un lavaggio insufficientemente efficace dei globuli rossi, della neutralizzazione del reagente antiglobulina con tracce di siero, nonché del contatto con una superficie non grassa su cui è applicata l'antiglobulina può essere riparato, perdendo così la sua attività.

Un altro svantaggio del test di Coombs è l'instabilità del reagente antiglobulina, la cui preparazione e conservazione presenta determinate caratteristiche, che rende difficile anche quantificare la reazione di emoagglutinazione con siero antiglobulina.

Fattori che influenzano il risultato dello studio

Quali fattori possono influenzare il risultato dello studio:

1. Emolisi causata da una manipolazione incauta di un campione di sangue.

2. Acetaminofene, acido p-salicilico, aminopirina, antistaminici, carbremi, cefalosporine, insetticidi contenenti carboidrati clorurati, clorpromazina, clorpropramide, cisplatino, clonidina, dipirone, etossimide, fenfliramina, fuadina, idralazina, idroclortiazide, ibuprofene, insulina, insulina, insulina, insulina , insulina, insulina, insulina, insulina, insulina, insulina, insulina, chinera Niazid, Levodofa, acido mefenamico, melfalan, metadone, metildopa, metilsergide, nomifensina, penicillamina, penicilline, fenacetina, fenilbutazone, probenecid, procainamide, chinidina, chinino, rifampicina , streptomicina, sulfamidici, derivati ​​della sulfanilurea, tetraciclina, triamterene, anidride trimellitica.

Anemia emolitica, causati da organismi autoimmuni che agiscono contro i propri globuli rossi, non sono ancora stati compresi con precisione. Tuttavia, si presume che alcuni fattori (ad esempio un virus, una proteina anormale) modifichino i globuli rossi in modo tale che il corpo li percepisca “come qualcosa di estraneo” e li combatta con l’aiuto di anticorpi. Secondo un'altra teoria, gli anticorpi diretti contro i globuli rossi compaiono quasi accidentalmente durante la formazione di corpi proteici plasmatici anormali in alcune malattie. Tali corpi proteici, altrettanto "casualmente", possono dare reazioni che possono essere utilizzate per fare una diagnosi (ad esempio, la polmonite virale, come è noto, dà una reazione Wasserman positiva, una reazione Paul-Bunnel positiva e una reazione di agglutinazione a freddo). .

Ci sono due principali tipi di autoanticorpi per l'anemia emolitica, vale a dire: anticorpi caldi (reagiscono a 37°C) e anticorpi freddi (la cui reattività aumenta con l'avvicinarsi della temperatura allo zero). Gli anticorpi caldi sono più comuni degli anticorpi freddi. Dacie ha scoperto che le emolisine calde si verificano 2 volte più spesso di quelle fredde. Le emolisine e le agglutinine non sono anticorpi fondamentalmente diversi: differiscono solo nella natura della loro azione. Le agglutinine agglutinano i globuli rossi e le emolisine li rendono più suscettibili al complesso processo di emolisi (complemento!). Gli autoanticorpi, fissandosi sugli eritrociti, formano un complesso eritrociti-globina. Questo complesso viene rilevato utilizzando il test dell'antiglobina di Coombs.

Prova di Coombs effettuata con siero di Coombs, per la cui preparazione il coniglio viene sensibilizzato con siero umano, contro il quale nel siero di coniglio si formano anticorpi. Quando un siero così sensibilizzato agisce sugli eritrociti umani, la loro agglutinazione avviene se i recettori degli eritrociti sono occupati da anticorpi bloccanti. Poiché questi anticorpi bloccanti derivano dal siero umano, si agglutinano con il siero di coniglio sensibilizzato al plasma umano e contenente precipitine. Questa reazione è chiamata test di Coombs; per l'anemia emolitica da corpi autoimmuni (Lo tit) è quasi specifica (per dettagli vedi Maier).

In generale per le anemie emolitiche con un disturbo primario degli eritrociti, il test di Coombs è negativo e con quelli acquisiti è positivo. Tuttavia, ci sono alcune eccezioni a questa regola: un test di Coombs falso positivo si riscontra durante le crisi di anemia emolitica costituzionale e, in misura debole, anche talvolta dopo splenectomia, nell'artrite reumatica, nella sarcoidosi, dopo frequenti trasfusioni di sangue e nel lupus sistemico. eritematoso. Naturalmente, nell'anemia emolitica acquisita senza formazione di corpi autoimmuni, è negativo.

Anemia emolitica causati da organismi autoimmuni possono essere suddivisi in:
a) forme acute, subacute e croniche, nonché
b) idiopatico con eziologia sconosciuta e c) sintomatico [polmonite virale (solo agglutinine fredde), leucemia linfatica cronica, reticolosarcoma, linfosarcoma, lupus eritematoso sistemico (principalmente agglutinine calde, meno spesso fredde), sifilide (agglutinine fredde), tumori ovarici (Miescher con i dipendenti)).
c) sintomatico [polmonite virale (solo agglutinine fredde), leucemia linfatica cronica, reticolosarcoma, linfosarcoma, lupus eritematoso sistemico (principalmente agglutinine calde, meno spesso fredde), sifilide (agglutinine fredde), tumori ovarici (Miescher e collaboratori)).

Clinica dell'anemia emolitica, sviluppandosi sotto l'influenza di organismi autoimmuni, è molto vario e quindi difficilmente è possibile delineare il loro quadro clinico generale. Sono colpite allo stesso modo persone di tutte le età e di entrambi i sessi. Tuttavia, le forme idiopatiche sembrano essere più frequenti nelle donne (Sacks e Workman).

Quadro clinico della forma idiopatica varia a seconda della gravità della malattia. Nei casi cronici l'esordio è graduale, la malattia si trascina per molti anni con frequenti riacutizzazioni. La gravità dell'anemia varia a seconda del grado di emolisi. Si osservano cali di emoglobina fino al 10%; in altri casi, l'emoglobina rimane al 50-60% per lungo tempo. L'intensità della reticolocitosi e della colorazione itterica della pelle e del siero corrisponde al grado di emolisi. La bilirubina si trova molto raramente nelle urine, poiché non passa attraverso i reni, ma si osserva emoglobinuria. Nei casi cronici la milza è spesso ingrossata e può raggiungere dimensioni anche molto significative, ma in altri casi può ancora essere palpata. Raramente il fegato non è ingrandito.

Nel sangue nella maggior parte dei casi si osserva macrocitosi, negli stadi acuti sono presenti anche molti microciti, la normoblastosi e la policromasia sono raramente assenti, le leucocitosi possono arrivare a 30.000, le piastrine sono normali. In alcuni casi, tuttavia, si verifica una grave trombocitopenia. Evans spiega questi casi con la presenza simultanea di anticorpi contro le piastrine, per cui c'è sia anemia emolitica che trombocitopenia dovuta all'azione di corpi autoimmuni - sindrome di Evans. La resistenza osmotica è leggermente ridotta, ma non nella stessa misura e non in modo permanente come nell'anemia costituzionale a cellule globulari. Il test di resistenza al calore (Hegglin-Maier) dopo 6 ore può dare anche una lieve emolisi (osservazione propria), ma in misura minore rispetto all'anemia di Marchiafava. L'emosiderina si trova anche nelle urine (osservazione propria).

Il test di Coombs è un test di laboratorio eseguito influenzando l'emoagglutinazione. Si basa sulla suscettibilità degli anticorpi alle immunoglobuline e agli elementi enzimatici, nonché sulla loro capacità di agglutinare gli eritrociti rivestiti con C3 o Lg.

Diagnosi diretta di Coombs

Utilizzato per rilevare anticorpi o componenti del complemento installati all'esterno delle cellule. Il test diretto di Coombs viene eseguito come segue.

L'uso di un tale campione

La diagnosi diretta di Coombs viene utilizzata in alcuni casi, come:

• effetti trasfusionali;
• emolisi autoimmune;
• Anemia emolitica indotta da farmaci.

Test di Coombs indiretto

Questa diagnosi consente di rilevare gli anticorpi contro le cellule nel siero, che viene solitamente incubato con globuli rossi del donatore di tipo 0, e quindi viene eseguito un test diretto. La diagnosi indiretta di Coombs viene utilizzata nei seguenti casi:

Come prepararsi per l'analisi

Ci sono alcune regole per la preparazione all'esame.

1. Se il paziente è un neonato, i genitori devono essere consapevoli che il test aiuterà a diagnosticare la malattia emolitica del neonato.
2. Se il paziente sospetta un'anemia emolitica, gli si dovrebbe spiegare che l'analisi gli permetterà di scoprire se è causata da disturbi protettivi, farmaci o altri fattori.
3. Il test di Coombs, diretto e indiretto, non impone alcuna restrizione sull'alimentazione o sulla dieta.
4. È necessario informare il paziente che l'esame richiederà il prelievo di sangue da una vena e anche dirgli esattamente quando verrà eseguita la venipuntura.
5. Dovresti anche avvertire della probabilità di sensazioni spiacevoli durante il periodo di applicazione della benda sul braccio e sulla procedura stessa.
6. I farmaci che possono influenzare il risultato del campione devono essere sospesi.

Questi farmaci includono:

• "Streptomicina";
• "Metildopa";
• "Procainamide";
• sulfamidici;
• "Melfalan";
• "Chinidina";
• "Rifampicina";
• "isoniazide";
• cefalosporine;
• "Idralazina";
• "Clorpromazina";
• "Levodopa";
• "Tetraciclina";
• "Difenilidantoina";
• "etosuccimide";
• "Penicillina";
• acido mefenamico.

Il prelievo di sangue viene effettuato al mattino a stomaco vuoto.

Come si svolge l'evento

Il test di Coombs viene eseguito nel seguente ordine:

1. Quando si esegue la diagnostica in un paziente adulto, dopo la venipuntura, il sangue viene prelevato in provette con EDTA (etilendiamminotetraacetato).
2. Il sangue del neonato viene prelevato dal cordone ombelicale in un recipiente contenente EDTA.
3. L'area della puntura viene premuta con un batuffolo di cotone fino all'arresto del sanguinamento.
4. Se appare un livido nel sito di puntura venosa, vengono prescritti impacchi caldi.
5. Dopo il prelievo del sangue, il paziente può tornare ad assumere farmaci.
6. È necessario informare i genitori del neonato che potrebbero essere necessarie analisi secondarie per monitorare la dinamica dell'anemia.

Vantaggi del test di Coombs

Tale ricerca presenta alcuni vantaggi, vale a dire:

Svantaggi dell'analisi

Il test di Coombs positivo è un metodo di esame piuttosto laborioso, che richiede una caratteristica accuratezza di esecuzione. Quando lo usi, potresti incontrare alcune difficoltà, soprattutto legate all'interpretazione degli effetti debolmente positivi.

È stato accertato che reazioni errate negative o debolmente positive durante la produzione dei test di Coombs possono essere la conseguenza di un lavaggio cellulare insoddisfacentemente attivo, dell'indebolimento del reagente antiglobulina a causa di residui di siero, nonché di collegamenti con superfici non grasse su cui l'antiglobulina può essere riparato, perdendo così la sua efficacia.

Il test di Coombs presenta un altro inconveniente: la bassa stabilità del reagente antiglobulina, la cui acquisizione e conservazione hanno caratteristiche individuali, che allo stesso modo rende difficile valutare numericamente l'effetto del siero antiglobulina sull'emoagglutinazione.

Malattie che possono essere rilevate durante l'esame

La diagnostica Coombs consente di rilevare alcuni tipi di malattie, come:

• malessere emolitico del neonato;
• varie reazioni trasfusionali;
• emolisi autoimmune;
• Anemia emolitica indotta da farmaci.

Oggi, il test di Coombs è considerato un sistema di analisi del sangue abbastanza popolare sia per gli adulti che per i neonati. Permette di identificare molte malattie diverse.

La malattia emolitica dei neonati di solito si sviluppa quando la madre e il feto sono incompatibili con gli antigeni dei sistemi Rh e AB0 e molto meno spesso con gli antigeni dei sistemi Kell, Duffy e MNS.

1. Malattia emolitica dei neonati causata dall'incompatibilità degli antigeni del sistema Rh.La produzione di anticorpi contro gli antigeni del sistema Rh (a differenza degli anticorpi contro gli antigeni del sistema AB0) avviene solo quando questo antigene entra nel sangue della madre. Durante una gravidanza normale, il numero di globuli rossi fetali che entrano nel sangue della madre è troppo piccolo e l'immunizzazione non avviene. Una quantità sufficiente di sangue fetale per l'immunizzazione può entrare nel sangue della madre durante la terza fase del travaglio. Durante la prima gravidanza, la malattia emolitica del neonato, causata dall'incompatibilità degli antigeni del sistema Rh, si verifica solo nei casi in cui la madre ha ricevuto in precedenza trasfusioni di sangue incompatibili con gli antigeni del sistema Rh, oppure è stata immunizzata durante l'amniocentesi. Al contrario, in caso di incompatibilità degli antigeni del sistema ABO, la malattia emolitica del neonato può manifestarsi anche durante la prima gravidanza, poiché gli anticorpi contro questi antigeni sono costantemente presenti nel sangue della madre. Molto spesso, con la malattia emolitica dei neonati, causata dall'incompatibilità degli antigeni del sistema Rh, vengono prodotti anticorpi contro l'antigene D. Questo antigene è assente in circa il 15% dei bianchi e nel 7% dei neri. Altri antigeni del sistema Rh che possono causare la malattia emolitica del neonato includono gli antigeni C ed E.

UN. Quadro clinico.Il feto sviluppa anemia emolitica, che nei casi più gravi porta a insufficienza cardiaca, idropisia e morte. L'iperbilirubinemia non si verifica nel feto, poiché la bilirubina penetra liberamente nella placenta ed entra nel sangue della madre. Nel neonato, al contrario, il pericolo maggiore è l'iperbilirubinemia, poiché può portare all'encefalopatia da bilirubina. Talvolta si osserva epatosplenomegalia. La diagnosi differenziale viene effettuata con epatite, infezioni, malattie metaboliche e malattia emorragica dei neonati.

B. Diagnostica

1) Nelle prime fasi della gravidanza, viene determinato il gruppo (secondo i sistemi AB0 e Rh) del sangue della donna incinta e nel suo siero vengono esaminati gli anticorpi contro gli antigeni eritrocitari rari. Se la madre è Rh negativa, viene determinata l'affiliazione Rh del padre del bambino. Durante la gravidanza, il titolo degli anticorpi anti-Rhesus viene regolarmente determinato.

2) Quando compaiono anticorpi anti-Rhesus, viene valutata l'intensità dell'emolisi. Per fare ciò, viene eseguita l'analisi spettrofotometrica del liquido amniotico ottenuto durante l'amniocentesi.

3) In caso di incompatibilità degli antigeni del sistema Rh, i livelli di emoglobina e bilirubina nel sangue del cordone ombelicale vengono determinati immediatamente dopo la nascita.

4) Viene eseguito un test di Coombs diretto con i globuli rossi del neonato. Se il test è positivo, viene determinato a quali antigeni eritrocitari sono diretti gli anticorpi. Se nel sangue materno non sono presenti anticorpi contro questi antigeni, scopri perché il test diretto di Coombs è positivo.

V. Trattamento nel periodo prenatale.Il trattamento intensivo precoce riduce il rischio di complicanze.

1) Se il titolo degli anticorpi anti-Rhesus nella madre supera 1:8, viene eseguita l'amniocentesi. Per determinare indirettamente il livello di bilirubina e valutare la gravità dell'emolisi, la densità ottica del liquido amniotico viene misurata ad una lunghezza d'onda di 450 nm.

2) L'elevata densità ottica del liquido amniotico a metà e alla fine della gravidanza indica una grave emolisi nel feto. In questo caso, è necessario condurre un esame del sangue generale del feto. Si ottiene mediante cordocentesi. Una diminuzione dell'ematocrito al 18% o meno è un'indicazione per la trasfusione intrauterina di globuli rossi di sangue Rh negativo del gruppo 0. Se necessario, la trasfusione di globuli rossi viene ripetuta ogni 2-3 settimane. Trasfusioni ripetute di globuli rossi possono sopprimere parzialmente o completamente l'eritropoiesi nel feto.

3) Se lo sviluppo fetale è appropriato per l'età gestazionale, viene eseguito un taglio cesareo tra la 33a e la 36a settimana di gravidanza.

4) Immediatamente dopo la nascita del bambino, viene determinato il suo gruppo sanguigno e viene eseguito un test di Coombs diretto. Dopo la trasfusione intrauterina di globuli rossi, il sangue del neonato può diventare Rh negativo.

5) Se il test di Coombs diretto del neonato risulta positivo, potrebbe essere necessaria una exsanguinotrasfusione.

G. Trattamento di un neonato.Per l'iperbilirubinemia si utilizzano la fototerapia e la exsanguinotrasfusione.

1) La fototerapia utilizza la luce blu, che aiuta a convertire la bilirubina in prodotti idrosolubili. La fototerapia viene utilizzata in aggiunta alla trasfusione di sangue sostitutivo, prima e dopo. La fototerapia non dovrebbe sostituire le misure diagnostiche volte a identificare le cause dell'ittero. Durante la fototerapia, è necessario determinare regolarmente i livelli di bilirubina sierica, poiché l'intensità dell'ittero nei neonati non corrisponde alla gravità dell'emolisi. Per evitare danni alla retina durante la terapia della luce, gli occhi del bambino vengono coperti con una benda.

2) Scambio di trasfusioni di sangue

UN) Idrope fetale.Viene eseguita una trasfusione sostitutiva del sangue con una singola sostituzione del bcc o vengono trasfusi globuli rossi.

B) Livello di bilirubinapiù di 20 mg% nei nati a termine e 12-16 mg% nei neonati prematuri - la trasfusione sostitutiva viene eseguita con doppia sostituzione del bcc.

3) In caso di anemia (livello di emoglobina inferiore a 7-10 g%) dopo trasfusione intrauterina o intersanguinea, può essere necessaria una trasfusione di globuli rossi. I globuli rossi rivestiti con anticorpi anti-Rh vengono talvolta distrutti lentamente, il che può portare ad anemia in assenza di iperbilirubinemia 3-6 settimane dopo la nascita.

4) Immunizzazione passiva della madre.Il rischio di immunizzazione con antigeni del sistema Rh è significativamente ridotto se ad una madre Rh negativa viene somministrata immunoglobulina anti-Rh 0 (D). La prima volta viene prescritto alla fine del secondo trimestre di gravidanza, la seconda nelle prime 72 ore dopo la nascita di un bambino Rh positivo. L'immunoglobulina anti-Rh 0 (D) deve essere somministrata anche dopo un aborto e l'amniocentesi. Una fiala di immunoglobulina anti-Rh 0 (D) (300 μg) neutralizza circa 15 ml di sangue Rh positivo. Se si sospetta che un volume maggiore di sangue fetale sia entrato nel sangue materno, viene eseguito uno striscio Kleihauer-Betke (per rilevare i globuli rossi fetali nel sangue materno) e una dose adeguata di immunoglobulina anti-Rh 0 (D). viene amministrato.

2. Malattia emolitica dei neonati causata dall'incompatibilità degli antigeni del sistema ABO,di solito si verifica nei bambini con gruppo sanguigno A o B, nati da madri con gruppo sanguigno 0. Il siero di madri con gruppo sanguigno 0 contiene isoemoagglutinine per gli antigeni eritrocitari A e B. Lo sviluppo della malattia emolitica del neonato non può essere previsto dal titolo di questi anticorpi nella madre.

UN. Quadro clinico.La malattia emolitica può verificarsi anche in un bambino nato dalla prima gravidanza. Anemia grave e idrope sono rare nei neonati a termine. A volte l'ittero compare nel primo giorno di vita, ma l'emolisi è molto meno pronunciata rispetto all'incompatibilità con gli antigeni del sistema Rh.

V. Trattamentomirato a ridurre l’iperbilirubinemia. La fototerapia riduce la necessità di exsanguinotrasfusione, che attualmente viene eseguita solo in 1 neonato su 3000 con malattia emolitica causata da incompatibilità ABO. Se è necessaria una trasfusione di sangue, utilizzare globuli rossi del gruppo 0 con un basso titolo di anticorpi contro gli antigeni A e B.

Applicare 1 goccia abbondante di siero O(I), A(II), B(III) su una piastra o un vetrino utilizzando pipette (diverse!). Dopo aver annotato l'ora, utilizzare una bacchetta di vetro pulita o un angolo pulito di un vetrino per unire gocce di siero con gocce di sangue. La determinazione dura 5 minuti, agitando la piastra, quindi aggiungere ad ogni miscela di gocce 1 goccia di soluzione salina e valutare i risultati. È meglio se il siero è disponibile in 2 serie diverse. I risultati del gruppo sanguigno devono corrispondere in entrambi i lotti di siero.

Valutazione dei risultati dell'isoemoagglutinazione:

isoemoagglutinazione. Se la reazione è positiva, nella miscela compaiono minuscoli granelli rossi di globuli rossi adesivi. I chicchi si fondono in chicchi più grandi e questi ultimi in scaglie. Il siero è quasi scolorito;

se la reazione è negativa la miscela rimane uniformemente rosa per 5 minuti e non si rilevano granelli;

Quando si lavora con 3 sieri dei gruppi O(I), A(II), B(III), sono possibili 4 combinazioni di reazioni:

1. se tutti e 3 i sieri hanno dato una reazione negativa, cioè la miscela è uniformemente colorata di rosa - questo è il gruppo sanguigno O(I);

   se solo il siero del gruppo A(II) ha dato una reazione negativa e i sieri O(I) e B(III) hanno dato una reazione positiva, cioè sono apparsi dei grani - questo è il gruppo sanguigno A(II);

   il siero del gruppo B(II) ha dato una reazione negativa e i sieri dei gruppi O(I) e A(II) hanno dato una reazione positiva: questo è il gruppo sanguigno B(III).

tutti e 3 i sieri hanno dato reazioni positive: il sangue testato era del gruppo AB(IV). In questo caso, viene effettuato uno studio con il siero del gruppo AB(IV).

Nota! Le gocce di sangue da analizzare dovrebbero essere 5-10 volte più piccole delle gocce di siero.

Errori di isoemoagglutinazione.

Mancata esecuzione dell'agglutinazione dove dovrebbe essere e presenza di agglutinazione dove non dovrebbe essere. Ciò può essere dovuto a un titolo sierico debole e a una scarsa agglutinazione dei globuli rossi.

Presenza di agglutinazioni dove non dovrebbero essercene- Questa è la pseudoagglutinazione, quando pile di globuli rossi formano “colonne di monete”. Agitare la piastra o aggiungere soluzione salina li distrugge.

Panagglutinazione, quando il siero unisce tutti i globuli rossi, compresi quelli del proprio gruppo sanguigno. Entro il 5° minuto i segni di agglutinazione scompaiono.

Esiste anche la cosiddetta panagglutinazione a freddo, quando i globuli rossi si uniscono a causa della bassa temperatura dell'aria (sotto i 15 ° C) nella stanza.

In tutti questi casi, viene eseguita una reazione ripetuta o utilizzando globuli rossi standard.

Determinazione del sangue Rh

Per determinare lo stato Rh, cioè per rilevare la presenza o l'assenza di antigeni del sistema Rh nel sangue delle persone, vengono utilizzati sieri anti-Rh standard (reagenti), di diversa specificità, cioè contenenti anticorpi contro vari antigeni di questo sistema. Per determinare l'antigene Rh 0 (D), il siero anti-Rhesus viene spesso utilizzato con l'aggiunta di una soluzione di gelatina al 10% oppure viene utilizzato un reagente anti-Rhesus standard preparato in anticipo con una soluzione di poliglucina al 33%. Per ottenere risultati di ricerca più accurati, nonché per identificare antigeni di altri sistemi sierologici, viene utilizzato il test di Coombs (è molto sensibile anche nel determinare la compatibilità del sangue trasfuso). Per la ricerca viene utilizzato sangue nativo o sangue preparato con qualche conservante. In questo caso, il sangue deve essere lavato dal conservante con un volume dieci volte maggiore di soluzione isotonica di cloruro di sodio. Quando si determina lo stato Rh- Rh 0 (D) devono essere utilizzati due campioni di siero o reagente anti-Rhesus di due serie diverse e contemporaneamente globuli rossi standard ottenuti da sangue da campioni Rh positivi (Rh +) e Rh negativi (Rh -) gli individui dovrebbero essere utilizzati per il controllo. Quando si determinano altri isoantigeni, è necessario utilizzare di conseguenza i globuli rossi di controllo che contengono o mancano l'antigene contro il quale sono diretti gli anticorpi nel siero standard.

Le agglutinine termiche parziali sono il tipo più comune di anticorpi che possono causare lo sviluppo di anemia emolitica autoimmune. Questi anticorpi appartengono alle IgG, raramente alle IgM, alle IgA.

PROVA DI COOMBS

Test di Coombs: introduzione. Il test di Coombs è un metodo diagnostico di laboratorio basato sulla reazione di emoagglutinazione.

Il metodo principale per diagnosticare l’anemia emolitica autoimmune è il test di Coombs. Si basa sulla capacità degli anticorpi specifici delle immunoglobuline (soprattutto IgG) o dei componenti del complemento (soprattutto S3) di agglutinare gli eritrociti rivestiti con IgG o S3.

Il legame di IgG e C3b agli eritrociti è osservato nell'anemia emolitica autoimmune e nell'anemia emolitica immunitaria indotta da farmaci. Test di Coombs diretto. Il test diretto di Coombs viene utilizzato per rilevare anticorpi o componenti del complemento fissati sulla superficie dei globuli rossi. Viene effettuato come segue:

Per ottenere anticorpi contro le immunoglobuline umane (siero antiglobulina) o il complemento (siero anticomplementare), l'animale viene immunizzato con siero umano, immunoglobuline o complemento umano. Il siero ottenuto dall'animale viene purificato dagli anticorpi verso altre proteine.

I globuli rossi del paziente vengono lavati con soluzione salina per rimuovere completamente il siero, che neutralizza gli anticorpi contro le immunoglobuline e il complemento e può causare un risultato falso negativo.

Se gli anticorpi o i componenti del complemento vengono fissati sulla superficie dei globuli rossi, l'aggiunta di antiglobulina o di siero anti-complemento provoca l'agglutinazione dei globuli rossi.

Il test diretto di Coombs viene utilizzato nei seguenti casi:

Emolisi autoimmune.

Malattia emolitica dei neonati.

Anemia emolitica immunitaria indotta da farmaci.

Reazioni trasfusionali emolitiche. Test di Coombs indiretto. Il test indiretto di Coombs rileva gli anticorpi contro i globuli rossi nel siero. Per fare ciò, il siero del paziente viene incubato con globuli rossi di donatori del gruppo 0, quindi viene eseguito un test di Coombs diretto.

Il test di Coombs indiretto viene utilizzato nei seguenti casi:

Determinazione della compatibilità individuale del sangue del donatore e del ricevente.

Rilevazione di alloanticorpi, compresi gli anticorpi che causano reazioni trasfusionali emolitiche.

Determinazione degli antigeni eritrocitari di superficie nella genetica medica e nella medicina legale.

Conferma di gemelli identici durante il trapianto di midollo osseo.

Per condurre un test biologico, il sangue inizia a essere trasfuso il più rapidamente possibile (preferibilmente in un flusso). Dopo la trasfusione di 25 ml di sangue, il tubo del sistema viene bloccato con una fascetta. Poi c'è una pausa di 3 minuti, durante la quale vengono monitorate le condizioni del ricevente. Per eseguire un test biologico, vengono iniettati 25 ml di sangue tre volte. Al termine del test (dopo la trasfusione dei primi 75 ml di sangue in dosi frazionarie di 25 ml ad intervalli di 3 minuti), il sistema viene adattato alla velocità di trasfusione richiesta. Quando si trasfonde più di una bottiglia di sangue ad un paziente, è necessario rimuovere l'ago dalla vena. In questo caso l'ago viene rimosso dalla provetta della fiala in cui è defluito il sangue e inserito nella fiala successiva. In questo momento il tubo del sistema (gomma o plastica) viene bloccato con una fascetta. Se durante una trasfusione di sangue si rende necessario somministrare per via endovenosa qualsiasi altro farmaco al ricevente, ciò avviene perforando il tubo di gomma del sistema. Le forature del tubo di plastica non sono accettabili poiché non cadono. Dopo ogni trasfusione di sangue, il paziente deve essere monitorato per identificare ed eliminare tempestivamente possibili complicanze, comprese le reazioni allergiche. 2 ore dopo la fine della trasfusione di sangue, deve essere misurata la temperatura corporea. Se aumenta, la misurazione deve essere ripetuta ogni ora per le 4 ore successive. Altrettanto importante è il monitoraggio della minzione e della composizione delle urine, che permette di stabilire la presenza di una reazione tossica post-trasfusionale. L'insorgenza di oliguria e anuria dopo la trasfusione di sangue, la presenza di cellule del sangue e proteine ​​nelle urine sono un'indicazione diretta dello sviluppo dell'emolisi post-trasfusionale.